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1、会计学1疟原虫显微镜镜检技术疟原虫显微镜镜检技术(jsh)第一页，共75页。疟疾疟疾(n ji)(n ji)简介简介 疟疾是一种疟疾是一种(y zhn)(y zhn)古老的传染病古老的传染病,俗称俗称“冷热病冷热病”、“打摆子打摆子”、“发疟子发疟子”、“脾寒脾寒”、“瘴气瘴气”等，是由疟原虫寄生于人体引起等，是由疟原虫寄生于人体引起的传染性寄生虫病。的传染性寄生虫病。第1页/共75页第二页，共75页。寄生人体寄生人体寄生人体寄生人体(rnt(rnt)的四种疟原虫的四种疟原虫的四种疟原虫的四种疟原虫n n间日疟原虫间日疟原虫间日疟原虫间日疟原虫 Plasmodium vivax Plasmod
2、ium vivax Plasmodium vivax Plasmodium vivax，P.vP.vP.vP.vn n三日疟原虫三日疟原虫三日疟原虫三日疟原虫PPPPMalariae,P.mMalariae,P.mMalariae,P.mMalariae,P.mn n恶性疟原虫恶性疟原虫恶性疟原虫恶性疟原虫 P P P PFalciparum,P.fFalciparum,P.fFalciparum,P.fFalciparum,P.fn n卵形疟原虫卵形疟原虫卵形疟原虫卵形疟原虫PPPPOvale,P.o Ovale,P.o Ovale,P.o Ovale,P.o n n我我我我国国国国主主主主
3、要要要要是是是是间间间间日日日日疟疟疟疟常常常常见见见见，恶恶恶恶性性性性疟疟疟疟次次次次之之之之，三三三三日日日日疟疟疟疟偶偶偶偶尔尔尔尔发发发发现现现现，卵形疟已无病例卵形疟已无病例卵形疟已无病例卵形疟已无病例(bngl)(bngl)(bngl)(bngl)报告。报告。报告。报告。第2页/共75页第三页，共75页。镜检疟原虫方法镜检疟原虫方法(fngf)简述简述 19世纪(shj)后期，显微镜的出现使人们不断发现了传染病的病因。1880年法国军医拉韦朗第一次见到并描述了人红细胞内的疟原虫，至此才解开了困扰人们数千年的疟疾的病因之谜。第3页/共75页第四页，共75页。镜检疟原虫方法镜检疟原虫
4、方法(fngf)简述简述 目前用于疟疾诊断的实验室检测包括病原学检查、免疫学检测和分子生物学检测三类(sn li)。镜检疟原虫由于具有操作简便、敏感、价廉和可鉴别虫种等优点，广泛用于疟疾的病原学诊断已愈近一个世纪，仍是目前最常用的方法，也是我国疟疾诊断标准确定的实验室检查方法（WS259-2006）。第4页/共75页第五页，共75页。镜检目的镜检目的(md)与意义与意义n n疟疾诊断标准中把疟疾病例分为疑似病例、临床病例、确诊病例和带虫者，前两者依据(yj)流行病学史和临床表现即可做出诊断，而后两者需通过发现病原体方能做出诊断。n n通过对发热病人血检达到确诊疟疾病例。及时发现传染源和明确感染
5、的疟原虫种类，以能针对虫种选择正确的治疗方案。第5页/共75页第六页，共75页。血片镜检血片镜检 血片制作用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜。一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。薄血膜上的血细胞要求(yoqi)平辅在玻片上面。第6页/共75页第七页，共75页。血膜的制作血膜的制作(zhzu)（取血时间）（取血时间）n n 取取取取血血血血时时时时机机机机 现现现现症症症症病病病病人人人人一一一一般般般般可可可可随随随随时时时时(sush)(sush)取取取取血血血血，疟疟疟疟疾普查疾普查疾普查疾普查 时可不考虑取血时机。时可不考虑取血时机。时可不考虑取血时机。时可不考虑取
6、血时机。n n 在在在在诊诊诊诊断断断断或或或或需需需需要要要要某某某某期期期期疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫作作作作标标标标本本本本时时时时，则则则则应应应应掌掌掌掌握握握握适适适适宜宜宜宜的的的的取取取取血血血血时时时时机机机机。间间间间日日日日疟疟疟疟在在在在寒寒寒寒热热热热发发发发作作作作时时时时，外外外外周周周周血血血血液液液液中中中中主主主主要要要要可可可可见见见见环环环环状状状状体体体体期期期期；发发发发作作作作后后后后数数数数小小小小时时时时，环环环环状状状状体体体体发发发发育育育育到到到到滋滋滋滋养养养养体体体体期期期期，疟疟疟疟色色色色素素素素形形形形成成成成，形形形形态态态态较
