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1、皮肤性病科实验室检查技术操作规范第一节皮肤组织病理检查 第二节皮肤免疫荧光检查 一、皮肤直接免疫荧光检查 二、皮肤间接免疫荧光检查 三、补体结合法 第三节皮肤试验 一、斑贴试验 二、划破试验 三、皮内试验.四、挥发性变应原（空气播散）试验 五、变应原检测体外试验 第四节玻片压诊法 第五节皮肤划痕试验 第六节 皮肤紫外线最小红斑量测定 第七节滤过紫外线检查 第八节真菌检杳 一、真菌直接镜检 二、真菌培养 第九节疥蛾检查 第十节蠕形蜻检查 第十一节阴虱检查 第十二节麻风杆菌及麻风相关检查 一、皮肤切刮涂片检查 二、组胺试验 三、出汗试验 四、立毛肌试验 第十三节淋球菌检查 第十四节衣原体检查 第十
2、五节解麻服原体检查 第十六节梅毒螺旋体检查 一、梅毒螺旋体检查 二、梅毒血清学检查 第十七节醋酸白（甲苯胺蓝）试验 第十八节口卜咻检杳 第十九节红斑狼疮细胞检查1 .将受试物质的原液或稀释于不同浓度挥发性溶媒中的稀释液，盛于小瓶或 试管中。2 .试验时用管口或瓶U接触受试者皮肤，以胶布固定。3 .经过1020min去除小瓶或试管，观察结果。【结果判定】4 .阳性反应受试处皮肤有红肿现象。5 .阴性反应受试处皮肤无明显变化。【注意事项】L避免受试液沾染皮肤。6 .观察结果时，应注意假阳性及假阴性反应。7 .应注意由原发性刺激引起的假阳性反应。五、变应原检测体外试验于体外对人血清或血浆中的变应原特
3、异性IgE抗体进行定性检测，较上述在 体试验安全、痛苦小、特异性高、操作简便。可通过放射性免疫吸附法、酶免疫 分析法和金标法检测受试者血液中的特异性IgE抗体。【适应证】1 .各型尊麻疹。2 .特应性皮炎。3 .药疹。4 .过敏性鼻炎。5 .哮喘等。【操作方法及步臊】1 .标本的收集和预处理取静脉血，分离血清或血浆。2 .严格按照所选用试剂盒说明书的步骤进行加样、反应和显色。3 .根据显色的速度和强度观察结果。【结果判定】颜色从浅到深的变化速度与颜色的深度和患者血清标本中IgE抗体或免疫球 蛋臼的滴度成比例。1 .强变态反应 在5min内很快出现较深的颜色。2 .弱变态反应出现颜色变化的时间5
4、min。3 .阴性反应颜色同阴性对照。【注意事项】1 .不能使用大量溶血和严重高血脂的血液标木。避免标本中有颗粒性物质。2 .不能凭任何单个实验结果作出最终临床诊断，只有临床医师在所有的临床 特征和实验结果的基础上才能作出最后的诊断。3 .患者摄人胆固醇后可影响血清抗体的测定水平。4 .寄生虫病患者可产生IgE抗体，使血清中的滴度升高，出现假阳性。5 .本试验为筛选试验，阴性结果并不能排除受试者对其他变应原的敏感性。第四节玻片压诊法【适应证】6 .区别毛细血管扩张、炎性红斑、血管瘤与皮下出血。寻常狼疮。3.区别色素脱失斑与贫血痣。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .将玻片用力压在皮疹
5、上10-20s o2 .观察受压皮疹。(1)毛细血管扩张、炎性红斑或血管瘤压诊后消失，而皮下出血不变。(2)寻常狼疮结节压诊后呈苹果褥颜色。(3)贫血痣压诊后白斑消失，而色素脱失斑不变。第五节皮肤划痕试验【适应证】L尊麻疹。2 .皮肤划痕症。3 .痒疹等。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .用钝器用力划过皮肤。2 .观察划过处皮肤反应，出现三联反应者为阳性。(1)第一反应i划后15s,划过处产生红色线条。(2)第二反应：划后30s,红色线条两侧发生红斑。(3)第三反应：划后划过处发生隆起，苍白色的条状风团。第六节皮肤紫外线最小红斑量测定最小红斑量(minimal erythemal
6、dose, MED)测定指能产生肉眼所见最弱红斑 所需要的紫外线照射时间或剂量，它有助于了解皮肤对所接受的紫外线的敏感程 度。【适应证】1 .对紫外线敏感的皮肤病患者，如光敏性皮炎、多形性日光疹、慢性光化性 皮炎等。2 . 了解皮肤对日光照晒的耐受程度，以选用合适的防晒护肤制剂，测定闩 光保护指数(SPF)值。【禁忌证】不合作或不能进行者。【操作方法及程序】1 .光砰高压汞灯、金属卤素灯和荧光灯管灯。发射光源应以中波紫外线(290 320nm)为主峰，功率500W。2 .照射部位应在非曝光区域皮肤照射，如背部、前胸或前臂屈侧，事先准 备好一块具有6个长方形小孔格的布，孔格约0.8cmXl. 5
