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1、12植物基因工程载体及其构建植物基因工程载体及其构建植物遗转化方法和技术植物遗转化方法和技术3转化体的筛选与检测转化体的筛选与检测4应用基因工程改良植物性状应用基因工程改良植物性状5转基因植物的环境释放及生物安全性问题转基因植物的环境释放及生物安全性问题1中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室思思 考考 讨讨 论论2、什么叫、什么叫DNA克隆？克隆？cDNA克隆与基因组克克隆与基因组克隆有何不同？隆有何不同？3、基因工程安全措
2、施？、基因工程安全措施？1、农杆菌法构建转基因植物的原理？、农杆菌法构建转基因植物的原理？2中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建1.1 1.1 植物基因工程载体种类植物基因工程载体种类目的基因克隆载体。目的基因克隆载体。是由多拷贝的大肠杆菌（是由多拷贝的大肠杆菌（E.coliE.coli）小质粒为载体，其功能是保存和克隆目的基因。小质粒为载体，其功能是保存和克隆目的基因。中
3、间克隆载体。中间克隆载体。是大肠杆菌质粒插入是大肠杆菌质粒插入T-DNAT-DNA片段及目的基片段及目的基因、标记基因等构建而成，是构建中间表达载体的基础因、标记基因等构建而成，是构建中间表达载体的基础质粒。质粒。中间表达载体。中间表达载体。是含有植物特异启动子和转录终止子的是含有植物特异启动子和转录终止子的中间载体，其功能是作为构建转化载体的质粒。中间载体，其功能是作为构建转化载体的质粒。卸甲载体。卸甲载体。是解除武装是解除武装TiTi质粒或质粒或RiRi质粒，其功能是作为质粒，其功能是作为构建转化载体的受体质粒。构建转化载体的受体质粒。植物基因转化载体。植物基因转化载体。是最后用于目的基因
4、导入植物细胞是最后用于目的基因导入植物细胞的载体，又称为工程载体。的载体，又称为工程载体。3中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室1.2 1.2 植物基因工程受体系统植物基因工程受体系统1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建原生质体。原生质体。外源外源DNA易导入、基因型一致、适合各易导入、基因型一致、适合各种转化方法、遗传稳定性差、培养技术难度大。种转化方法、遗传稳定性差、培养技术难度大。愈伤组织。愈伤组织。外
5、源外源DNA易导入、适合各种转化方法、易导入、适合各种转化方法、可继续扩繁、遗传稳定性差、嵌合体高。可继续扩繁、遗传稳定性差、嵌合体高。种质系统。种质系统。外源外源DNA易导入、可简化或缩短育种纯易导入、可简化或缩短育种纯化过程、受季节限制。化过程、受季节限制。胚状体。胚状体。外源外源DNA易导入、变异小。易导入、变异小。直接分化芽。直接分化芽。变异小、操作简单周期短、有嵌合体。变异小、操作简单周期短、有嵌合体。4中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种
6、与栽培国家林业局重点实验室1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建1.3 1.3 根癌农杆菌根癌农杆菌TiTi质粒的结构与功能质粒的结构与功能T-DNA区区细胞分胞分类素素合成基因合成基因冠冠瘿碱碱代代谢基因基因Vir区区复制起始区复制起始区LB冠冠瘿碱碱合成基因合成基因RB生生长素素合成基因合成基因根癌农杆菌，含有根癌农杆菌，含有根癌农杆菌，含有根癌农杆菌，含有TiTi质粒，质粒，质粒，质粒，能诱导被侵染的植物细胞能诱导被侵染的植物细胞能诱导被侵染的植物细胞能诱导被侵染的植物细胞形成肿瘤，即诱发形成肿瘤，即诱发形成肿瘤，即诱发形成肿瘤，即诱发冠瘿碱冠瘿碱发根农杆菌，含有发根农杆菌
7、，含有发根农杆菌，含有发根农杆菌，含有RiRi质粒，质粒，质粒，质粒，能诱导被侵染的植物细胞能诱导被侵染的植物细胞能诱导被侵染的植物细胞能诱导被侵染的植物细胞产生毛发状根产生毛发状根产生毛发状根产生毛发状根在植物基因转化上应用最多的是根癌农杆菌在植物基因转化上应用最多的是根癌农杆菌TiTi质粒质粒5中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建T-DNA区。是农杆菌侵染植物细胞时，从