7、较较较易易易易辩辩辩辩认认认认，为为为为诊诊诊诊断断断断的的的的有有有有利利利利时时时时机机机机；36483648小小小小时时时时，可可可可检检检检出出出出裂裂裂裂殖殖殖殖体体体体；发发发发作作作作一一一一、二二二二次次次次后后后后，配配配配子子子子体体体体出出出出现现现现较较较较多多多多。恶恶恶恶性性性性疟疟疟疟较较较较理理理理想想想想的的的的取取取取血血血血时时时时间间间间是是是是在在在在发发发发作作作作后后后后至至至至2020小小小小时时时时内内内内取取取取血血血血，初初初初发发发发患者退热后常查不到原虫。患者退热后常查不到原虫。患者退热后常查不到原虫。患者退热后常查不到原虫。第7页/共
8、75页第八页，共75页。血膜的制作血膜的制作(zhzu)（取血操作）（取血操作）取血方法取血方法 采血部位一般人为耳垂采血部位一般人为耳垂(r chu)，指头，通常在耳垂，指头，通常在耳垂(r chu)取血（现场取取血（现场取血建议用大头针采血，一人一针，避免血血建议用大头针采血，一人一针，避免血传疾病）。先用传疾病）。先用75%酒精棉球消毒取血部位酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻动耳垂（冬季用手捻动耳垂(r chu)使其充血后再使其充血后再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和食行消毒），待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂指紧捏耳垂(r chu)上方，右手持消毒针迅上方，右手持消毒针迅速刺入耳
9、垂速刺入耳垂(r chu)下端下端12毫米，不宜过毫米，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向挤压出深或过浅。然后用右手中指轻轻向挤压出血。血。第8页/共75页第九页，共75页。血膜的制作血膜的制作(zhzu)（取血操作）（取血操作）第9页/共75页第十页，共75页。取血量及涂片取血量及涂片(t pin)法（涂片法（涂片(t pin)操作）操作）薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜 取取取取洁洁洁洁净净净净的的的的载载载载玻玻玻玻片片片片2 2张张张张，1 1张张张张平平平平置置置置在在在在桌桌桌桌上上上上，以以以以左左左左手手手手拇拇拇拇指指指指(m(m zhzh)，食食食食指指指指夹夹夹夹持持持持载载载
10、载玻玻玻玻片片片片两两两两端端端端（手手手手指指指指切切切切勿勿勿勿接接接接触触触触玻玻玻玻片片片片表表表表面面面面），用用用用另另另另一一一一张张张张边边边边缘缘缘缘平平平平滑滑滑滑（最最最最好好好好为为为为磨磨磨磨口口口口边边边边缘缘缘缘）的的的的载载载载玻玻玻玻片片片片做做做做推推推推片片片片，用用用用推推推推片片片片一一一一端端端端边边边边缘缘缘缘的的的的中中中中点点点点从从从从取取取取血血血血部部部部分分分分取取取取约约约约1 1微微微微升升升升的的的的血血血血量量量量（相相相相当当当当于于于于1/41/4火火火火柴柴柴柴头头头头大大大大小小小小），使使使使血血血血滴滴滴滴与与与与平
11、平平平置置置置的的的的载载载载玻玻玻玻片片片片接接接接触触触触，并并并并形形形形成成成成25302530度度度度夹夹夹夹角角角角，待待待待血血血血液液液液向向向向两两两两侧侧侧侧扩扩扩扩展展展展约约约约2 2厘厘厘厘米米米米长长长长度度度度时时时时，均均均均匀匀匀匀而而而而迅迅迅迅速速速速地地地地轻轻轻轻轻轻轻轻向向向向左左左左推推推推出出出出（约约约约2.52.5厘厘厘厘米米米米长长长长），整整整整个血膜成舌形。个血膜成舌形。个血膜成舌形。个血膜成舌形。第10页/共75页第十一页，共75页。正确正确(zhngqu)的推片姿势的推片姿势第11页/共75页第十二页，共75页。取血量及涂片取血量及
12、涂片(t pin)法（涂片法（涂片(t pin)操作）操作）厚血膜厚血膜 用推用推 片的一角，从片的一角，从取血部位刮取取血部位刮取约约4微升血量微升血量（相当于火柴（相当于火柴头小），使血头小），使血滴与平置的载滴与平置的载玻片接触，再玻片接触，再由里向外一个由里向外一个方向旋转，转方向旋转，转24圈，涂成直圈，涂成直径径0.81厘米大厘米大小小(dxio)圆形圆形厚血膜，血膜厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚薄均匀，过厚易于脱落，厚易于脱落，过薄达不到检过薄达不到检出率的要求。出率的要求。第12页/共75页第十三页，共75页。涂制厚、薄血膜的位置涂制厚、薄血膜的位置涂制厚、薄血膜的位置涂制厚、薄血