7、cm,间距约0.8cm。3 .照射方法 灯源垂直于实验区皮肤，相距约25cm,把具有6个小孔格的布 平整铺在照射部位皮肤上并固定好，按阶梯式递增的时间或剂量照射各孔，照 射最短时间一般为15So4 .结果判断照射后24h在充足的自然光线下观察，以肉眼所见与孔格一致、 轮廓清楚、色泽均匀的最弱红斑所需的照射时间或剂量为最小红斑量。【注意事项】1 .最小红斑量随个体差异、皮肤色泽、照射部位、试验季节及光源的光谱和 强度等不同有较多差异，临床上应以正常人数据为对照。2 .对紫外线敏感的程度差异较大，异常敏感者照射时间较长皮肤上会出现红 肿，甚至水疱，或可遗留色素沉着，经处理后会逐渐恢复正常。第七节滤
8、过紫外线检查【适应证】1 .头癣。2 .花斑癣。3 .细菌性皮肤病如红癣等。4 .色素性皮肤病。5 .吓咻类物质的检查等。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .在紫外线灯上装上一种含氧化银的紫色石英玻璃，获得320A400nm的长 波紫外线。2 .在暗室中用这种光线照射某些皮肤病患者的头发、皮损等处，可以产生 特殊的荧光，有助于这些皮肤病的诊断和治疗。【结果判定】1 .头癣的诊断与疗效观察黄癣呈暗绿色荧光，白癣呈亮绿色荧光，黑点癣无 荧光。治疗后病发荧光消失。某些无症状头癣患者可出现阳性荧光反应。2 .花斑癣的诊断呈黄棕色荧光。3 .细菌性皮肤病的诊断红癣呈珊瑚红色荧光；腋毛癣呈暗绿色
9、荧光。4 .色素性皮肤病的诊断白瘫风边界清楚，可与其他色素减退斑相区别。5 .吓咻类物质的检查吓咻类物质可呈淡红色、红色或橙红色荧光。【注意事项】1 .避免用该灯照射患者眼部。2 .头癣患者检查前3d最好停用外用药，以免误诊。第八节真菌检查一、真菌直接镜检是一种方便、准确诊断真菌病的检测方法。此法简便易行，阳性可明确真菌 是否存在，结合临床表现可确诊皮肤真菌病，但一般不能确定致病菌种类，而且 阴性不能完全排除真菌病诊断。【适应证】各种浅部、深部真菌病。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .用钝刀刮取皮损边缘部的皮屑，或用小刀刮取变色松脆的甲屑，用拔毛镣 拔取病发，置载玻片上，加1滴10
10、%的KOH溶液，盖上盖玻片后在酒精灯上微 微加热，待榇本溶解，轻轻加压盖玻片使标本透明，然后在显微镜下观察。2 .检查时应遮去强光，先在低倍镜下观察有无真菌菌丝和抱子，然后用高倍 镜观察抱子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列等。3 .典型真菌镜检所见(1)花斑癣：短粗、两头钝圆、稍弯曲的菌丝，成堆的圆形或卵圆形厚壁的 子，有时有芽胞。(2)头癣黄癣：黄癣痂，发内抱子、鹿角状菌丝，可见气沟、气泡。白癣：断发外菌鞘由镶嵌或成堆圆形泡子组成。黑癣：发内链状抱子。(3)体股癣、手足癣：分支分隔的长菌丝。(4)甲癣：分支分隔的长菌丝，常断裂为关节抱子样。(5)念珠菌病，假菌丝、圆形或椭圆形芽胞。隐球菌
11、病：圆形或椭圆形双壁抱子，外围有一层透光荚膜，在黑色背景 下极为明亮。(7)着色芽生菌病：棕色圆形厚壁分隔抱子。暗色丝抱霉病，棕色分支分隔菌丝或酵母样细胞。(9)链状芽生菌病：链状出芽抱子。(10毛霉病：宽大菌丝，不分隔。【注意事项】1.取材应在损害活动区，如环形损害的边缘、水庖顶部，量要充足。2,体液标本应离心后取沉渣镜检。有条件者应同时进行真菌培养。3 .取材前皮损部位应尽量避免涂药。二、真菌培养目的是进一步提高病原体检出的阳性率，同时确定致病菌的种类，一旦发现 肯定的致病菌如红色毛癣菌或新型隐球菌时，诊断即可确立。但如果分离出条件 致病菌如白色念珠菌或烟曲霉时，应结合临庞进行判断。从无菌
