艾滋病抗体检测技术免疫印迹法及质量控制黎俊宏.pptx

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1、会计学1艾滋病抗体检测技术免疫印迹法及质量控制艾滋病抗体检测技术免疫印迹法及质量控制黎俊宏黎俊宏第一页，编辑于星期日：十九点 三十分。全国艾滋病检测技术规范（全国艾滋病检测技术规范（全国艾滋病检测技术规范（全国艾滋病检测技术规范（20152015年修订版）年修订版）年修订版）年修订版）第六章第六章第六章第六章 艾滋病病毒感染实验室检测策略艾滋病病毒感染实验室检测策略艾滋病病毒感染实验室检测策略艾滋病病毒感染实验室检测策略 我国自上世纪我国自上世纪我国自上世纪我国自上世纪8080年代发现第一例艾滋病病例至今，各地市艾滋病感染者呈逐年增长趋势。年代发现第一例艾滋病病例至今，各地市艾滋病感染者呈逐年

2、增长趋势。年代发现第一例艾滋病病例至今，各地市艾滋病感染者呈逐年增长趋势。年代发现第一例艾滋病病例至今，各地市艾滋病感染者呈逐年增长趋势。4 4 临床诊断相关的检测策略及结果报告临床诊断相关的检测策略及结果报告临床诊断相关的检测策略及结果报告临床诊断相关的检测策略及结果报告 4.1 4.1 使用抗体检测试剂的检测流程：使用抗体检测试剂的检测流程：使用抗体检测试剂的检测流程：使用抗体检测试剂的检测流程：4.3 4.3 补充试验检测策略补充试验检测策略补充试验分为补充试验分为抗体确证抗体确证试验和试验和HIV-1核酸核酸试验。抗体确证试验试验。抗体确证试验包括免疫印迹试剂（包括免疫印迹试剂（WB）

3、和条）和条带带/线性免疫试验（线性免疫试验（RIBA/LIA），），特定条件下的替代检测（三种酶特定条件下的替代检测（三种酶联免疫试验、三种快速试验或者联免疫试验、三种快速试验或者酶联免疫加快速试验），免疫层酶联免疫加快速试验），免疫层析或免疫渗滤试验。析或免疫渗滤试验。HIV-1核酸核酸试验包括定性和定量试验。试验包括定性和定量试验。*两种试剂可以是原有试剂加另一种试剂，两种试剂可以是原有试剂加另一种试剂，也可以是两种不同试剂。也可以是两种不同试剂。第1页/共68页第二页，编辑于星期日：十九点 三十分。全国艾滋病检测技术规范（全国艾滋病检测技术规范（全国艾滋病检测技术规范（全国艾滋病检测技术

4、规范（20152015年修订版）年修订版）年修订版）年修订版）第六章第六章第六章第六章 艾滋病病毒感染实验室检测策略艾滋病病毒感染实验室检测策略艾滋病病毒感染实验室检测策略艾滋病病毒感染实验室检测策略第2页/共68页第三页，编辑于星期日：十九点 三十分。全国艾滋病检测技术规范（全国艾滋病检测技术规范（全国艾滋病检测技术规范（全国艾滋病检测技术规范（20152015年修订版）年修订版）年修订版）年修订版）第六章第六章第六章第六章 艾滋病病毒感染实验室检测策略艾滋病病毒感染实验室检测策略艾滋病病毒感染实验室检测策略艾滋病病毒感染实验室检测策略第3页/共68页第四页，编辑于星期日：十九点 三十分。H

5、IV确证试验的方法确证试验的方法 2 3 1 4LIA 条带免疫试验条带免疫试验RIPA 放射免疫沉淀试验放射免疫沉淀试验IFA 免疫荧光试验免疫荧光试验WB 免疫印迹试验免疫印迹试验免疫印迹试验免疫印迹试验HIV抗体抗体WB试验具有很高的敏感性和特异性，是国内试验具有很高的敏感性和特异性，是国内HIV抗体确证的金标准。抗体确证的金标准。RIBA/LIA 条线条线/线性免疫试验线性免疫试验第4页/共68页第五页，编辑于星期日：十九点 三十分。Western Blot与与Southern或或Northern杂交方法类似，但杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰采用的是聚丙烯酰胺

6、凝胶电泳胺凝胶电泳，被检测物是蛋白，被检测物是蛋白质，质，“探针探针”是抗体，是抗体，“显色显色”用标记的二抗。经过用标记的二抗。经过PAGE分离分离的蛋白质样品，转移到固相载体的蛋白质样品，转移到固相载体（例如（例如NC膜）上，固相载体以膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经位素标记的第二抗体起反应，经过底物