13、膜的位置 通通通通常常常常是是是是将将将将厚厚厚厚、薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜涂涂涂涂在在在在一一一一 张张张张 载载载载 片片片片 上上上上。方方方方 法法法法(fngf(fngf)是是是是将将将将载载载载片片片片分分分分为为为为6 6等等等等分分分分，第第第第1 1、2 2格格格格备备备备贴贴贴贴标标标标签签签签及及及及编编编编号号号号用用用用；厚厚厚厚血血血血膜膜膜膜涂涂涂涂在在在在第第第第3 3格格格格中中中中央央央央，薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜涂涂涂涂在在在在第第第第4 4格格格格前前前前缘缘缘缘至至至至第第第第6 6格格格格中中中中部部部部。作作作作为为为为标标标标本本本本的的的的血血
14、血血片片片片每每每每张张张张玻玻玻玻片片片片涂涂涂涂厚厚厚厚、薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜各各各各1 1个个个个；门门门门诊诊诊诊和和和和发发发发热热热热病病病病人人人人血血血血片片片片每每每每片片片片1 1人人人人，涂涂涂涂2 2个个个个厚厚厚厚血血血血膜膜膜膜1 1个个个个薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜，以以以以防防防防血血血血膜膜膜膜脱脱脱脱落落落落而而而而影影影影响检查。响检查。响检查。响检查。第13页/共75页第十四页，共75页。标准标准(biozhn)的疟疾厚薄血膜片位置的疟疾厚薄血膜片位置第14页/共75页第十五页，共75页。血片的染色血片的染色(rns)一、吉氏染液母液配制一、吉氏染液母
15、液配制 取吉氏粉取吉氏粉0.5克置于研钵中，加少量甘油充克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，边加边磨，至分研磨，边加边磨，至25毫升加完为止，倒毫升加完为止，倒入入60或或100毫升带有玻塞的有色玻瓶中。在毫升带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水甲醇研钵中加少量无水甲醇(ji chn)，洗去甘，洗去甘油浓液混入瓶内，至油浓液混入瓶内，至25毫升甲醇毫升甲醇(ji chn)洗净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分洗净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于摇匀，置于5560水浴中水浴中2小时，或室温小时，或室温内内35天，每天用力摇动天，每天用力摇动5分钟，即成原液。分钟，即成原液。吉氏染液是目
16、前较优良的血膜染剂，即使吉氏染液是目前较优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经久不变。在炎热天气中，亦可经久不变。第15页/共75页第十六页，共75页。血片的染色血片的染色(rns)二、瑞式染液的配制二、瑞式染液的配制将将瑞瑞氏氏染染剂剂粉粉1g置置于于研研钵钵内内，加加入入15ml甘甘油油充充分分研研磨磨后后，倒倒入入有有塞塞玻玻璃璃瓶瓶中中，再再用用500ml甲甲醇醇洗洗出出研研钵钵中中的的甘甘油油溶溶液液，倒倒入入瓶瓶中中，摇摇匀匀后后，置置室室温温下下，每每天天摇摇动动5分分钟钟，3天天后后即即可使用。可使用。此此方方法法染染色色的的时时间间(shjin)短短，但但染染色色效效果果不
17、不如如吉吉氏氏染染液液效效果稳定，又不能大量血片染色，可用于门诊应急血片用。果稳定，又不能大量血片染色，可用于门诊应急血片用。第16页/共75页第十七页，共75页。血片的染色血片的染色血片的染色血片的染色(r(r ns)ns)吉氏染液血片染色方法吉氏染液血片染色方法吉氏染液血片染色方法吉氏染液血片染色方法 （推荐使用此方法）（推荐使用此方法）（推荐使用此方法）（推荐使用此方法）先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白可用滴管滴水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白可用滴
18、管滴水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白可用滴管滴水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白可用滴管滴水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倾去，晾干后进行染色。将水倾去，晾干后进行染色。将水倾去，晾干后进行染色。将水倾去，晾干后进行染色。成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入2%