12、部位如血液或脑 脊液中分离出条件致病菌常提示肯定的感染，但对来自于脓、痰或尿的标本则应 谨慎解释结果，单靠一次培养阳性往往不能确定诊断、有时还须结合直接镜检的 结果，因此强调直接镜检与培养检查相结合的重要性。【适应证】4 .疑似真菌感染的标本。5 .进一步确定感染真菌种类。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .在无菌操作下，将标本接种于沙氏葡萄糖琼脂(SDA),置25s27摄氏度温 箱内培养46周。2 .如怀疑有深部真菌，应同时在35s37摄氏度培养。3 .菌落出现后，应定期观察其生长情况。4 .常规分离鉴定使用的培养基为SDA斜面培养基，加0.005%氯霉素，对皮 肤癣菌，还应添加0
13、.05%放线菌酮。5 .对分离到的真菌，应结合菌落和显微镜下形态学特点将其鉴定到种。真菌 常用形态学鉴定，而酵母常以形态学和生理生化学方法结合进行鉴定。6 .常见真菌培养所见:(1)念珠菌病：奶油色酵母样菌落(2)隐球菌病：乳白色酵母样菌落，而后为浅橘黄色，质地呈黏液状。(3)抱子丝菌病：棕色至棕黑色菌落。曲霉病：黄绿色毛状菌落。(5)芽生菌病：真菌相为白色棉花样菌落，酵母相为奶油色或棕色菌落。喑色丝泡霉病：棕黑色菌落。(7)诺卡菌病：橘黄色或红色菌落，有泥土气味。【注意事项】1 .应与直接镜检结果综合进行判断。2 .严格无菌操作，避免污染。3 .提倡多管(点八多次培养，确保结果可信性。第九节
14、疥螭检查【适应证】疥疮。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .隧道墨汁试验 以蓝墨水滴在可疑有隧道处，用棉签轻揉3 0s lmin , 再用酒精棉球擦去表面墨迹，观察是否有蓝墨水渗人隧道的蓝色痕迹，间接证明 疥蛾的存在。2 .针挑法 此法常用。选取疥疮疹或隧道末端(盲端)，用6号注射针头，针口 斜面向上，从其侧旁刺入，并从底部绕过虫体，将针口稍加转动，疥虫可落入针 口内，之后轻轻挑破皮肤，出针检查疥虫。3 .皮肤刮片法适用于新鲜的炎性丘疹。先在皮损上放置少量液状石蜡(石蜡 油，也可在消毒的手术刀片上沾少许液状石蜡)，用消毒手术刀片在丘疹上平刮6 一7下，刮取丘疹顶部的角层部分，直至有细
15、小出血点为度，将刮取物移至载玻 片上，显微镜下可见疥虫、虫卵或虫屎。【结果判定】1 .在良好的光线下，活疥虫用肉眼仅可见针头大小的灰白色小点，能活动。2 .将疥虫移至有油的载玻片上，低倍显微镜下即可见疥虫。3 .如虫体被挑破，可见其中一部分。有时见椭圆形虫卵或虫屎。【注意事项】L.查见疥虫是诊断疥疮的有力证据，查见虫卵或虫屎也可作出诊断。一些时 间较长的、继发感染的或者湿疹化的疥疮查不到疥虫，根据传播和流行情况、接 触史、典型的临床症状也可作出疥疮诊断。2 .检查时应注意选择完整的未经搔抓的早期新鲜的丘疱疹或隧道(末端)，阳 性率较高。反复搔抓、挤压、感染、肿胀、湿疹化等均可破坏虫体，影响检查
16、结 果。3 .阴性也不能完全排除疥疮的诊断。第十节蠕形蛾检查【适应证】酒渣鼻等。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .挤刮法(1)选取鼻沟、颊部及歉部等皮损区，用刮刀或手挤压。(2)挤出物置于玻片上，加一滴生理盐水或50%甘油，盖上盖玻片，并轻轻压 平。(3)镜检。2 .透明胶带法(1)取透明胶带贴于鼻沟、颊部及颊部等皮损区。(2)数小时或过夜后，取下胶带贴f载玻片上，镜检。【注意事项】1 .挤刮法应避开皮损合并严重感染灶处。2 .透明胶带法对胶带过敏者、面部有急性炎症者等慎用。第十一节阴虱检查【适应证】阴虱病。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .用细密的篦子将阴毛上的阴虱梳
17、下，或用小镜子直接取下阴虱，或用眼科 剪剪下黏附有阴虱或阴虱卵的阴毛。2 .将上述标本置于载玻片上，加一滴10%KOH,在酒精灯上微加热后，于 显微镜下检查，寻找阴虱或阴虱卵。阴虱呈蟹形，有3对足，前足较小，中后组 足巨大，有粗大爪抓住阴毛。阴虱卵为铁锈色或淡红色楠圆形小粒，常斜向附贴 在阴毛上，在显微镜下可见到卵体。【注意事项】1 .由于阴虱和阴虱卵常贴附于阴毛的近根部，因此在采集阴毛标本时应在毛 干根部采集，2 .阴性也不能完全排除阴乳病的诊断。第十二节麻风杆菌及麻风相关检查一、皮肤切刮涂片检查【适应证】麻风病【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .皮肤取材法(1)取材部位皮肤经碘泗
