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1、川贝母粉Chuanbe imu fenFRITILLARIAE CIRRHOSAE BULBUS【来源】 本品为百合科植物川贝母Fritillaria cirrhosa D.Don暗紫贝母Fritillaria unibracteata、甘肃贝母 Fritillaria przewalskii Maxim.、梭砂贝母 Fritillaria delavayi Franch.、太白贝母 Fritillaria taipaiensis P.Y.Li 或瓦布贝母 Fritillaria unibracteata Hsiao et K.C.Hsiavar.Z?we/ww （S. Y. Tang et
2、S. C. Yue） Z. D. Liu, S.Wang et S.C.Chen 的 干燥鳞茎。【炮制】取净川贝母，粉碎成细粉，过筛，即得。【性状】本品为类白色至浅黄色粉末；气微，味微苦。【鉴别】（1）本品粉末类白色或浅黄色。淀粉粒广卵形、贝壳形、肾形或椭圆形， 直径约至60|im,脐点人字状、星状或点状，可见层纹。螺纹导管直径可达64Pm（2）取本品10g,加浓氨试液10mL密塞，浸泡1小时，加二氯甲烷40ml,超声处 理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取贝母素乙 对照品，加甲醇制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典 2020
3、年版通则0502）试验，吸取供试品溶液16可、对照品溶液2出，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液-水（18:2:1:0.1）为展开剂，展开，取出，晾 干，依次喷以稀碘化钿钾试液和亚硝酸钠乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色的斑点。（3）聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性方法。模板DNA提I取本品20mg,置1.5ml离心管中，用新型广谱植物基因组DNA快速提取试剂盒提取DNA （加入缓冲液API 400）11和RNA酶溶液（10mg/ml） 4山，涡漩振荡，65。水浴加热10分钟，加入缓冲液AP2 130|il,充分混匀，冰浴冷却5分钟，离
4、心（转速为每分钟14000转）1。分钟；吸取上清液转移人另一离心管中，加入1.5倍体积 的缓冲液AP3/E,混匀，加到吸附柱上，离心（转速为每分钟13000转）1分钟，弃去过 滤液，加入漂洗液700出，离心（转速为每分钟12000转）30秒，弃去过滤液；再加入漂 洗液500m，离心（转速为每分钟12000转）30秒，弃去过滤液；再离心（转速为每分钟 13000转）2分钟，取出吸附柱，放入另一离心管中，加入50口洗脱缓冲液，室温放置3 5分钟，离心（转速为每分钟12000转）1分钟，将洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2 分钟，离心（转速为每分钟12000转）1分钟），取洗脱液，作为供试品溶液，置4
5、冰 箱中备用。另取川贝母对照药材20mg,同法制成对照药材模板DNA溶液。PCR-RFLP 反应 鉴别弓 | 物：5, CGTA AC A AGGTTT-CCGTAGGTG A A39 和 5，GCTACGTTCTTCATCGAT3，。PCR反应体系：在200似离心管中进行，反应总体积为 30|11,反应体系包括 lOxPCR 缓冲液 3口 二氯化镁（25mmol/L）2.%d, dNTP （10mmol/L） 0.6pil,鉴别引物（30gmol/L）各0.5似,高保真Taq DAN聚合酶（5U/gl） 0.2诅,模板Igl, 无菌超纯水将离心管置PCR仪，PCR反应参数：95c预变性4分钟
6、，循环反应 30次（95C30秒，555830秒，72c 30秒），72延伸5分钟。取PCR反应液，置 500口离心管中，进行酶切反应，反应总体积为20口，反应体系包括10x酶切缓冲液2可， PCR反应液6|iL Smal （lOU/l） 0.5出，无菌超纯水11.5出，酶切反应在30水浴反应2 小时。另取无菌超纯水，同法上述PCR-RFLP反应操作，作为空白对照。电泳检测 照琼脂糖凝胶电泳法（中国药典2020年版通则0541）,胶浓度为1.5%, 胶中加入核酸凝胶染色剂GelRed；供试品与对照药材酶切反应溶液的上样量分别为8可, DNA分子量标记上样量为Wl（0.5|ig/M）。电泳结束后
7、，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外 透射仪上检视。供试品凝胶电泳图谱中，在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位置上，在 100250bp应有两条DNA条带，空白对照无条带。【检查】 水分 不得过15.0% （中国药典2020年版通则0832第二法）。总灰分 不得过5.0% （中国药典2020年版通则2302）o【浸出物】照醇溶性浸出物测定法（中国药典2020年版通则2201）项下的热浸法 测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于9.0%。【含量测定】对照品溶液的制备 取西贝母碱对照品适量，精密称定，加三氯甲烷 制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4m
8、L 0.6ml 1.0ml,置25ml 具塞试管中，分别补加三氯甲烷至10.0ml,精密加水5ml、再精密加0.05%溟甲酚绿缓冲 液（取漠甲酚绿0.05g,用0.2mol/L氢氧化钠溶液6ml使溶解，加磷酸二氢钾1g,加水 使溶解并稀释至100mL即得）2ml,密塞，剧烈振摇1分钟，转移至分液漏斗中，放置 30分钟。取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，取续滤液，以相应的试剂为空白，照紫外- 可见分光光度法（中国药典2020年版通则0401）,在415nm的波长处测定吸光度，以吸 光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法 取本品约2g,精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液3mL浸润1小时，
9、加三氯甲烷-甲醇（4:1）混合溶液40ml,置80C水浴加热回流2小时，放冷，滤过，滤 液置50ml量瓶中，用适量三氯甲烷-甲醇（4:1）混合溶液洗涤药渣23次，洗液并人同 一量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（4:1）混合溶液至刻度，摇匀。精密量取25mL置25ml 具塞试管中，水浴上蒸干，精密加入三氯甲烷10ml使溶解，照标准曲线的制备项下的方 法，自“精密加水5ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中西贝母碱 的重量（mg）,计算，即得。本品按干燥品计算，含总生物碱以西贝母碱（C27H43NO3）计，不得少于0.050%。 【性味与归经】苦、甘，微寒。归肺、心经。【功能与主治】清热润肺，化痰止咳，散结消痈。用于肺热燥咳，干咳少痰，阴虚 劳嗽，痰中带血，疡疡，乳痈，肺痈。【用法与用量】310g；冲服，一次12g。【注意】不宜与川乌、制川乌、草乌、制草乌、附子同用。【贮藏】置通风干燥处，防蛀。【药材标准】中国药典2020年版一部。