19、2%吉氏染液稀释液（吉氏染液稀释液（吉氏染液稀释液（吉氏染液稀释液（2 2毫升原液加中性蒸馏水毫升原液加中性蒸馏水毫升原液加中性蒸馏水毫升原液加中性蒸馏水9898毫升稀释均匀毫升稀释均匀毫升稀释均匀毫升稀释均匀(jnyn)(jnyn)即成），同时对即成），同时对即成），同时对即成），同时对厚薄血膜染色厚薄血膜染色厚薄血膜染色厚薄血膜染色3030分钟（如染液不合标准时，得酌情增减染色时间），然后用清水轻轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将分钟（如染液不合标准时，得酌情增减染色时间），然后用清水轻轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将分钟（如染液不合标准时，得酌情增减染色时间），然后
20、用清水轻轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将分钟（如染液不合标准时，得酌情增减染色时间），然后用清水轻轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。第17页/共75页第十八页，共75页。血片的染色血片的染色(rns)单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用2%吉氏染液稀释液吉氏染液稀释液12毫升，滴入血片标本毫升，滴入血片标本上染色上染色30分钟左右；或用中性蒸馏水分钟左右；
21、或用中性蒸馏水1毫升，毫升，加吉氏母液加吉氏母液12滴，混合均匀后滴入血片标滴，混合均匀后滴入血片标本上，染色本上，染色1020分钟，然后用清水轻轻将分钟，然后用清水轻轻将片上的染液冲洗干净，（切勿片上的染液冲洗干净，（切勿(qi w)先倒先倒掉染液再用水冲洗）晾干镜检。掉染液再用水冲洗）晾干镜检。第18页/共75页第十九页，共75页。瑞氏染液的染色瑞氏染液的染色(rns)(rns)方法：方法：先用蜡笔在厚、薄血膜间划一界限(jixin)，滴几滴蒸馏水在厚血膜上溶血。溶血后倾去水滴。在薄血膜上加瑞氏染液58滴，染色12分钟。然后再加58滴蒸馏水于薄血膜上，用吸管将染液与蒸馏水混合均匀后，把染液
22、引到厚血膜上，使厚血膜再染色10分钟。用清水轻轻冲去染液，晾干。第19页/共75页第二十页，共75页。血片的镜检血片的镜检n n在学习在学习在学习在学习(xux)(xux)镜检疟原虫之前，必须先对正常厚镜检疟原虫之前，必须先对正常厚镜检疟原虫之前，必须先对正常厚镜检疟原虫之前，必须先对正常厚薄血膜中各种血细胞的形态、内部结构和染色性薄血膜中各种血细胞的形态、内部结构和染色性薄血膜中各种血细胞的形态、内部结构和染色性薄血膜中各种血细胞的形态、内部结构和染色性质加以识别。质加以识别。质加以识别。质加以识别。n n学习学习学习学习(xux)(xux)镜检疟原虫，首先要学看薄血膜，在镜检疟原虫，首先要
23、学看薄血膜，在镜检疟原虫，首先要学看薄血膜，在镜检疟原虫，首先要学看薄血膜，在基本上掌握薄血膜中疟原虫形态后，才学习基本上掌握薄血膜中疟原虫形态后，才学习基本上掌握薄血膜中疟原虫形态后，才学习基本上掌握薄血膜中疟原虫形态后，才学习(xux)(xux)镜检厚血膜。镜检厚血膜。镜检厚血膜。镜检厚血膜。n n镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫分类时参考和血片编号之用。分类时参考和血片编号之用。分类时参考和血片编号之用。分类时参考和血片编号之用。n n镜检疟原虫必须用油
24、镜头配合镜检疟原虫必须用油镜头配合镜检疟原虫必须用油镜头配合镜检疟原虫必须用油镜头配合5X5X低倍目镜镜检，低倍目镜镜检，低倍目镜镜检，低倍目镜镜检，当发现疑难问题时可调换当发现疑难问题时可调换当发现疑难问题时可调换当发现疑难问题时可调换10X10X目镜进行观察。目镜进行观察。目镜进行观察。目镜进行观察。n n检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，自左至右，由右至左，一行接一行，一个视野稍自左至右，由右至左，一行接一行，一个视野稍自左至右，由右至左，一行接一
25、行，一个视野稍自左至右，由右至左，一行接一行，一个视野稍叠一个视野顺序地查完整个血膜。叠一个视野顺序地查完整个血膜。叠一个视野顺序地查完整个血膜。叠一个视野顺序地查完整个血膜。第20页/共75页第二十一页，共75页。疟原虫血片检查疟原虫血片检查(jinch)结果结果确定确定n检查全部厚血膜未查见疟原虫者判为阴性检查全部厚血膜未查见疟原虫者判为阴性(ynxng)。n显微镜下查见疟原虫，根据疟原虫形态确定恶性疟、间日显微镜下查见疟原虫，根据疟原虫形态确定恶性疟、间日疟、三日疟、卵形疟或混合感染。疟、三日疟、卵形疟或混合感染。n 第21页/共75页第二十二页，共75页。制作制作(zhzu)血膜的注血