18、、75%乙醇或碘伏消毒后，左手捏紧皮肤，使之缺血， 右手持消毒的11号手术刀切长约5 mm,深2s3mm切口。(2)以刀尖来回3-4次刮取切口边缘和底部组织液，在刀尖上见到少量组织液 时，立即涂抹在干净载玻片上成直径5s7mm圆形涂膜。(3)面部切口创面仅用消毒棉球止血5min,肢体部位可加胶布固定或用创可 贴止血。皮肤取材部位一般取4s6处，常规部位为左右睢上、左右耳垂加两处皮损，皮损应取病情最活动处。(5)取材完毕后，涂片在火焰上烘干固定，送实验室染色镜检。2 .染色方法染色时可用加温法或不加温法，加温法用时较短。(1)加温法将已固定的载玻片放在染色架上，滴加苯酚复红染液覆盖整个涂膜，用酒
19、 精灯在载玻片背面加温15min,以染液勿沸腾为度，载玻片上染液干涸时要随时 添加染液。倾去苯酚复红染液，用自来水从载玻片的一端轻轻冲洗(勿直接冲洗涂膜), 再加1%盐酸乙醇作用1530S,轻轻晃动载玻片使之脱色。如涂膜较厚，脱色 时间可稍延长，待涂膜呈淡红色为度。在玻片上加0. 3%亚甲蓝(美蓝)染液3060s,用自来水从载玻片的一 端轻轻冲洗。待载玻片干后镜检。亚甲蓝复染的时间应视涂膜的厚薄而定。涂膜 厚时染色时间应短，防止背景过深，镜检时视野透光不良，难以检出红染的抗酸 杆菌而影响镜检结果。应使涂膜的背景为浅蓝色为宜。(2)不加温法在室温条件下，在第一步染色中，滴加苯酚复红染液30min
20、,无须加温， 余染色步骤与加温法同。不加温法染色，染色条件和结果都比较稳定，值得提倡。理想的染片，应该是背景浅蓝色，在一个油镜视野内有数个炎症细胞，提示 组织液取材符合真皮深度，抗酸杆菌呈现鲜红色。3 .细菌密度标准计算Ridley推荐的一种10倍分级法，可大体反映皮损内 细菌密度，在现场防治和科研中被广泛应用。阴性：检查100个以上油镜视野未 查到菌。1十：平均100个视野查到110条菌。2十：平均10个视野查到条菌。3十：平均每个视野杳到条菌。4十：平均每个视野查到10-100条菌。5十：平均每个视野查到1001 000条菌。6十：平均每个视野查到1 000条以上菌。第一节皮肤组织病理检查
21、皮肤组织病理学改变有时可以协助临床确定诊断。由于皮肤位于体表，活检 操作较为简单，皮肤组织病理学检查可作为辅助诊断的重要手段。然而，有时组 织学改变呈非特异性，为明确诊断必须反复活检进行病理学检杳。【适应证】按皮肤病理诊断的价值依次为：1 .皮肤肿瘤、癌前期病变、病毒性皮肤病、角化性及萎缩性皮肤病、红斑鳞 屑性皮肤病等有高度诊断价值。2 .大疱性皮肤病、肉芽肿性皮肤病、代谢性皮肤病、结缔组织病、血管性皮 肤病、色素障碍性皮肤病、遗传性皮肤病、黏膜疾病等有诊断价值。3 .某些深部真菌病、皮肤黑热病、猪囊尾坳病（囊虫病）等感染性皮肤病可 找到病原体。【禁忌证】严重瘢痕体质者（尤其是特殊部位）应慎重
22、，需要征求患者同意。【操作方法及程序】1 .活检取材方法。常规消毒。（2）局部麻醉。（3用手术方法或钻孔器取材刀切法：用手术刀可取较大较深组织，适用于各种皮肤病变，尤其是 结节、肿瘤等。 钻孔法：较方便，但应用受一定限制。适用较小损害，或病变局限 于表浅处，或手术切除有困难者。削除法：用刀削除病变组织，适用于表浅增生组织，如疣状物等。2.将所取组织按常规固定、脱水、包埋、制片。必要时做组织化学、免疫组 织化学及电镜等检查。【注意事项】4.细菌密度指数（BI）的计算BI;各涂膜细菌密度（+ ）数的总和/涂膜数【注意事项】1 .取材部位要选取活动性皮损，如结节、斑块、红斑、弥漫性浸润等。2 .取材
23、的深度一定要够，一般为2s3mm,要捏紧皮损，防止出血，刀尖要 确认刮到组织液后再涂片。因取材深度不够而取组织液太少，不能形成符合规定 的涂膜是产生查菌假阴性的主要原因。3 .组织液取材勿含血液，否则会影响镜检结果，也是出现查菌假阴性的主要 原因。4 .抗酸染液一定要新鲜配制，一般勿超过1年。麻风诊断中已经有因染液过 期出现查菌假阴性而漏诊的情况。5 .染色要按规定操作方法进行，要根据涂膜的厚薄调整染色的时间。涂膜太 厚，亚甲蓝染色时间太长是涂片蓝色背景太深而出现假阴性结果的常见原因。6 .完整菌指菌体完整、染色均匀的正常形、超过1/2的短杆形及延仲形细菌。 非完整菌为菌体断裂、染色不均匀的颗