7、显色或放射自显影以检测过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。的蛋白成分。WB的原理的原理第5页/共68页第六页，编辑于星期日：十九点 三十分。WB检测检测HIV抗体的原理抗体的原理硝酸纤维试剂膜条上结合了天然硝酸纤维试剂膜条上结合了天然灭活的灭活的HIV-1型病毒蛋白的分离型病毒蛋白的分离颗粒和特异性的颗粒和特异性的HIV-2型合成多型合成多肽。在膜条分别加入稀释的血清肽。在膜条分别加入稀释的血清或血浆样本或对照，孵育。如果或血浆样本或对照，孵育。如果样本中含有样本中含有HIV-1和和HIV-2型的型的特异性抗体，则抗体会与试剂膜特异性

8、抗体，则抗体会与试剂膜条上的条上的HIV-1蛋白和蛋白和HIV-2多肽多肽结合，通过清洗去除试剂膜条上结合，通过清洗去除试剂膜条上的未结合物，与的未结合物，与HIV蛋白特异性蛋白特异性结合的抗体再通过与带有碱性磷结合的抗体再通过与带有碱性磷酸酶的羊抗人酸酶的羊抗人IgG抗体结合，加抗体结合，加入入BCIP/NBT底物等一系列反底物等一系列反应即可显色。应即可显色。全病毒裂解液电泳得到的膜条全病毒裂解液电泳得到的膜条第6页/共68页第七页，编辑于星期日：十九点 三十分。在在在在HIVHIV颗粒中，外膜蛋白（颗粒中，外膜蛋白（颗粒中，外膜蛋白（颗粒中，外膜蛋白（envenv）基因编码的一个）基因编

9、码的一个）基因编码的一个）基因编码的一个蛋白经糖基化后形成包膜蛋白前体（蛋白经糖基化后形成包膜蛋白前体（蛋白经糖基化后形成包膜蛋白前体（蛋白经糖基化后形成包膜蛋白前体（gp160gp160），），），），其在蛋白酶作用下裂解成外膜蛋白（其在蛋白酶作用下裂解成外膜蛋白（其在蛋白酶作用下裂解成外膜蛋白（其在蛋白酶作用下裂解成外膜蛋白（gp120gp120）和跨）和跨）和跨）和跨膜蛋白（膜蛋白（膜蛋白（膜蛋白（gp41gp41）；核心蛋白（）；核心蛋白（）；核心蛋白（）；核心蛋白（gaggag）基因编码的前）基因编码的前）基因编码的前）基因编码的前体蛋白（体蛋白（体蛋白（体蛋白（p55p55）被蛋白

10、酶裂解为衣壳蛋白（）被蛋白酶裂解为衣壳蛋白（）被蛋白酶裂解为衣壳蛋白（）被蛋白酶裂解为衣壳蛋白（p24p24）和）和）和）和内膜蛋白（内膜蛋白（内膜蛋白（内膜蛋白（p17p17），），），），p39p39为为为为p55p55的碎片；逆转录酶蛋的碎片；逆转录酶蛋的碎片；逆转录酶蛋的碎片；逆转录酶蛋白（白（白（白（polpol）基因编码的逆转录酶（）基因编码的逆转录酶（）基因编码的逆转录酶（）基因编码的逆转录酶（p66p66、p51p51）和核酸）和核酸）和核酸）和核酸内切酶（内切酶（内切酶（内切酶（p31p31），而机体对上述），而机体对上述），而机体对上述），而机体对上述HIVHIV蛋白产生相

11、应蛋白产生相应蛋白产生相应蛋白产生相应的抗体，又在的抗体，又在的抗体，又在的抗体，又在WBWB中出现相应的不同组合的带型。中出现相应的不同组合的带型。中出现相应的不同组合的带型。中出现相应的不同组合的带型。这既是确证这既是确证这既是确证这既是确证HIVHIV抗体阳性的条件，又能作为抗体阳性的条件，又能作为抗体阳性的条件，又能作为抗体阳性的条件，又能作为HIVHIV感染期和感染期和感染期和感染期和AIDSAIDS期的参考依据。期的参考依据。期的参考依据。期的参考依据。第7页/共68页第八页，编辑于星期日：十九点 三十分。HIV模型图模型图脂双层膜脂双层膜gp120gp41包膜糖蛋白包膜糖蛋白p2