26、膜的注意事项意事项n n1.玻片清洗(qngx)时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。第22页/共75页第二十三页，共75页。制作制作(zhzu)血膜的注意事项血膜的注意事项n n2.刚涂制的血膜要平放在标本刚涂制的血膜要平放在标本(biobn)盒内，厚血膜未干盒内，厚血膜未干前勿使标本前勿使标本(biobn)盒倾斜，盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不溶血和着色厚薄不均，厚处不
27、溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本装入标本(biobn)盒并盖严，盒并盖严，新的木制标本新的木制标本(biobn)盒需盒需敞开放置一段时间，让木醇挥敞开放置一段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜红发后才能使用，以免厚血膜红蛋白被其固定，不能溶血或染蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。色效果不佳。第23页/共75页第二十四页，共75页。制作制作(zhzu)血膜的注血膜的注意事项意事项n n3.血膜让其自然干燥，切忌用血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤
28、，干透后才能用太阳晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能可能2448小时内固定染色；冬小时内固定染色；冬天也不能超过天也不能超过72小时。放置时小时。放置时间越久，厚血膜越不易脱血，间越久，厚血膜越不易脱血，染色效果也差。若不能及时染色效果也差。若不能及时(jsh)染色，薄血膜宜先用甲染色，薄血膜宜先用甲醇固定（醇固定（13分钟）然后用过滤分钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干固定清水对厚血膜溶血，晾干固定后装入盒内盖严，待以后染色。后装入盒内盖严，待以后染色。第24页/共75页第二十五页，共75页。影响染色影响染色(rns)效果效果的因素的因素n n血
29、血片片染染色色好好坏坏除除了了与与玻玻片片是是否否清清洁洁，血血片片制制作作质质量量好好坏坏等等有有关关外外，还还受受到到以以下下几几个个因因素素的的影响：影响：n n（1）染染料料(rnlio)溶溶剂剂的的质质量量 染染料料(rnlio)、甲甲醇醇和和甘甘油油如如果果不不纯纯，常常使使配配制制的的染染液液偏偏酸酸或或偏偏碱碱而而影影响响染染色色效效果果。因因此此必必须须用用分分析析纯纯的的甲甲醇醇和和中中性性甘甘油油，而而且且在在配配制制时时所所用用的的器器具具必须干净而无水份。必须干净而无水份。第25页/共75页第二十六页，共75页。影响染色效果影响染色效果(xiogu)的因素的因素n n
30、（2）染液的新旧）染液的新旧 新配制的染液因色素尚未新配制的染液因色素尚未充分溶解充分溶解(rngji)，染色力较弱且常呈现，染色力较弱且常呈现偏碱性。染液存放时间越久，染色力越强。偏碱性。染液存放时间越久，染色力越强。通常在染液配制通常在染液配制12周后才使用，盛装染液周后才使用，盛装染液的瓶子应加塞盖密。以防吸潮而影响染液的瓶子应加塞盖密。以防吸潮而影响染液质量。质量。第26页/共75页第二十七页，共75页。影响染色效果影响染色效果(xiogu)的因素的因素n n（3）染液稀释后使用时间）染液稀释后使用时间 吉氏和瑞氏染液吉氏和瑞氏染液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产的主要成份是美蓝、
31、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，但生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。因此，必须在稀释染液当时使用，一淀。因此，必须在稀释染液当时使用，一般般(ybn)在半小时内染色力最强。在半小时内染色力最强。第27页/共75页第二十八页，共75页。影响染色影响染色(rns)效果效果的因素的因素n n（4）染液的稀释浓度）染液的稀释浓度 染液的染液的浓度高其着色浓度高其着色(zhu s)就快而就快而深，从而疟原虫寄生红细胞的深，从而疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常偏薛氏点粗大显著，但颜色常偏碱；染液浓度
