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1、2023/2/12第第十十章章高效液相色谱分高效液相色谱分析法析法一、液一、液-固吸附色谱固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatograph二、液二、液-液分配色谱液分配色谱liquid-liquid partition chromatograph三、离子交换色谱三、离子交换色谱ion-exchange chromatograph四、离子色谱四、离子色谱ion chromatograph五、离子对色谱五、离子对色谱ion-pair chromatograph六、排阻色谱六、排阻色谱size-exclusion chromatograph七、亲和色谱七、亲和色谱
2、(AC)AC)Affinity chromatograph第二节第二节主要分离类型与原理主要分离类型与原理high performance liquid chromatographbasic principle and main separating types2023/2/12一、一、液液-固吸附色谱固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 固固定定相相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是510m的硅胶吸附剂；流动相流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；适用于分离相对分子质量中等的油溶
3、性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；2023/2/12二、二、液液-液分配色谱液分配色谱liquid-liquid partition chromatography 固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；流流动动相相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正正相相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反反相相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反；固定相固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化化学学键键合合固固定
4、定相相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。2023/2/12三、三、离子交换色谱离子交换色谱ion-exchange chromatography 固定相固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；流流动动相相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；基基本本原原理理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；阳离子交换：RSO3H +M+=RSO3 M +H+阴离子交换：RNR4OH +X-=RNR4 X+
5、OH-应用应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。2023/2/12四、四、离子色谱离子色谱ion chromatography 离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一中技术，其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。有关内容将在第十章第六节中讲授。2023/2/12五、五、离子对色谱离子对色谱ion pair chromatography 原原理理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行
6、分配；阴阴离离子子分分离离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子；阳阳离离子子分分离离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子；反反相相离离子子对对色色谱谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+X-后；在两相间分配。2023/2/12六、六、排阻色谱色谱排阻色谱色谱size-exclusion chromatography 固定相固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)；原原理理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通