12、4衣壳蛋白衣壳蛋白p17内膜蛋白内膜蛋白p7核衣壳蛋白核衣壳蛋白逆转录酶逆转录酶蛋白酶蛋白酶整合酶整合酶第8页/共68页第九页，编辑于星期日：十九点 三十分。env编码编码 外膜蛋白外膜蛋白gp120 跨膜蛋白跨膜蛋白gp41（包膜蛋白前体（包膜蛋白前体gp160为为gp41聚合体）聚合体）env基因的结构及基因的结构及env蛋白蛋白第9页/共68页第十页，编辑于星期日：十九点 三十分。gag基因的结构及基因的结构及gag蛋白功能蛋白功能 gag基因编码病毒核心蛋白基因编码病毒核心蛋白 前体蛋白前体蛋白p55（p39为为p55的碎的碎片）片）、衣壳蛋白、衣壳蛋白p24、内膜、内膜蛋白蛋白p17

13、第10页/共68页第十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。pol基因的结构及基因的结构及pol蛋白蛋白 pol基因编码的酶类基因编码的酶类p66和和p51蛋白为逆转录酶蛋白为逆转录酶p32蛋白则为整合酶蛋白则为整合酶P11蛋白为蛋白酶蛋白为蛋白酶第11页/共68页第十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。严格遵守实验室标准操作程序严格遵守实验室标准操作程序严格遵守实验室标准操作程序严格遵守实验室标准操作程序(SOP)确证试验的要点确证试验的要点严格按照试剂盒说明书操作严格按照试剂盒说明书操作严格控制防止样品间的交叉污染严格控制防止样品间的交叉污染第12页/共68页第十三页，编辑于星期日：十九点

14、三十分。试剂试剂MP生物医学亚太私人有限公司生物医学亚太私人有限公司（MP）HIV-1/2混合型试剂（）混合型试剂（）上海英旻泰生物技术有限公司上海英旻泰生物技术有限公司（IMT）HIV-1/2混合型试剂（混合型试剂（IMT HIV-1/2 Blot）第13页/共68页第十四页，编辑于星期日：十九点 三十分。实验蓝图实验蓝图第14页/共68页第十五页，编辑于星期日：十九点 三十分。实验原始记录实验原始记录第15页/共68页第十六页，编辑于星期日：十九点 三十分。结果的判定结果的判定首先要确定可见到标本质首先要确定可见到标本质控带控带.如果标本质控带是阴性如果标本质控带是阴性,则检测无效则检测无

15、效;因为这表示技术上因为这表示技术上有错误有错误,如未加样本如未加样本,酶结合物酶结合物或底物液。或底物液。与强和与强和/或弱阳性对照试剂或弱阳性对照试剂膜对照膜对照,确定检测试剂膜上每一确定检测试剂膜上每一条带的分子量。条带的分子量。按照试剂盒说明书判定标按照试剂盒说明书判定标准，判断待测样品为阳性、阴准，判断待测样品为阳性、阴性或不确定。性或不确定。第16页/共68页第十七页，编辑于星期日：十九点 三十分。HIV-1抗体阳性抗体阳性 检测出检测出2条条env带（带（gp160/gp41和和gp120）及）及gag（p17，p24，p55）或）或pol（p31，p51，p66）HIV抗体阴性

16、抗体阴性 没有病毒的特异性条带或没有病毒的特异性条带或只检只检测出测出p17抗体抗体HIV抗体不确定抗体不确定 出现任何病毒特异条带，但不出现任何病毒特异条带，但不足以判断为阳性足以判断为阳性试剂盒说明书试剂盒说明书第17页/共68页第十八页，编辑于星期日：十九点 三十分。技术规范（技术规范（2009版）版）HIV-1HIV-1抗体阳性抗体阳性抗体阳性抗体阳性 至少有至少有至少有至少有2 2条条条条envenv带（带（带（带（gp41gp41和和和和gp160/gp120gp160/gp120）出现，或至少）出现，或至少）出现，或至少）出现，或至少1 1条条条条envenv带和带和带和带和p2

17、4p24带同时出现。带同时出现。带同时出现。带同时出现。HIVHIV抗体阴性抗体阴性抗体阴性抗体阴性 无无无无HIVHIV抗体特异带出现。抗体特异带出现。抗体特异带出现。抗体特异带出现。HIVHIV抗体不确定抗体不确定抗体不确定抗体不确定 出现出现出现出现HIVHIV抗体特异带，但不足以判定阳性。抗体特异带，但不足以判定阳性。抗体特异带，但不足以判定阳性。抗体特异带，但不足以判定阳性。HIV-2HIV-2抗体血清学阳性抗体血清学阳性抗体血清学阳性抗体血清学阳性出现出现出现出现HIV-2HIV-2型特异性指示带的样品：如果同时呈型特异性指示带的样品：如果同时呈型特异性指示带的样品：如果同时呈型特