32、过低则染色时间碱；染液浓度过低则染色时间久，颜色偏酸，薛氏点不明显久，颜色偏酸，薛氏点不明显或消失。或消失。n n（5）染色时间）染色时间 染色时间长染染色时间长染色效果好，反之较差。室温高色效果好，反之较差。室温高则着色则着色(zhu s)快，染色时间快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长。可略缩短，气温低可适当延长。因此染色时间应根据染液的质因此染色时间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温而量、新旧、稀释浓度和气温而适当增减。适当增减。第28页/共75页第二十九页，共75页。影响影响(yngxing)染色效果的因染色效果的因素素n n（6）染色用水）染色用水 染液的稀释用水和染色后冲染液
33、的稀释用水和染色后冲洗用水应选择洗用水应选择Ph7.07.2清洁水，通常使用清洁水，通常使用的新鲜的新鲜(xn xin)的蒸馏水或过滤的冷开水，的蒸馏水或过滤的冷开水，以及自来水、井水、河水、泉水和雨水等。以及自来水、井水、河水、泉水和雨水等。如果偏酸或偏碱，可用缓冲蒸馏水调整。如果偏酸或偏碱，可用缓冲蒸馏水调整。染色后发现血膜颜色偏蓝（偏碱）或偏红染色后发现血膜颜色偏蓝（偏碱）或偏红（偏酸）时，可用与之相反的酸、碱度水（偏酸）时，可用与之相反的酸、碱度水冲洗血片予以纠正。冲洗血片予以纠正。第29页/共75页第三十页，共75页。影响染色影响染色(rns)效果的因素效果的因素n n（7）染色后不
34、要）染色后不要(byo)直接将染液倒掉，直接将染液倒掉，应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面一应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面一层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。沾污血膜。第30页/共75页第三十一页，共75页。疟原虫形态特征疟原虫形态特征(tzhng)和鉴别要点和鉴别要点n n在在RBCRBC内发现疟原虫是确诊疟疾和鉴别虫种内发现疟原虫是确诊疟疾和鉴别虫种的重要依据的重要依据n n疟原虫基本构造相同疟原虫基本构造相同-细胞膜、质、核细胞膜、质、核n n瑞氏或姬氏染色：核染成紫红色，胞质呈兰瑞氏或姬氏染色：核染成紫红色，胞质呈兰色，疟原虫消化血红
35、蛋白产物色，疟原虫消化血红蛋白产物-疟色素疟色素(s(s s)s)呈棕黄色呈棕黄色n n疟原虫在疟原虫在RBCRBC内各期形态各不相同内各期形态各不相同第31页/共75页第三十二页，共75页。疟原虫在疟原虫在RBCRBC内的形态内的形态(xngti)(xngti)（三期六种形态（三期六种形态(xngti)(xngti)）n n滋养滋养滋养滋养(zyng)(zyng)(zyng)(zyng)体期：大、小滋养体期：大、小滋养体期：大、小滋养体期：大、小滋养(zyng)(zyng)(zyng)(zyng)体体体体n n裂殖体期：成熟、未成熟裂殖体裂殖体期：成熟、未成熟裂殖体裂殖体期：成熟、未成熟裂殖
36、体裂殖体期：成熟、未成熟裂殖体n n配子体期：雌、雄配子体配子体期：雌、雄配子体配子体期：雌、雄配子体配子体期：雌、雄配子体第32页/共75页第三十三页，共75页。人体人体(rnt)疟原虫的基本结构疟原虫的基本结构 疟原虫基本构造为疟原虫基本构造为 细胞质（胞细胞质（胞浆）、核和疟色素。浆）、核和疟色素。1.1.细胞浆细胞浆 被染成蔚蓝色或深蓝色，随着被染成蔚蓝色或深蓝色，随着(su zhe)(su zhe)虫体发育长大，细胞虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。间日疟原虫发育浆逐渐增多。间日疟原虫发育到大滋养体阶段，胞浆呈阿米到大滋养体阶段，胞浆呈阿米巴样活动，胞浆内有空泡。巴样活动，胞浆内有空泡。
37、第33页/共75页第三十四页，共75页。2.2.2.2.核核核核 即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只有在个呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只有在个呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只有在个呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松别发育阶段较为疏松别发育阶段较为疏松别发育阶段较为疏松(sh sn)(sh sn)(sh sn)(sh sn)，例如间日疟原虫雄，例如间日疟原虫雄，例如间日