24、粒形、小于1/2的断裂形、双球形、念珠 形等。7 .细菌形态对判断麻风早期疗效和复发很有用，在疑似复发的患者的涂片 中见到较多的完整菌，则基本可确定麻风复发。经过有效治疗的患者，麻风菌均 呈现颗粒状，无完整菌存在。二、组胺试验【适应证】麻风病。【禁忌证】对所试药物高度过敏者。【操作方法及程序】1 .用碘酒、75%乙醇或碘伏消毒后，在正常和麻风皮损处分别皮内注射1 ： 1000的磷酸组胺溶液各0.1mL2 .约30s后，于正常皮肤注射处周围出现第一个红斑，直径约10mm；再过30s,在上述红斑周围出现第二个红斑，直径30s40mm,边缘弥漫；最后在红 斑中央出现风团a此为完整的三联反应。表明受试
25、皮肤的神经功能正常。3 .三联反应的原理是最初出现的红斑是皮肤毛细血管受组胺刺激而扩张所 致，最后出现的风团是继毛细血管扩张后，血浆渗出引起的局部水肿。重要的是 第二个红斑，是小动脉扩张所致。由于小动脉扩张的前提是支配其血管的末梢神 经要正常，并能通过轴突反射而传导冲动才能完成，因此特别有意义。在神经切 断，或用普鲁卡因封闭神经后，就不会有第二个红斑。麻风患者由于皮损处末梢 神经受到破坏，所支配的小动脉不能扩张，也不出现第二个红斑，称三联反应不 完整。【注意事项】1 .在炎性红斑处不宜做此试验，以免判断失误。2 .组胺三联反应的不完整，不是麻风病所特有的，许多周围神经病变都町出 现。3 .皮损
26、处的改变要与正常皮肤处对照观察。三、出汗试验【适应证】麻风病。【禁忌证】对所试药物高度过敏者。【操作方法及程序】1 .淀粉法(1)在正常皮肤和皮损处用碘酒和75%乙醇消毒后，再各涂碘酒，待干后，分 别皮内注射1 ： 1000的毛果芸香碱溶液各0. 1ml,擦干针尖处渗液，立即撒上 薄层干燥淀粉。(2)3-5min后，正常皮肤部位淀粉处出现蓝色小点或小片，表示出汗正常。(3)如果皮损处汗腺破坏或泌汗神经破坏，泌汗功能障碍，则碘无法与淀粉 发生作用，不出现蓝点或蓝色小片。2 .试纸法(1)皮内注射毛果芸香碱后，用棉球擦去针眼处渗液，2mm后，将溟酚蓝纸 按在针眼处，轻轻加压，15s后将纸取下，如有
27、出汗则在漠酚蓝纸上显示针尖或 稍大的蓝色小点。(2)此法的试验结果比较精确(3)浪酚蓝纸的制备。取艰酚蓝0.1g溶于9 5%乙醇溶液10ml内配成 1 %澳酚蓝溶液；用滴管将1 %浪酚蓝溶液滴在滤纸上，待自然干燥后成黄 色的滤纸，剪成lcmXlcm大小备用。【注意事项】宜在对侧相应或邻近的正常皮肤处作对照，皮损处的变化要与正常皮肤处仔 细观察对比。四、立毛肌试验【适应证】麻风病。【禁忌证】对所试药物高度过敏者。【操作方法及程序】1 .在正常和皮损处先以碘酒和75%乙醇消毒后，分别于皮内注射1 ： 10万 的苦味酸烟碱溶液0.1ml。2 .正常皮肤的末梢神经未受损害，立毛肌会收缩，引起鸡皮现象。
28、3 .麻风皮损因神经末梢受到破坏而无此现象。【注意事项】1 .立毛肌试验时没有鸡皮现象不是麻风皮损所特有的，也见于所有末梢神经 功能在受到阻断或损伤的情况下。2 .宜在对侧相应或邻近的正常皮肤处作对照，皮损处的变化要与正常皮肤处 仔细观察对比。第十三节淋球菌检查【适应证】淋病。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .分泌物的涂片检查主要适用于男性。(1)用灭菌生理盐水洗净尿道M o戴消毒手套后，用手指由阴茎根部向尿道口方向挤出脓液，用接种环 或棉拭子蘸取脓液，轻轻涂于载玻片上，待其自然干燥后加热固定，做革兰 染色，然后镜检。(3)在多形核白细胞内找到革兰阴性的肾形双球菌时，可明确诊断。2
29、 .淋球菌的分离培养取材。男性患者从尿道取材时，可用细小棉拭子伸人尿道2 -4cm ,轻轻 转动后取出分泌物(应略带黏膜。 女性患者取材时，先用阴道窥器暴露宫颈口，用无菌棉拭子拭去宫颈 口表面的分泌物，另取一棉拭子插入宫颈口内2cm,转动并停留10620s取 出。 直肠取材时，应将棉拭子插入肛门。检查淋球菌性咽炎时，应从扁桃体及扁桃体窝取材。对青春期前女童可采集阴道处分泌物标本。(2)标本取出后立即接种于培养基中，目前常用加入多黏菌素的血液琼脂或 巧克力琼脂培养基。(3)初次分离应使用5 % 10%CO2烛缸，培养温度以3 6c为宜，相对 湿度80%以上，培养2448h看结果。(4 )淋球菌在