18、异性指示带的样品：如果同时呈HIV-1 HIV-1 抗体阳抗体阳抗体阳抗体阳性反应，只需报告性反应，只需报告性反应，只需报告性反应，只需报告HIV-1 HIV-1 抗体阳性，不推荐进一步做抗体阳性，不推荐进一步做抗体阳性，不推荐进一步做抗体阳性，不推荐进一步做HIV-2 HIV-2 抗体抗体抗体抗体确证试验；如果同时呈确证试验；如果同时呈确证试验；如果同时呈确证试验；如果同时呈HIV-1HIV-1抗体不确定或阴性反应，需用抗体不确定或阴性反应，需用抗体不确定或阴性反应，需用抗体不确定或阴性反应，需用HIV-HIV-2 2型确证试剂再做型确证试剂再做型确证试剂再做型确证试剂再做HIV-2HIV-

19、2的抗体确证试验。同时符合以下二条标准，的抗体确证试验。同时符合以下二条标准，的抗体确证试验。同时符合以下二条标准，的抗体确证试验。同时符合以下二条标准，即出现至少即出现至少即出现至少即出现至少2 2条条条条env env 带（带（带（带（gp36gp36和和和和gp140/gp105gp140/gp105），和试剂盒提供的），和试剂盒提供的），和试剂盒提供的），和试剂盒提供的阳性判定标准，可判为阳性判定标准，可判为阳性判定标准，可判为阳性判定标准，可判为HIV-2HIV-2抗体阳性。抗体阳性。抗体阳性。抗体阳性。第18页/共68页第十九页，编辑于星期日：十九点 三十分。HIVHIV基因组基因

20、组基因组基因组ENVENV区区区区 gp160:gp41gp160:gp41的聚合体的聚合体的聚合体的聚合体 宽的扩散糖蛋白带宽的扩散糖蛋白带宽的扩散糖蛋白带宽的扩散糖蛋白带 gp120:gp120:外膜蛋白外膜蛋白外膜蛋白外膜蛋白 扩散糖蛋白带扩散糖蛋白带扩散糖蛋白带扩散糖蛋白带 gp41:gp41:跨膜蛋白跨膜蛋白跨膜蛋白跨膜蛋白 扩散糖蛋白带扩散糖蛋白带扩散糖蛋白带扩散糖蛋白带POLPOL区区区区 p66:p66:逆转录酶逆转录酶逆转录酶逆转录酶 细窄条带细窄条带细窄条带细窄条带 p51:p51:逆转录酶逆转录酶逆转录酶逆转录酶 细窄条带细窄条带细窄条带细窄条带 p31:p31:核酸内切

21、酶核酸内切酶核酸内切酶核酸内切酶 双重条带双重条带双重条带双重条带GAGGAG区区区区 p55:p55:前体蛋白前体蛋白前体蛋白前体蛋白 细窄条带细窄条带细窄条带细窄条带 p39:p55p39:p55的碎片的碎片的碎片的碎片 细窄条带细窄条带细窄条带细窄条带 p24:p24:核心蛋白核心蛋白核心蛋白核心蛋白 宽阔条带宽阔条带宽阔条带宽阔条带 p17:p17:核心蛋白核心蛋白核心蛋白核心蛋白 宽阔条带宽阔条带宽阔条带宽阔条带条带条带第19页/共68页第二十页，编辑于星期日：十九点 三十分。确证阳性确证阳性第20页/共68页第二十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。首次确证不确定首次确证不确定孕妇

22、第一次确证孕妇第一次确证MSM第一次确证第一次确证第21页/共68页第二十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。再次确证阴性再次确证阴性孕妇孕妇4周后随访确证结果周后随访确证结果MSM4周后随访确证结果周后随访确证结果第22页/共68页第二十三页，编辑于星期日：十九点 三十分。From不确定不确定to阳性阳性送检时间：送检时间：2011年年1月月送检时间：送检时间：2011年年2月月第23页/共68页第二十四页，编辑于星期日：十九点 三十分。质量控制质量控制第24页/共68页第二十五页，编辑于星期日：十九点 三十分。第二章第二章 HIV抗体抗体检测检测7 7 7 7 质量控制质量控制质量控制质量