38、疟原虫雄，例如间日疟原虫雄配子体的核。有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗配子体的核。有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗配子体的核。有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗配子体的核。有时因胞浆厚密或染色深蓝，使核呈暗红或紫红色。红或紫红色。红或紫红色。红或紫红色。3.3.3.3.疟色素疟色素疟色素疟色素 不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。不着色，颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。间日疟原虫的色素颗粒呈短棒状，黄褐色；恶性疟原间日疟原虫的色素颗粒呈短棒状，黄褐色；恶性疟原间日疟原虫的色素颗粒呈短棒状，黄
39、褐色；恶性疟原间日疟原虫的色素颗粒呈短棒状，黄褐色；恶性疟原虫的色素颗粒呈细砂状，黑褐色；三日疟原虫的色素虫的色素颗粒呈细砂状，黑褐色；三日疟原虫的色素虫的色素颗粒呈细砂状，黑褐色；三日疟原虫的色素虫的色素颗粒呈细砂状，黑褐色；三日疟原虫的色素呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫呈砂粒状，深褐色；卵形疟原虫的色素与间日疟原虫相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。相似。疟色素在虫体内散在分布或聚集成团块。第3
40、4页/共75页第三十五页，共75页。4.4.4.4.被寄生的红细胞被寄生的红细胞被寄生的红细胞被寄生的红细胞 被间日疟原虫寄生的红细胞胀大、颜色变淡。疟被间日疟原虫寄生的红细胞胀大、颜色变淡。疟被间日疟原虫寄生的红细胞胀大、颜色变淡。疟被间日疟原虫寄生的红细胞胀大、颜色变淡。疟原虫发育至阿米巴样体，红细胞出现薛氏点。原虫发育至阿米巴样体，红细胞出现薛氏点。原虫发育至阿米巴样体，红细胞出现薛氏点。原虫发育至阿米巴样体，红细胞出现薛氏点。被恶性疟原虫寄生的红细胞大小正常或稍微缩小，被恶性疟原虫寄生的红细胞大小正常或稍微缩小，被恶性疟原虫寄生的红细胞大小正常或稍微缩小，被恶性疟原虫寄生的红细胞大小正
41、常或稍微缩小，红细胞上有时见到茂氏点。红细胞上有时见到茂氏点。红细胞上有时见到茂氏点。红细胞上有时见到茂氏点。被三日疟原虫寄生的红细胞大小正常，红细胞上被三日疟原虫寄生的红细胞大小正常，红细胞上被三日疟原虫寄生的红细胞大小正常，红细胞上被三日疟原虫寄生的红细胞大小正常，红细胞上可见到齐氏点。可见到齐氏点。可见到齐氏点。可见到齐氏点。被卵形疟原虫寄生的红细胞稍胀大或不胀大，被卵形疟原虫寄生的红细胞稍胀大或不胀大，被卵形疟原虫寄生的红细胞稍胀大或不胀大，被卵形疟原虫寄生的红细胞稍胀大或不胀大，呈卵形或一端呈卵形或一端呈卵形或一端呈卵形或一端(ydun)(ydun)(ydun)(ydun)呈伞矢状，
42、薛氏点出现较呈伞矢状，薛氏点出现较呈伞矢状，薛氏点出现较呈伞矢状，薛氏点出现较早，于环状体阶段便可查见。早，于环状体阶段便可查见。早，于环状体阶段便可查见。早，于环状体阶段便可查见。第35页/共75页第三十六页，共75页。第36页/共75页第三十七页，共75页。第37页/共75页第三十八页，共75页。第38页/共75页第三十九页，共75页。第39页/共75页第四十页，共75页。疟原虫薄血膜形态疟原虫薄血膜形态(xngti)鉴别鉴别（吉氏染色（吉氏染色(rns)）第40页/共75页第四十一页，共75页。间日疟小滋养间日疟小滋养间日疟小滋养间日疟小滋养(zyng)(zyng)(zyng)(zyng
43、)体体体体-环环环环状体状体状体状体 较大，约占寄生较大，约占寄生(jshng)(jshng)红细胞的红细胞的1/31/3，胞浆较薄，胞浆较薄，一个核，很少见到一个红细胞寄生一个核，很少见到一个红细胞寄生(jshng)2(jshng)2个环状个环状体和一个环状体有体和一个环状体有2 2个核。个核。第41页/共75页第四十二页，共75页。间日疟滋养间日疟滋养间日疟滋养间日疟滋养(zyng)(zyng)(zyng)(zyng)体体体体-大滋养大滋养大滋养大滋养(zyng)(zyng)(zyng)(zyng)体体体体n n经经经经8 8 8 810101010小时，虫体增大小时，虫体增大小时，虫体增
