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1、呼吸科支气管肺泡灌洗技术操作规范【概述】20世纪60年代后期随着可曲性纤维支气管镜(简称纤支镜)的开发与应 用，逐渐兴起支气管肺泡灌洗(bronchoalvoelar lavage, BAL)技术。中华医学 会呼吸病学分会根据我国具体情况分别于1993年和2002年也制定出有关支气 管肺泡灌洗液(bronchoalvoelar lavage fluid, BALF)细胞学检查技术规范(草案)，使 此项检查技术在国内得到推广应用。由于BAL能直接获取肺内炎症免疫效应细胞, 是探讨肺局部免疫病理过程的一种相对比较安全有用的检查方法。因此，BAL已 成为某些肺疾病，特别是弥漫性间质性肺疾病以及免疫受
2、损患者肺部感染等疾 病的辅助临床珍断、病变活动性和预后判定的重要检测手段。【适应证】1 .凡能接受纤支镜检查患者均能承受支气管肺泡灌洗的检查。2 .弥漫性间质性肺疾病诊断：特发性肺纤维化、结节病、外源性过敏性肺 泡炎、结缔组织病伴肺纤维化、组织细胞增生症X以及嗜酸性粒细胞肺浸润等。3 .肺部肿瘤和免疫受损患者肺部感染诊断，如卡氏肺泡子虫肺炎、细支气管 肺泡癌。4 .用于肺泡蛋白沉积症的诊断与治疗，行局部和全肺灌洗。5 .用于肺部感染细菌学检测及肺化脓症冲冼引流治疗。【禁忌证】1 .凡纤支镜的禁忌证均为支气管肺泡灌洗的禁忌证。2 .精神高度紧张不能配合完成纤支镜检查患者。3 .严重通气和换气功能
3、障碍患者，PaO26. 67kPa(50mmHg)或吸氧状态下 PaO2 将回收液体立即用双层无菌沙布过滤除去黏液，并记录总量；装人硅塑瓶或涂 硅灭菌玻璃容器中(减少细胞黏附)，置于含有冰块的保温瓶中，立即送往实验室 检查。【BALF细胞学检查方法】1.9 ALF细胞总数和分类计数检测(1)将上述回收灌洗液装人塑料离心管内以1 200 r/ min,在TC下离心lOmin, 上清(原液或10倍浓缩)-7or储存，用做可溶性成分的检测。(2)经离心沉淀的细胞成分用Hank液(不含Ca 2 +、Mg 2 + )在同样条件离 心冲洗2次，每次5m in。弃去上清后加Hank液35ml制成细胞悬液。
4、也可以用灌洗液原液减少细胞丢失。(3)然后在改良的N e u b a u e r计数台上计数B A L F中细胞总数，一般以 1X106/ml表示。如果细胞数过高时，再用Hank液稀释，调整细胞数为5X106 /ml并同时将试管浸人碎冰块中备用。(4)细胞分类计数，采用细胞离心涂片装置，加入备用细胞悬液(细胞浓度为 5 X 10s个/mDIOOptl,在4 C卜以1 200r/min离心10min,通过离心作用将一定 数量的BALF细胞直接平铺于盐载玻片上。取下载玻片立即用冷风吹干，置于无 水乙醇中固定30min后进行染色，一般用Wright或HE染色。在40倍光学显微镜下计数200个细胞，进
5、行细胞分类计数。2.BALF中T淋巴细胞群的检测(1)采用间接免疫荧光法，将上述获得的BALF细胞成分，用10 %小牛血 清RPM1 1640培养液3s5ml制成细胞悬液。(2)将细胞悬液倒人平皿中，置于5% CO2 37t培养箱中孵育2h,进行贴壁处 理，去除肺泡巨噬细胞。取出细胞悬液，再用Hank液冲洗离心1次,弃上清留20-100八1。经贴壁 处理后的细胞悬液中，肺泡巨噬细胞显著减少，淋巴细胞相对增多。(4)将经贴壁处理的细胞悬液分装3个小锥形离心管内，每管20- 30八1 , 用微强加样器向标本中加单克隆抗体CD 3、CD4和。巧各2 0混匀置于4 X ： 冰箱中作用2ho取出标本，先
6、用Hank液冲洗离心2次，以12 OOOr/min离心20 s ,然 后加羊抗鼠荧光抗体各2040八1,置于冰箱作用30mino(6)取现标本用Hank液以同样速度和时问离心冲洗2次，弃上清留2 0 ： 1充分混匀细胞，取1滴于载玻片上加盖玻片。荧光显微镜下数200个淋巴细 胞并计算出标有荧光的细胞阳性率。【正常值】健康非吸烟者BALF细胞学检测正常参考值：细胞总分数：细胞总数(0.09 0.26)X 107 L,其中肺泡巨噬细胞0.93 0.03 ,淋巴细胞0.07 0.01. 中性粒细胞、嗜酸性粒细胞均V 0.01。T淋巴细胞亚群：总T细胞(CDA)T 辅助细胞(CDGO+5, T 抑制细
7、胞(CDf)O. 3TCD”CDf 比值 1. 5-1.8,【临床意义】1. HALF中细胞总数和伴有中性粒细胞百分比增加，见于特发性肺纤维化、 胶原血管病伴肺纤维化、家族性肺纤维化、组织细胞增生症X、闭塞性细支气管 炎伴有机化性肺炎(bronchiolitis obliterans-organizing pneumonia, BOOP)和急性呼 吸窘迫综合征(adult respiratory distress syndromeARDS)。2. BALF中细胞总数和伴有淋巴细胞百分比增加，见于结节病、外源性过敏 性肺泡炎、慢性皱肺、淋巴细胞浸润性疾病(淋巴细胞间质性肺炎、淋巴瘤和假 性淋巴瘤
8、等)、肺结核和肺泡蛋白沉着症。3. BALF中CDt细胞增加，CD八细胞减少，CD/CD八比值增高，见 于结节病、慢性被肺和进行性全身硬化症(progressive system in sclerosis PSS)和 皮肌炎合并肺纤维化；CDf细胞减少，而细胞增高，CDJ7C比值降低，见 于外源性过敏性肺泡炎和慢性类风湿及系统性红斑狼疮(systemin lupus erythematosus, SLE)患者。【注意事项】1 .用于做支气管肺泡灌洗的纤支镜顶端直径应在5. 56. 0mm,适宜于紧密 楔人段或亚段支气管管口，防止大气道分泌物混入和灌洗液外溢，保证HALF 满意何收量。2 .在灌洗过程中咳嗽反射必须得到充分的抑制，否则易引起支气管壁黏膜损 伤而造成灌洗液混血，同时影响回收量。3 .一份合格的BALF标本应是:BALF中没有大气道分泌物混人；回收率40%, 存活细胞占95%以上；红细胞 最大呼气流量(peak expiratory flow, PEF)、PaO2 短暂减低。6 .气胸、出血仅见于TBLB。