23、控制 7.1 7.1 7.1 7.1 酶免或发光法抗体检测的室内质量控制酶免或发光法抗体检测的室内质量控制酶免或发光法抗体检测的室内质量控制酶免或发光法抗体检测的室内质量控制7.2 7.2 7.2 7.2 快速法抗体检测质控快速法抗体检测质控快速法抗体检测质控快速法抗体检测质控WBWB法法HIVHIV抗体确证实验质控抗体确证实验质控第25页/共68页第二十六页，编辑于星期日：十九点 三十分。7.1 7.1 7.1 7.1 酶免或发光法抗体检测的室内质量控制酶免或发光法抗体检测的室内质量控制酶免或发光法抗体检测的室内质量控制酶免或发光法抗体检测的室内质量控制7.1.1 7.1.1 7.1.1 7

24、.1.1 试剂盒内部对照试剂盒内部对照试剂盒内部对照试剂盒内部对照7.1.2 7.1.2 7.1.2 7.1.2 室内质控品室内质控品室内质控品室内质控品7.1.3 Levey-Jennings7.1.3 Levey-Jennings7.1.3 Levey-Jennings7.1.3 Levey-Jennings质控图质控图质控图质控图7.1.4 7.1.4 7.1.4 7.1.4 室内质控其他方式室内质控其他方式室内质控其他方式室内质控其他方式“即刻法即刻法即刻法即刻法”质控质控质控质控试剂盒内提供的阳性阳性和阴性阴性对照：判断每次实验的对照：判断每次实验的有有效性效性，不能作为室内质控品不

25、能作为室内质控品使使用；每次须有，且只能同用；每次须有，且只能同批号试剂盒用；如无效，批号试剂盒用；如无效，须重做。须重做。非试剂盒组份的外部外部质控品：监控检测的重复性，且须为弱阳性；判断该批临床样品检测的可信性；每每次须有次须有；失控须重做须重做。可买或自制：稳定稳定、无菌无菌、不不含影响试剂反应含影响试剂反应的防腐剂防腐剂。第二章第二章 HIV抗体检测抗体检测第26页/共68页第二十七页，编辑于星期日：十九点 三十分。7.1.3 Levey-7.1.3 Levey-JenningsJennings质控图质控图7.1.3.1 7.1.3.1 质控图参数质控图参数 外部质控品的外部质控品的均

26、值均值均值均值和和标准差标准差标准差标准差应建立在实验室常规使用方法对应建立在实验室常规使用方法对外部质控品外部质控品外部质控品外部质控品重复重复重复重复测定测定测定测定的基础上。一般采用在的基础上。一般采用在不同批次不同批次检测取得检测取得至少至少2020个数据个数据；如果；如果仅做少仅做少量批次量批次的检测，也的检测，也至少做至少做5 5个批次个批次的检测，的检测，每个批次每个批次中中不少于不少于4 4个个质控血清质控血清测定结果，以建立一个测定结果，以建立一个临时性临时性的均值和标准差，当的均值和标准差，当达到达到2020批次批次数据后，数据后，替代替代临时性的均值和标准差。临时性的均值

27、和标准差。（1 1）算术平均值算术平均值算术平均值算术平均值（）：代表一组质控品测定）：代表一组质控品测定S/COS/CO值值的的均值均值。为了统计学上有。为了统计学上有显著性意义，应该采用显著性意义，应该采用至少至少2020次（天）次（天）测得的外部对照质控品的测得的外部对照质控品的S/COS/CO值计值计算平均值。算平均值。（2 2）标准差标准差标准差标准差（s s）：是描述）：是描述样品与均数样品与均数之间之间离散离散离散离散程度的一个指标，是与质控程度的一个指标，是与质控品品S/COS/CO值均值有关的预期范围。一组值均值有关的预期范围。一组S/COS/CO值的标准差以值的标准差以s

28、s表示。表示。（3 3）变异系数变异系数变异系数变异系数（cv cv）：是反映各次）：是反映各次S/COS/CO值相对于值相对于均值均值离散离散离散离散程度的一个指标，程度的一个指标，可以用来衡量检测的可以用来衡量检测的重复性重复性重复性重复性或或精密度精密度精密度精密度。（4 4）控制限控制限控制限控制限：由实验室根据对外部质控品检测结果的均值和标准差来确：由实验室根据对外部质控品检测结果的均值和标准差来确定。例如，按照定。例如，按照1 12S2S质控规则，控制限为外部质控品质控规则，控制限为外部质控品S/COS/CO均值加减均值加减2 2个标准个标准差；按照差；按照1 13S3S质控规则，