30、多黏菌素B血液琼脂上经24 4 8 h培养后，可形成圆形、 凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色的菌落，边缘呈花瓣状，直径0.5.1.0cm, 用接种环触之有黏性，如继续培养，菌落体积增大，表面粗糙，边缘皱缩。3 .淋球菌的鉴定一一氧化酶试验(1)配制氧化酶试剂：0.5%1%盐酸二甲基对苯二胺水溶液。(2)将溶液滴加于可疑菌落上，观察颜色变化。也可先将试剂滴在一小张 滤纸片上，然后挑取可疑菌落与之接触，观察颜色变化。(3)菌落在接触氧化酶试剂15 620s出现红色，保持30s以上，然后 逐渐变成紫色，最后呈黑色，为氧化酶试验阳性，证实为淋球菌。【注意事项】1 .分泌物涂片时不要用力涂擦，以免细胞破
31、裂和变形，涂片厚薄要合适。2 .女性宫颈分泌物、咽和直肠标本在涂片中由于杂菌较多，故推荐用培养 法。3 .分离培养取材时拭子伸入尿道或宫颈的深度一定要足够。4 .培养淋球菌时，取材后应立即接种，标本离体的时间越短越好。5 .分高培养应采用加抗生素的选择性培养基。6 .氧化酶试剂应为新鲜配制(现用现配)，在棕色瓶中避光保存。7 .氧化酶试剂遇铁也会变红，故接种环应非铁丝所制。8 .对症状不典型的男性患者取材，最好在其晨起排尿前或排尿4h以后。第十四节衣原体检查【适应证】非淋球菌感染者。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .直接涂片染色法(1)采集标本同淋球菌。(2)标本涂片，自然干燥后甲
32、醛固定1015min。(3)当日配制的姬姆萨溶液染色lho(4)再用95%乙醇溶液淋洗涂片，干燥。(5)油镜下阳性标本中可在上皮细胞内找到个或更多呈蓝色、深蓝色或 暗紫色的包涵体。2 .衣原体抗原检测法采集标本同淋球菌。(2)用商品试剂盒检测，检测前先将试剂盒和测试卡等室温下复温30mino(3)加试剂至塑料管刻度处(约0.6ml),将拭子标本浸人管内摇匀，置水浴， 10-20min取出，转动拭子并沿管壁挤压，弃去拭子，提取液置室温冷却后盖上 管盖。(4)将测试卡置台面，加入5滴提取液于检体窗，静置30min后观察结果。(5)质控窗和结果窗均显示一条蓝带为阳性，结果窗无变化为阴性。3 .免疫荧
33、光法(1)采集标本同淋球菌检查。(2)将标本涂于玻片凹孔中或IB圈中，自然干燥，丙酮或无水甲醛固定漂洗， 再干燥。(3)加30ml荧光素标记的沙眼衣原体单克隆抗体试剂覆盖凹孔，玻片置湿 盒中或37摄氏度下作用15m in ,去掉多余试剂，用蒸储水淋洗涂片，自然 干燥，加一滴封固液，盖上盖玻片，置荧光显微镜下检查。(4)阳性标本在高倍镜下可见上皮细胞内的衣原体颗粒，为单一、针尖大小、 明亮的绿色荧光，在油镜下为荧光均匀、边缘光滑的圆盘样结构，也可见网状 体等其他形态的衣原体颗粒。【注意事项】同淋球菌检查。第十五节解胭胭原体检查【适应证】非淋球菌感染者。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1
34、.采集标本同淋球菌检查，也可用10ml中段尿离心(2 000r/min, lOmin), 取沉渣作接种物。2 .将标本接种到液体培养基中置烛缸内，在37c恒温箱内培养2472h,每 口观察颜色变化，如由黄色变为粉红色，可能有解胭服原体生长。3 .取0.2ml培养物接种到固体培养基上，培养48h后于低倍镜下观察，有典 型“油煎蛋”状菌落者为阳性。【注意事项】同淋球菌检查。第十六节梅毒螺旋体检查一、梅毒螺旋体检查【适应证】早期梅毒。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1 .暗视野显微镜检查(1)多取材于硬下疳溃疡面、扁平湿疣及黏膜斑表面、淋巴结抽出液。先用无菌生理盐水清洗皮损处，用钝刀刮除皮损
35、表面组织，擦净，挤压 周围组织，使血清及组织液渗出，吸取液体涂片，在暗视野显微镜下检查。(3)结果以查见梅毒螺旋体为阳性。2 .免疫荧光染色检查(1)上述取材后，用已知抗梅毒螺旋体抗血清，加非致病性螺旋体培养物进 行吸收，再用异硫氟酸荧光素(FITC)标记，文寸梅毒螺旋体染色。(2)荧光显微镜下见到亮绿色螺旋体为阳性。3 .组织切片染色用改良的莱瓦弟(Levoaditis)镀银染色，可显示皮肤及内脏器 官中梅毒螺旋体，呈黑褐色。二、梅毒血清学检查(一)非梅毒螺旋体抗原试验【适应证】1 .临床可疑人群常规检查；大量人群筛选检查。2 .定量指标观察疗效，是否再发，是否再感染。3 .发现潜伏梅毒感染