7、过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。全部在死体积前出峰；可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离 2023/2/12七、七、亲和色谱亲和色谱(AC)Affinity chromatograph 原原理理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。2023/2/12请选择内容请选择内容第一节第一节 高效液相色谱的特点与仪器高效液相色谱的特点与仪器feat
8、ure and instrument of HPLC第二节第二节 基本原理与主要分离类型基本原理与主要分离类型basic principle and main separating type第三节第三节 固定相与流动相固定相与流动相stationary phase and mobile phase 第四节第四节 影响分离的因素与操作条件选择影响分离的因素与操作条件选择factors influenced separation and choice of operation condition第五节第五节 离子色谱法离子色谱法ion chromatograph第六节第六节 超临界流体色谱超临界流
9、体色谱supercritical fluid chromatograph结束结束学习目标学习目标1、复述故事，深入理解文章内、复述故事，深入理解文章内容，初步把握人物形象。容，初步把握人物形象。2、学会利用文中关键词句分、学会利用文中关键词句分析人物形象。析人物形象。3、体会文章所揭示的深刻道、体会文章所揭示的深刻道理。理。故事发生的时间、地点、人物、故事发生的时间、地点、人物、事件的起因、经过和结果要复述事件的起因、经过和结果要复述清楚。清楚。看图复述课文内容看图复述课文内容自学指导自学指导(一一)1 1、作者运用哪几种方法去刻画人物的形象？从文、作者运用哪几种方法去刻画人物的形象？从文、作
10、者运用哪几种方法去刻画人物的形象？从文、作者运用哪几种方法去刻画人物的形象？从文中找出具体句子进行分析。并说说你是如何看待这中找出具体句子进行分析。并说说你是如何看待这中找出具体句子进行分析。并说说你是如何看待这中找出具体句子进行分析。并说说你是如何看待这两个人物的。两个人物的。两个人物的。两个人物的。2 2、从这个故事中你懂得了什么道理？、从这个故事中你懂得了什么道理？、从这个故事中你懂得了什么道理？、从这个故事中你懂得了什么道理？自学指导自学指导(二二)陈尧咨（善射）陈尧咨（善射）卖油翁（善酌）卖油翁（善酌）动作动作动作动作神态神态神态神态语言语言语言语言睨之睨之睨之睨之无他，但手熟尔无他
11、，但手熟尔无他，但手熟尔无他，但手熟尔以我酌油知之以我酌油知之以我酌油知之以我酌油知之我亦无他，惟手熟尔我亦无他，惟手熟尔我亦无他，惟手熟尔我亦无他，惟手熟尔汝亦知射乎汝亦知射乎汝亦知射乎汝亦知射乎吾射不亦精乎吾射不亦精乎吾射不亦精乎吾射不亦精乎尔安敢轻吾射尔安敢轻吾射尔安敢轻吾射尔安敢轻吾射释担而立释担而立释担而立释担而立 但微颔之但微颔之但微颔之但微颔之取取取取 置置置置 覆覆覆覆 酌酌酌酌 沥沥沥沥性格性格:自矜（骄傲）自矜（骄傲）自矜（骄傲）自矜（骄傲）谦虚谦虚谦虚谦虚对比对比对比对比道理道理:熟能生巧熟能生巧熟能生巧熟能生巧,即使有什么长处也不必骄傲自满。即使有什么长处也不必骄傲自满
12、。即使有什么长处也不必骄傲自满。即使有什么长处也不必骄傲自满。忿然忿然忿然忿然 笑而遣之笑而遣之笑而遣之笑而遣之笑而遣之笑而遣之笑而遣之笑而遣之1、联系生活、学习，说说熟能生巧的、联系生活、学习，说说熟能生巧的事例。事例。2、你认为一个人应该如何看待自己、你认为一个人应该如何看待自己的长处？又如何看待他人的长处？的长处？又如何看待他人的长处？课外延伸课外延伸人外有人，天外有天。人外有人，天外有天。人外有人，天外有天。人外有人，天外有天。取人之长，补己之短。取人之长，补己之短。取人之长，补己之短。取人之长，补己之短。自满人十事九空，虚心人万事可成。自满人十事九空，虚心人万事可成。自满人十事九空，
13、虚心人万事可成。自满人十事九空，虚心人万事可成。谦受益，满招损。谦受益，满招损。谦受益，满招损。谦受益，满招损。三人行，必有我师焉。三人行，必有我师焉。三人行，必有我师焉。三人行，必有我师焉。择其善者而从之，其不善者而改之。择其善者而从之，其不善者而改之。择其善者而从之，其不善者而改之。择其善者而从之，其不善者而改之。骄傲自满是我们的一座可怕的陷阱；而且，这个陷骄傲自满是我们的一座可怕的陷阱；而且，这个陷骄傲自满是我们的一座可怕的陷阱；而且，这个陷骄傲自满是我们的一座可怕的陷阱；而且，这个陷阱是我们自己亲手挖掘的。阱是我们自己亲手挖掘的。阱是我们自己亲手挖掘的。阱是我们自己亲手挖掘的。老舍老舍
14、老舍老舍 尺有所短；寸有所长。物有所不足；智尺有所短；寸有所长。物有所不足；智尺有所短；寸有所长。物有所不足；智尺有所短；寸有所长。物有所不足；智有所不明。有所不明。有所不明。有所不明。屈原屈原屈原屈原 1、正视自己的长处，扬长避短，、正视自己的长处，扬长避短，2、正视自己的缺点，知错能改，、正视自己的缺点，知错能改，3谦虚使人进步，谦虚使人进步，4、人应有一技之长，、人应有一技之长，5、自信是走向成功的第一步，、自信是走向成功的第一步，6强中更有强中手，一山还比一山高，强中更有强中手，一山还比一山高，7艺无止境艺无止境 8、宝剑锋从磨砺出，梅花香自苦寒来，刻苦、宝剑锋从磨砺出，梅花香自苦寒来，刻苦训练才能有所收获，取得成效。训练才能有所收获，取得成效。9、骄傲自大、不可一世者往往遭人轻视；、骄傲自大、不可一世者往往遭人轻视；10、智者超然物外、智者超然物外