29、控制限为外部质控品质控规则，控制限为外部质控品S/COS/CO均值加减均值加减3 3个标准差。个标准差。第27页/共68页第二十八页，编辑于星期日：十九点 三十分。7.1.3 Levey-7.1.3 Levey-JenningsJennings质控图质控图7.1.3.2 7.1.3.2 质控规则质控规则 实验室在报告结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算实验室在报告结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。目前有许多质控规则，常用的是机审核结果来决定。目前有许多质控规则，常用的是1 12S2S和和1 13S3S规则。规则。（1 1）告警告警告警告警

30、（1 12S2S）：当外部质控品的）：当外部质控品的S/COS/CO值超出值超出 +2s+2s范围时，系统处于告警状态，应予范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将1 12S2S做失控标准，有较高的假失控概率，做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。所以一般不采用。（2 2）失控失控失控失控（1 13S3S）：当外部质控品的）：当外部质控品的S/COS/CO值超出值超出 +3s+3s范围时，系统处于失控状态，范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部质控品本次实验结果不能被接

31、受，可能是系统误差、随机误差或外部质控品 稳稳定性下降所致。定性下降所致。7.1.3.3 7.1.3.3 质控图的质控图的分析分析分析分析及及失控处理失控处理失控处理失控处理 实验室应建立质控图分析及失控情况处理的程序。当出现失控时，必须找出实验室应建立质控图分析及失控情况处理的程序。当出现失控时，必须找出发生问题的原因，找出解除问题的方法，并消除原因。发生问题的原因，找出解除问题的方法，并消除原因。外部质控品？实验操作？不同人员？仪器？（如加样枪？洗板机堵孔？酶标仪未每年校准？）绘制质控图错误？第28页/共68页第二十九页，编辑于星期日：十九点 三十分。7.1.4 7.1.4 7.1.4 7

32、.1.4 室内质控其他方式室内质控其他方式室内质控其他方式室内质控其他方式“即刻法即刻法即刻法即刻法”质控质控质控质控第29页/共68页第三十页，编辑于星期日：十九点 三十分。7.1.4 7.1.4 7.1.4 7.1.4 室内质控其他方式室内质控其他方式室内质控其他方式室内质控其他方式“即刻法即刻法即刻法即刻法”质控质控质控质控（1）当SI上限和SI下限 n3s值时说明该值已在3s范围之外，属“失控失控”。“即刻法”只能在前20次内使用，超出即可采用L-J质控图方法。第30页/共68页第三十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。第二章第二章 HIV抗体抗体检测检测7.2 7.2 7.2 7.2

33、 快速法抗体检测质控快速法抗体检测质控快速法抗体检测质控快速法抗体检测质控7.2.1 7.2.1 7.2.1 7.2.1 试剂内对照试剂内对照试剂内对照试剂内对照7.2.2 7.2.2 7.2.2 7.2.2 室内质控品对照室内质控品对照室内质控品对照室内质控品对照7.2.3 7.2.3 7.2.3 7.2.3 开展抗体相关检测的实验室须参加开展抗体相关检测的实验室须参加开展抗体相关检测的实验室须参加开展抗体相关检测的实验室须参加有资质有资质有资质有资质机构机构机构机构组织的组织的组织的组织的能力验证能力验证能力验证能力验证，或，或，或，或室间比对室间比对室间比对室间比对。质控窗口内的质控带，

34、试剂自带内部过程质控：实验操作全部完成且实验所用材料处于工作状态；清洁的检测区背景是内部阴性过程质控；如未有红色质控带：试剂盒内质控无效，该结果无效，须重做。外部外部质控品可商用或自制质控品：抗体阳性和阴性样品；下列情况需做质控：更换试剂批号、检测人员、包装、试剂厂家。除此之外，建议每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检测量大于50份样品，至少应作2次质控。出现以下问题，提示存在质量隐患，应引起重视：运输包装、内盒或试剂盒的物理损伤；在单包装内存在混杂物质；标签出现错误、缺失或字迹模糊（特别是产品名称或出产厂家名称，批号和货号，失效期或/和生产日期）；缺失目录；泄漏或污染；不适宜的存放条

35、件；保护包装纸破损或污染；未达到质量控制标准（阳性/阴性控制结果以及质控条带出现与否等标志）；试剂质量问题须报告省确证中心实验室。第31页/共68页第三十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。WBWB法法HIVHIV抗体确抗体确证实验质控证实验质控一、一、一、一、室内室内室内室内质控质控质控质控:仪器质控：仪器是否运转正常，管路是否堵塞；仪器质控：仪器是否运转正常，管路是否堵塞；仪器质控：仪器是否运转正常，管路是否堵塞；仪器质控：仪器是否运转正常，管路是否堵塞；过程质控：过程质控：过程质控：过程质控：1 1、试剂质控，强阳、弱阳、阴性对照；、试剂质控，强阳、弱阳、阴性对照；、试剂质控，强阳、弱阳