8、区。是农杆菌侵染植物细胞时，从Ti质粒质粒上切割下来转移到植物细胞的一段上切割下来转移到植物细胞的一段DNA，该，该DNA片段上的基因与肿瘤形成有关。片段上的基因与肿瘤形成有关。Vir区。即毒性区，又称致瘤区域，其长度约区。即毒性区，又称致瘤区域，其长度约35kb。Con区。该区段上存在着与细菌间接合转移的有区。该区段上存在着与细菌间接合转移的有关基因，调控关基因，调控Ti质粒在农杆菌之间的转移。质粒在农杆菌之间的转移。Ori区。该区段基因调控区。该区段基因调控Ti质粒的自我复制，故质粒的自我复制，故称为复制起始区。称为复制起始区。6中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业
9、科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建1.4 Ti1.4 Ti质粒基因转化的原理质粒基因转化的原理根癌农杆菌根癌农杆菌Ti质粒介导的转化过程主要包括：质粒介导的转化过程主要包括：细菌在植物敏感细胞上的吸附细菌在植物敏感细胞上的吸附农杆菌中农杆菌中Ti质粒上的质粒上的Vir区基因被激活区基因被激活T-DNA切割和切割和T-DNA复合物形成复合物形成T-DNA复合物由农杆菌进入植物细胞复合物由农杆菌进入植物细胞T-DNA以单或多拷贝随机整
10、合到植物基因组并以单或多拷贝随机整合到植物基因组并进行表达。进行表达。7中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建8中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建9中南
11、林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建植物细胞受伤植物细胞受伤产生酚类物质产生酚类物质（乙酰丁香酮）（乙酰丁香酮）激活根癌农杆菌激活根癌农杆菌受体受体virA激活激活virG激活诱导其他基因表达激活诱导其他基因表达T-DNA单链释放单链释放T-DNA单链与与VirD2结合合T-DNA进入染色体入染色体信号传递信号传递诱导表达诱导表达VirD1、VirD2协助助在在VirD2、Vi
12、rD4和和VirB作用下作用下10中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建1.5 Ti1.5 Ti质粒的改造与载体构建质粒的改造与载体构建多克隆多克隆位点位点双元载体双元载体11中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点
13、实验室1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建1.5 1.5 1.5 1.5 植物遗传转化中常用的选择标记基因及报告基因植物遗传转化中常用的选择标记基因及报告基因植物遗传转化中常用的选择标记基因及报告基因植物遗传转化中常用的选择标记基因及报告基因1.5.11.5.11.5.11.5.1选择标记选择标记选择标记选择标记磷酸新霉素转移酶基因（磷酸新霉素转移酶基因（npt）。由它编码的）。由它编码的产物氨基葡萄糖苷磷酸转移酶对某些氨基葡萄糖产物氨基葡萄糖苷磷酸转移酶对某些氨基葡萄糖苷类抗生素如卡那霉素、庆大霉素等有抗性。苷类抗生素如卡那霉素、庆大霉素等有抗性。潮霉素磷酸转移酶基因（潮霉素
14、磷酸转移酶基因（HPT）。通过酶促磷酸）。通过酶促磷酸化作用使潮霉素发生磷酸化而失活，因此在含潮化作用使潮霉素发生磷酸化而失活，因此在含潮霉素霉素B的培养基中，含有该标记基因的植株能存的培养基中，含有该标记基因的植株能存活，不含则死亡。活，不含则死亡。其他选择标记。其他选择标记。12中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建1.5.2 1.5.2 1.5.2 1.5.2 报告基因
15、报告基因报告基因报告基因报告基因报告基因 Reporter gene，是编码一种易于检测蛋白质，是编码一种易于检测蛋白质或酶的基因，通过它的瞬时及稳定表达来检测目或酶的基因，通过它的瞬时及稳定表达来检测目的基因是否转化成功，起报告作用。的基因是否转化成功，起报告作用。-葡萄糖酸酶基因（葡萄糖酸酶基因（gusgus），来自大肠杆菌，在），来自大肠杆菌，在一定条件下与其底物一定条件下与其底物X-Glucuionic acidX-Glucuionic acid作用会作用会使有使有GUSGUS活性的细胞染成蓝色。活性的细胞染成蓝色。13中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大