36、者。【禁忌证】无特殊禁忌。【试验方法】1 .性病研究实验室试验(venereal disease research laboratory test, VDRL)用心磷脂、磷脂酰胆碱(卵磷脂)及胆固醵为抗原，与机体产生的反应素发生 颗粒凝集和沉淀反应。可稀释做定量反应。2 .不加热血清反应素试验(unheated serum reagin test?USR)用改良的VDRL抗 原，血清可不必加热灭活，抗原不必每天配制。3 .快速血浆反应素环状卡片试验(r apid plasma reagin c i rcle card t est, R P R)基本原理与U SR相同，但在抗原中加入药用炭(活性
37、炭)颗粒，判定结果 可在肉眼下进行。也可稀释做定量反应。【结果判定】( + + + + )有大块状的颗粒和聚合团块(+ + )有中块状的颗粒和聚合团块什+)有小块状的颗粒聚合物(+-)有小块聚合颗粒，均匀分布 颗粒细小、混悬，无聚合现象定量用生理盐水按1 ： 8、1 ： 16、1 ： 32稀释，判定阳性标准同 上。(二)梅毒蝶旋体抗原试验【适应证】诊断梅毒有高敏感性和高特异性，常被用作梅毒的确证试验。应注意到：梅 毒患者该类拭验呈阳性反应后，约有9 5%的患者虽经足量治疗，其血清阳性 反应终生不变，因此不能作为疗效观察、复发或再感染的判定指征。【禁忌证】无特殊禁忌。【试验方法】1 .荧光密螺旋
38、体抗体吸收试验用间接免疫荧光技术检测血清中抗梅毒螺旋 体抗体。有高敏感性和高特异性。2 .梅毒螺旋体血球凝集试验是以梅毒螺旋体为抗原的间接血球凝集试验， 是一种特异性和敏感性均较高而且操作较简单的方法。目前有两种试验：一种即 T P H A ,另一种为梅毒螺旋体颗粒凝集试验(treponema pallidum particle agglutination test, TP- P A ）。两种方法都用超声波粉碎的N i c h o I株螺旋体悬 液为抗原，前者用甲醛处理的羊红细胞作抗原载体，后者用纯化的明胶颗粒作 抗原载体。3 .梅毒螺旋体停动试验（treponema pallidum imm
39、obilization test, TPI）梅毒患者血清中含有一种在补体存在时能使螺旋体停动的抗体。该试验阳性 结果出现得早，但应注意在一期梅毒的晚期、二期梅毒的早期和中期血清峰值 开始下降。【注意事项】梅毒螺旋体检查阳性对梅毒的诊断提供了重要依据，但确诊梅毒常需要接 触史、临床症状、实验室检查综合判定。梅毒血清试验可能出现技术性假阳性和 生物学假阳性反应，特别是非梅毒螺旋体抗原试验。第十七节醋酸白（甲苯胺蓝）试验【适应证】尖锐湿疣。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】暴露疣体或可疑皮损，用蘸有5%醋酸的棉拭子压于可疑皮疹及附近的皮 肤黏膜上，观察3s5min （肛门皮疹须观察lOmin左
40、右）。【结果判定】作用部位呈均匀一致的变白区，边缘清楚，为阳性。【注意事项】1 .敏感性较高、2 .有时在上皮增厚或有外伤擦破情况下有假阳性反应。3 .该试验诊断尖锐湿疣并非绝对特异反应，应作为临床参考。可能有假阳 性或假阴性。第十八节吓咻检查口卜咻是体内合成血红蛋白等物质的中间产物，包括吓胆原，I、II型尿吓 琳原和尿叶咻，I、II型粪叶咻原和粪口卜咻，常采用尿液、粪便和红细胞的吓 咻检查法。【适应证】各种原发性和继发性咋咻病。1 .红细胞生成性吓咻病包括先天性红细胞生成性吓咻病、红细胞生成性原吓 咻病、红细胞生成性粪吓咻病等。2 .肝性叶咻病 包括迟发性皮肤吓咻病、急性间歇性吓咻病、混合性
41、吓咻病、 遗传性粪叶咻病等。【禁忌证】无特殊禁忌【操作方法及程序】1 .尿液尿叶淋检查法(1)取新鲜尿4ml于试管中，加10滴冰乙酸混合。(2)加入1ml戊醇，并振摇试管数次，待分层。(3)在暗室中，用滤过紫外线灯观察戊醉层(上层)，灰蓝色为阴性，粉红 或红色荧光为阳性。2 .尿液粪口卜咻检查夬(1)取新鲜尿液20ml放于试管中，加冰乙醇0.5ml和3%过氧化氢2 3滴。(2)再加入4ml乙酸，振摇试管数次，待分层。(3)在暗室中，用滤过紫外线灯观察乙醛层(上层)，灰白或蓝绿色为阴性， 粉红或红色荧光为阳性。3 .尿液叶胆原检查法取新鲜尿液2ml放于试管中，加2ml对-二甲氨基苯甲醛，静置3m