36、、阴性对照；、试剂质控，强阳、弱阳、阴性对照；2 2、样品质控，有无交叉污染，相邻的槽道是否出现完、样品质控，有无交叉污染，相邻的槽道是否出现完、样品质控，有无交叉污染，相邻的槽道是否出现完、样品质控，有无交叉污染，相邻的槽道是否出现完全一样的条带；全一样的条带；全一样的条带；全一样的条带；3 3、数据质控，室温、数据质控，室温、数据质控，室温、数据质控，室温253253（20 20 需开空调），结果需开空调），结果需开空调），结果需开空调），结果判读需两名判读人和一名审核人。判读需两名判读人和一名审核人。判读需两名判读人和一名审核人。判读需两名判读人和一名审核人。二、二、二、二、外部外部外部

37、外部质控：参加有资质机构组织的能力验证，即室间比对，质控：参加有资质机构组织的能力验证，即室间比对，质控：参加有资质机构组织的能力验证，即室间比对，质控：参加有资质机构组织的能力验证，即室间比对，如全国艾滋病检测实验室如全国艾滋病检测实验室如全国艾滋病检测实验室如全国艾滋病检测实验室HIVHIV抗体血清学能力验证。抗体血清学能力验证。抗体血清学能力验证。抗体血清学能力验证。第32页/共68页第三十三页，编辑于星期日：十九点 三十分。条带位置条带位置 试剂批号不同甚至同一批号不同试剂批号不同甚至同一批号不同盒子，同一条带的位置并不是相盒子，同一条带的位置并不是相同的同的第33页/共68页第三十四

38、页，编辑于星期日：十九点 三十分。早期感染带型？（疑似）早期感染带型？（疑似）Gp160+p24 gp120很弱或者没有或还很弱或者没有或还有其他有其他第34页/共68页第三十五页，编辑于星期日：十九点 三十分。早期感染带型？（疑似）早期感染带型？（疑似）第35页/共68页第三十六页，编辑于星期日：十九点 三十分。早期感染带型？（疑似）早期感染带型？（疑似）第36页/共68页第三十七页，编辑于星期日：十九点 三十分。第37页/共68页第三十八页，编辑于星期日：十九点 三十分。进展带型？进展带型？第38页/共68页第三十九页，编辑于星期日：十九点 三十分。AIDS（晚）期带型？（晚）期带型？EN

39、V带强度保持恒定，带强度保持恒定，p24缺失或强缺失或强度明显降低度明显降低第39页/共68页第四十页，编辑于星期日：十九点 三十分。AIDS（晚）期带型？（晚）期带型？第40页/共68页第四十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。第二章第二章第二章第二章 HIVHIV抗体检测抗体检测抗体检测抗体检测6.2 6.2 确证报告确证报告确证报告确证报告6.2.1 WB6.2.1 WB及及及及 RIBA/LIARIBA/LIA报告报告报告报告第41页/共68页第四十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。急性期急性期无症状期无症状期窗口期窗口期HIV抗原、抗体变化图抗原、抗体变化图Anti-P24Anti

40、-gp41/120(anti-gp36)HIV RNAAnti-Ag1周周 2周周.1月月 2月月.1年年 2年年 3年年.10年年.艾滋病期艾滋病期Anti-Ab第42页/共68页第四十三页，编辑于星期日：十九点 三十分。献血员中一例阳性献血员中一例阳性送检时间：送检时间：2010年年12月月备注：备注：献血，酶免阴性，核酸阳性。献血，酶免阴性，核酸阳性。检测，酶免阳性，核酸阳性。检测，酶免阳性，核酸阳性。建议仔细询问发生高危行为的时间。建议仔细询问发生高危行为的时间。第43页/共68页第四十四页，编辑于星期日：十九点 三十分。第44页/共68页第四十五页，编辑于星期日：十九点 三十分。第4

41、5页/共68页第四十六页，编辑于星期日：十九点 三十分。第46页/共68页第四十七页，编辑于星期日：十九点 三十分。工欲善其事工欲善其事必先利其器必先利其器第47页/共68页第四十八页，编辑于星期日：十九点 三十分。加样器的使用加样器的使用第48页/共68页第四十九页，编辑于星期日：十九点 三十分。准备准备第49页/共68页第五十页，编辑于星期日：十九点 三十分。设定移液量设定移液量第50页/共68页第五十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。安装吸头安装吸头第51页/共68页第五十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。按压至第一停点位置按压至第一停点位置第52页/共68页第五十三页，编辑于星期日