16、学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室1、植物基因工程、植物基因工程载体及其构建体及其构建绿色荧光蛋白基因（绿色荧光蛋白基因（GFPGFP），来自水母。但野生），来自水母。但野生型型GFPGFP发光较弱，甚至在某些植物中不表达，为发光较弱，甚至在某些植物中不表达，为适应在植物研究中的应用，已有许多改造的适应在植物研究中的应用，已有许多改造的gfpgfp可满足研究的需要。可满足研究的需要。冠瘿碱合成酶基因。冠瘿碱合成酶基因。nosnos和和ocsocs存在于农杆菌存在于农杆菌T-T-DNADN
17、A上，因其启动子是真核型，在农杆菌中不表上，因其启动子是真核型，在农杆菌中不表达，达，故通过检测转化体中冠瘿碱的存在可确定故通过检测转化体中冠瘿碱的存在可确定外源基因的表达。外源基因的表达。花青素合成有关的基因。花青素合成有关的基因。14中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室2、植物、植物遗转化方法和技化方法和技术2.1 2.1 2.1 2.1 载体转化载体转化载体转化载体转化植物受体材料植物受体材料（植物细胞、组织、器官等）
18、（植物细胞、组织、器官等）含植物转化载体的农杆菌菌液含植物转化载体的农杆菌菌液浸染（浸染（10-20min）共培养（共培养（2-4h）选择诱导分化选择诱导分化（培养基（培养基+选择压选择压+抑菌剂，约抑菌剂，约4周）周）多次筛选培养多次筛选培养生根培养生根培养外源基因组织化学检测、外源基因组织化学检测、分子检测分子检测转基因植株转基因植株田间试验、遗传分析、形状鉴定田间试验、遗传分析、形状鉴定根癌根癌农杆菌杆菌Ti质粒介粒介导基因基因转化化15中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实
19、验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室2、植物、植物遗转化方法和技化方法和技术2.2 2.2 2.2 2.2 直接转化直接转化直接转化直接转化采用基因枪法获得转基因植物采用基因枪法获得转基因植物16中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室2、植物、植物遗转化方法和技化方法和技术PEG(PEG(聚乙二醇聚乙二醇)法法，细胞融合剂，是外源，细胞融合剂，是外源DNADNA形成形成可被植物原生质体主动吸收的可被植物原生
20、质体主动吸收的DNADNA沉淀。沉淀。电激法电激法，利用高压电脉冲作用，使原生质膜的结，利用高压电脉冲作用，使原生质膜的结构改变并形成可逆性的开闭通道，从而使原生质构改变并形成可逆性的开闭通道，从而使原生质体易吸收外源体易吸收外源DNADNA。显微注射转化法显微注射转化法，利用显微注射仪将外源，利用显微注射仪将外源DNADNA直直接注入受体细胞的细胞核或细胞质中。接注入受体细胞的细胞核或细胞质中。其他转化方法，其他转化方法，超声波、脂质体超声波、脂质体等等17中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培
21、国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室2、植物、植物遗转化方法和技化方法和技术2.3 2.3 2.3 2.3 种质系统介导转化种质系统介导转化种质系统介导转化种质系统介导转化借助植物自身的生殖系统以及细胞结构借助植物自身的生殖系统以及细胞结构实现转化，转化受体细胞通常是受精卵、实现转化，转化受体细胞通常是受精卵、子房、花粉粒、幼穗或种胚等子房、花粉粒、幼穗或种胚等主要方法有花粉管通道、生殖细胞浸泡主要方法有花粉管通道、生殖细胞浸泡法和子房注射法等法和子房注射法等18中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重