44、大小时，虫体增大(zn d)(zn d)(zn d)(zn d)，胞质增多，伸出伪足，阿米巴样，常，胞质增多，伸出伪足，阿米巴样，常，胞质增多，伸出伪足，阿米巴样，常，胞质增多，伸出伪足，阿米巴样，常含空泡。含空泡。含空泡。含空泡。n n出现黄褐色的疟色素，细小、杆状，散在分布。出现黄褐色的疟色素，细小、杆状，散在分布。出现黄褐色的疟色素，细小、杆状，散在分布。出现黄褐色的疟色素，细小、杆状，散在分布。n n红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称薛氏红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称薛氏红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称
45、薛氏红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称薛氏小点小点小点小点第42页/共75页第四十三页，共75页。间日疟间日疟间日疟间日疟-裂殖体裂殖体未成熟裂殖体未成熟裂殖体未成熟裂殖体未成熟裂殖体经经经经40404040小时晚期滋养小时晚期滋养小时晚期滋养小时晚期滋养(zyng)(zyng)(zyng)(zyng)体发育体发育体发育体发育成熟，虫体变圆，成熟，虫体变圆，成熟，虫体变圆，成熟，虫体变圆，空泡消失，核分空泡消失，核分空泡消失，核分空泡消失，核分成成成成2 2 2 2个以上。个以上。个以上。个以上。核开始分裂又称裂殖核开始分裂又称裂殖核开始分裂又称裂殖核开始分裂又称裂殖
46、体前期体前期体前期体前期色素聚集成团块色素聚集成团块色素聚集成团块色素聚集成团块第43页/共75页第四十四页，共75页。间日疟成熟间日疟成熟间日疟成熟间日疟成熟(chngsh)(chngsh)(chngsh)(chngsh)裂殖体裂殖体裂殖体裂殖体n n成熟裂殖子约有成熟裂殖子约有成熟裂殖子约有成熟裂殖子约有1212121224242424个，通常个，通常个，通常个，通常16161616个，排个，排个，排个，排列不规则。列不规则。列不规则。列不规则。n n受染受染受染受染RBC RBC RBC RBC 胀大、颜色胀大、颜色胀大、颜色胀大、颜色苍白、虫体几乎充满苍白、虫体几乎充满苍白、虫体几乎充
47、满苍白、虫体几乎充满(chngmn)(chngmn)(chngmn)(chngmn)红细胞红细胞红细胞红细胞n n疟色素集中成堆，常疟色素集中成堆，常疟色素集中成堆，常疟色素集中成堆，常聚集一侧。聚集一侧。聚集一侧。聚集一侧。第44页/共75页第四十五页，共75页。第45页/共75页第四十六页，共75页。配子体配子体 疟原虫经过几次红细胞内裂体增殖，部分疟原虫经过几次红细胞内裂体增殖，部分裂殖子在红细胞内不再进行裂体增殖，而裂殖子在红细胞内不再进行裂体增殖，而发育发育(fy)(fy)为雌性配子体或雄性配子体，为雌性配子体或雄性配子体，间日疟原虫配子体呈圆形或椭圆形，疟色间日疟原虫配子体呈圆形或
48、椭圆形，疟色素均匀分布于虫体内，核素均匀分布于虫体内，核1 1个。个。第46页/共75页第四十七页，共75页。间日疟原虫雌配子体间日疟原虫雌配子体间日疟原虫雌配子体间日疟原虫雌配子体n n虫体较大，占满胀大的红细虫体较大，占满胀大的红细虫体较大，占满胀大的红细虫体较大，占满胀大的红细胞胞胞胞n n胞质致密，色深蓝胞质致密，色深蓝胞质致密，色深蓝胞质致密，色深蓝n n核小致密，深红色，多位于核小致密，深红色，多位于核小致密，深红色，多位于核小致密，深红色，多位于(wiy)(wiy)(wiy)(wiy)虫体一侧虫体一侧虫体一侧虫体一侧n n疟色素黄褐色，均匀散在疟色素黄褐色，均匀散在疟色素黄褐色，
49、均匀散在疟色素黄褐色，均匀散在间日疟原虫雄配子体间日疟原虫雄配子体间日疟原虫雄配子体间日疟原虫雄配子体n n虫体较小，圆形，占满胀大的虫体较小，圆形，占满胀大的虫体较小，圆形，占满胀大的虫体较小，圆形，占满胀大的红细胞红细胞红细胞红细胞n n胞质浅蓝胞质浅蓝胞质浅蓝胞质浅蓝n n核大疏松，淡红色，多位于虫核大疏松，淡红色，多位于虫核大疏松，淡红色，多位于虫核大疏松，淡红色，多位于虫体的中央。体的中央。体的中央。体的中央。n n疟色素疟色素疟色素疟色素(s s)(s s)(s s)(s s)黄褐色，均匀黄褐色，均匀黄褐色，均匀黄褐色，均匀散在散在散在散在 第47页/共75页第四十八页，共75页。
50、恶性恶性恶性恶性(xng)(xng)(xng)(xng)疟原虫疟原虫疟原虫疟原虫-环状体环状体环状体环状体n n环纤细环纤细环纤细环纤细,约为约为约为约为RBCRBCRBCRBC直径的直径的直径的直径的1/61/61/61/6，RBCRBCRBCRBC不胀大，颜色稍不胀大，颜色稍不胀大，颜色稍不胀大，颜色稍紫或正常紫或正常紫或正常紫或正常n n核核核核1 1 1 1个或个或个或个或2 2 2 2个，红细胞常含个，红细胞常含个，红细胞常含个，红细胞常含2 2 2 2个以上原虫个以上原虫个以上原虫个以上原虫n n虫体常位于虫体常位于虫体常位于虫体常位于(wiy)(wiy)(wiy)(wiy)红细胞