42、in。(2)加饱和醋酸钠溶液4ml,混合后加氯仿3ml,充分振摇，待分层。(3)观察上层水溶液，红色为阳性反应。4 .粪便吓肺的检查法取一小块粪便(约0.5g)放于试管中，加冰乙酸0. 5ml,用玻璃棒搅成糊状。(2)加4ml乙酸，再搅拌充分，静置。(3)将上层清液(醋酸酸层)轻轻倒人另一试管中，加1.5mol/L盐酸2ml,充分1 .皮损选择一般选择充分发育的典型皮损，须取原发病变。水疮、脓疱宜取 早期皮损。有多种病变同时存在时，应分别取材。必要时从皮损边缘取材， 半病损皮肤，一半正常皮肤，以便对比观察、如考虑肿瘤和结节性皮肤病，取 材应尽量包括皮下脂肪组织。2 .麻醉尽可能在病变周围进行，
43、避免在拟取皮损内直接注入麻醉药。3 .取材取材要根据实际情况，宽、长足够，应包括表皮、真皮及皮下组织。 皮下结节须包括皮肤及皮下组织。较小皮损沿其边缘全部取下即可；较大斑块、 环状皮损应取活动性边缘；溃疡性病变应取活动性边缘。色素痣切口应稍宽，切 口至皮损边缘的距离根据部位不同而定，最好在0.5cm以上。要防止水疱、 脓疱破损。活检组织应避免挤压。4 .固定一般用4%甲醛溶液（10%福尔马林溶液）立即固定。固定液与组 织体积之比为5： lo5 .术后处理术后用无菌敷料包扎，保持创清洁，选择适当时机拆线。第二节皮肤免疫荧光检查该项检查技术是根据抗原与抗体的结合反应具有高度特异性的特点，采用荧 光
44、染料（目前应用较普遍的是异硫氟酸荧光素，其异硫领基在水溶液中与免疫 球蛋白的自由氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键，成为标记的免疫球蛋白，即 荧光素标记抗体）标记的已知抗原或抗体，通过荧光光源检查，以发现未知 的抗体或抗原。免疫荧光检查实际上是血清学方法与显微示踪技术相结合。根 据抗原抗体反应的不同，分述如下免疫荧光检查方法。一、皮肤直接免疫荧光检查【适应证】1 .非感染性大疤性皮肤病如各型天疱疮、类天疱疮、疱疹样皮炎、线状IgA 大疱性皮肤病、获得性大疱性表皮松解症等。2 .结缔组织病如红斑狼疮等。3 .各种血管炎振摇，待分层。(4)在暗室中，用滤过紫外线灯观察下层(酸层)，灰白或灰蓝色为阴性，
45、粉红 或红色荧光为阳性。5 .红细胞中外淋检查法在试管中加混合试剂(乙酸:冰乙酸=4 ： l)5ml和末梢血4滴(0.2ml),用 玻璃棒将小凝块搅碎。(2)取上清液加入另一试管巾，加3moi/L盐酸1mL振摇数次，待分层。(3)在暗室中，用滤过紫外线灯观察下层(酸层)，无色为阴性，粉红或红色荧 光为阳性。6 .红细胞中口卜淋的荧光镜计数法(1)试管中放1ml生理盐水，加末梢血2滴，摇匀后滴在玻片上(玻片上刻有 小方格)。(2)在荧光显微镜下计数小方格内发亮红色荧光的红细胞，再在普通显微镜 下计数红细胞总数，计算出荧光红细胞的百分比。正常人荧光红细胞无或偶见 (1%),若5%为异常。【注意事项
46、】1 .应取新鲜标本。2 .标本、试剂的比例应适当。3 .应充分摇匀，避免反应不充分。第十九节红斑狼疮细胞检查红斑狼疮细胞(LEC)是1948年Hargraves等首先发现并报道的，当时被列 为诊断系统性红斑狼疮(SLE)最重要的实验室检查项目。1971年和1982年 美国风湿病协会(ARA)提出和修订的SLE分类标准中，都将LEC作为、项 重要的诊断标准I但随着诊断技术水平的不断提高，LEC逐渐被更先进和敏感 的试验所代替，故在ARA再次修订SLE分类标准时，建议将其删去。然而 在我国某些地区可能还有应用者，故仍作介绍。【适应证】系统性红斑狼疮。【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】方法有很多种。现介绍两种常用的方法。1 .试管法(1)取患者静脉血2s4ml于试管中，室温待凝。(2)将新鲜凝血块搅碎，1000r/min,离心5 min,使白细胞适当集中，然 后置3 7c温箱中孵育2 h ,再将白细胞展附近的血清和白细胞，红细胞吸入 血细胞比容(红细胞压积)管内，以2000r/min离心lOmin。(3)吸取白细胞层涂片，干后做瑞氏染色。在显微镜下观察，典型LEC为含有均质体、胞核偏向一侧、胞体较大的 中性粒细胞，若见到游离