22、点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室19中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室3、转化体的化体的筛选与与检测3.1 3.1 3.1 3.1 转化体的选择和筛选转化体的选择和筛选转化体的选择和筛选转化体的选择和筛选通常我们将导入外源通常我们将导入外源DNA分子后能稳定存在的受体分子后能稳定存在的受体细胞称为细胞称为转化子转化子，而含有，而含有重组重组DN
23、A分子的转化子称分子的转化子称为为重组子重组子。为获得所需的基因或特异为获得所需的基因或特异序列，需从细胞中分离得序列，需从细胞中分离得到目的基因与载体到目的基因与载体DNA重重组，并用适当方法在宿主组，并用适当方法在宿主细胞中表达，扩增得到大细胞中表达，扩增得到大量相同的量相同的DNA片段，称为片段，称为DNA克隆克隆，亦称，亦称分子克隆分子克隆。20中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室插插入入失失活活法法筛筛选选转转化化
24、子子21中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室22中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室3、转化体的化体的筛选与与检测3.2 3.2 3.2 3.2 外源基因整合的检测外源基因整合的检测外源基因整合的检测外源基因整合的检测聚合酶链式反应法（聚合酶链式反应法（P
25、CRPCR法）法）SouthernSouthern杂交杂交染色体染色体DNADNA原位杂交原位杂交23中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室24中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室3、转化体的化体的筛选与与检测原位杂交法筛选原位杂交法筛选DNA重组体重组体图
26、解图解复印至硝酸复印至硝酸纤维素膜上纤维素膜上用用NaOH菌体裂菌体裂解解DNA变性变性杂交杂交放射自显影放射自显影32P-cDNA与放射性与放射性cDNA杂杂交的菌落的斑点交的菌落的斑点细菌菌落细菌菌落单链单链DNA结结合到膜上合到膜上25中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室3、转化体的化体的筛选与与检测3.3 3.3 3.3 3.3 转录水平的检测转录水平的检测转录水平的检测转录水平的检测NorthernNorthern
27、杂交杂交：提取总提取总RNA；分离；分离mRNA；制备；制备RNA探针；探针；Northern杂交杂交RT-PCRRT-PCR法法：提取提取RNA；反转录；反转录；PCR扩增扩增RNaseRNase保护分析保护分析26中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室3、转化体的化体的筛选与与检测3.4 3.4 3.4 3.4 蛋白质水平的检测蛋白质水平的检测蛋白质水平的检测蛋白质水平的检测WesternWestern杂交法杂交法，组织或
28、细胞的蛋白质提取，组织或细胞的蛋白质提取物物SDS-PAGESDS-PAGE后，转移至硝酸纤维膜等固相后，转移至硝酸纤维膜等固相基质上，选用适当的抗体作为探针，与膜基质上，选用适当的抗体作为探针，与膜上的靶分子发生特异性结合，然后染色或上的靶分子发生特异性结合，然后染色或放射自显影放射自显影ELISAELISA检测检测表达蛋白的含量测定表达蛋白的含量测定27中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室文文库库的的抗抗体体筛筛选选28
29、中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室3、转化体的化体的筛选与与检测3.5 3.5 3.5 3.5 转基因植物性状检测与遗传分析转基因植物性状检测与遗传分析转基因植物性状检测与遗传分析转基因植物性状检测与遗传分析 对经过对经过DNADNA水平、转录水平和蛋白质水平、转录水平和蛋白质水平检测确认的转基因植株，还应对其植水平检测确认的转基因植株，还应对其植物学性状进行观察、记载，结合生理生化物学性状进行观察、记载，结合生理生化分析
30、，与非转化植株比较，以判断外源基分析，与非转化植株比较，以判断外源基因在转基因植株中的表达情况。因在转基因植株中的表达情况。29中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室4、应用基因工程改良植物性状用基因工程改良植物性状4.1 4.1 4.1 4.1 果实耐贮运性状果实耐贮运性状果实耐贮运性状果实耐贮运性状30中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经
31、济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室4、应用基因工程改良植物性状用基因工程改良植物性状4.2 4.2 4.2 4.2 抗病性状抗病性状抗病性状抗病性状 目前，果树抗病基因工程已取得了较大进展，目前，果树抗病基因工程已取得了较大进展，在番木瓜、柑橘、葡萄、香蕉、杏和樱桃等果树在番木瓜、柑橘、葡萄、香蕉、杏和樱桃等果树上获得了抗病转基因植株。上获得了抗病转基因植株。31中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种
32、与栽培国家林业局重点实验室4、应用基因工程改良植物性状用基因工程改良植物性状4.3 4.3 4.3 4.3 抗虫性状抗虫性状抗虫性状抗虫性状32中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室4、应用基因工程改良植物性状用基因工程改良植物性状4.4 4.4 4.4 4.4 其他性状其他性状其他性状其他性状33中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种
33、与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室4、应用基因工程改良植物性状用基因工程改良植物性状4.5 4.5 4.5 4.5 转基因植物应用中存在的问题转基因植物应用中存在的问题转基因植物应用中存在的问题转基因植物应用中存在的问题转化效率低转化效率低外源基因的整合造成宿主的基因突变外源基因的整合造成宿主的基因突变外源基因的表达突变外源基因的表达突变（1 1）表达混乱）表达混乱（2 2）转基因的甲基化修饰）转基因的甲基化修饰（3 3）转基因拷贝数对表达的影响）转基因拷贝数对表达的影响（4 4）转基因失活）转基因失活34中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重
34、点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室转基因食品的检测技术，主要针对外来基因转基因食品的检测技术，主要针对外来基因或或DNA，外来蛋白质，外来蛋白质对宿主、载体、插入基因、重组对宿主、载体、插入基因、重组DNA、基因、基因表达产物分析表达产物分析食品营养成分的分析食品营养成分的分析5、转基因植物的基因植物的环境境释放及生物安全性放及生物安全性问题5.1 5.1 转基因植物的安全评价转基因植物的安全评价 对转基因植物来说，进入市场之前必须逐级经过对转基因植物来说，进入市场
35、之前必须逐级经过试验研究、中间试验、环境释放、生产性试验以及安试验研究、中间试验、环境释放、生产性试验以及安全证书的申报和审批，而每一步申报都要求提供有关全证书的申报和审批，而每一步申报都要求提供有关外源基因及其转基因作物的安全性的具体数据。外源基因及其转基因作物的安全性的具体数据。35中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室5、转基因植物的基因植物的环境境释放及生物安全性放及生物安全性问题5.2 5.2 转基因植物的环境释放转
36、基因植物的环境释放36中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室5、转基因植物的基因植物的环境境释放及生物安全性放及生物安全性问题5.3 5.3 转基因植物的标识问题转基因植物的标识问题菜籽油菜籽油菜籽油菜籽油 加工原料为加工原料为加工原料为加工原料为转基因油菜籽转基因油菜籽转基因油菜籽转基因油菜籽大豆油大豆油大豆油大豆油 加工原料为加工原料为加工原料为加工原料为转基因大豆转基因大豆转基因大豆转基因大豆我国转基因产品的标示我国转基因产品的标示我国转基因产品的标示我国转基因产品的标示免检有效期免检有效期免检有效期免检有效期20032003年年年年1212月至月至月至月至20062006年年年年1212月月月月37