42、：十九点 三十分。吸液吸液贴壁贴壁第53页/共68页第五十四页，编辑于星期日：十九点 三十分。轻轻按压放液轻轻按压放液贴壁贴壁按压至第一停点后，再按压第二停点，按压至第一停点后，再按压第二停点，排尽吸头残余液体排尽吸头残余液体第54页/共68页第五十五页，编辑于星期日：十九点 三十分。松开按钮，弹回松开按钮，弹回至原来的位置至原来的位置第55页/共68页第五十六页，编辑于星期日：十九点 三十分。按压吸头推顶，退除吸头按压吸头推顶，退除吸头第56页/共68页第五十七页，编辑于星期日：十九点 三十分。加样器的使用加样器的使用正向加样法正向加样法反向加样法反向加样法第57页/共68页第五十八页，编辑

43、于星期日：十九点 三十分。加样器加样器-注意事项注意事项 根据所需取液量选择相应的移液器及吸头，使用根据所需取液量选择相应的移液器及吸头，使用根据所需取液量选择相应的移液器及吸头，使用根据所需取液量选择相应的移液器及吸头，使用带滤芯带滤芯带滤芯带滤芯的吸头，的吸头，的吸头，的吸头，可可可可防止交叉污染防止交叉污染防止交叉污染防止交叉污染。日本日本WATSON：低吸附、高精度、无：低吸附、高精度、无RNA酶、无酶、无DNA酶、无热源、加长吸头酶、无热源、加长吸头、带滤芯已消毒、带滤芯已消毒第58页/共68页第五十九页，编辑于星期日：十九点 三十分。吸取液体时应缓慢匀速吸取，避吸取液体时应缓慢匀速

44、吸取，避免液体溅到移液器头上；打出液免液体溅到移液器头上；打出液体后拇指不应松开按钮，将吸液体后拇指不应松开按钮，将吸液嘴压掉后再将拇指松开，嘴压掉后再将拇指松开，避免液避免液体回吸体回吸。在调整取液量的旋钮时，在调整取液量的旋钮时，不要用不要用力过猛力过猛，并应注意计数器显示的，并应注意计数器显示的数值数值不要超过其可调范围不要超过其可调范围。连续可调式移液器不可在无吸头连续可调式移液器不可在无吸头时使用，吸头时使用，吸头有液体有液体时时不可平放不可平放或倒置或倒置。加样器加样器-注意事项注意事项 第59页/共68页第六十页，编辑于星期日：十九点 三十分。操作时要操作时要操作时要操作时要慢慢

45、慢慢和和和和稳稳稳稳，吸嘴，吸嘴，吸嘴，吸嘴浸入液体深度浸入液体深度浸入液体深度浸入液体深度要要要要合适合适合适合适，吸液过程尽量保持，吸液过程尽量保持，吸液过程尽量保持，吸液过程尽量保持不变；不变；不变；不变；改吸不同液体、样品或试剂改吸不同液体、样品或试剂改吸不同液体、样品或试剂改吸不同液体、样品或试剂前要前要前要前要换新换新换新换新吸嘴；发现吸嘴；发现吸嘴；发现吸嘴；发现吸嘴内吸嘴内吸嘴内吸嘴内有残液有残液有残液有残液时必须更时必须更时必须更时必须更换换换换；新吸嘴使用前应先预测。；新吸嘴使用前应先预测。；新吸嘴使用前应先预测。；新吸嘴使用前应先预测。为防止液体进入移液器套筒内，注意以下

46、几点：压放按钮时为防止液体进入移液器套筒内，注意以下几点：压放按钮时为防止液体进入移液器套筒内，注意以下几点：压放按钮时为防止液体进入移液器套筒内，注意以下几点：压放按钮时保持平稳；移液器不得倒转；吸嘴中有液体时不可将移液器保持平稳；移液器不得倒转；吸嘴中有液体时不可将移液器保持平稳；移液器不得倒转；吸嘴中有液体时不可将移液器保持平稳；移液器不得倒转；吸嘴中有液体时不可将移液器平放；平放；平放；平放；5ML5ML及及及及10ML10ML移液器一定要加移液器一定要加移液器一定要加移液器一定要加滤芯滤芯滤芯滤芯。切勿用油脂等润滑活塞或密封圈。切勿用油脂等润滑活塞或密封圈。切勿用油脂等润滑活塞或密封

47、圈。切勿用油脂等润滑活塞或密封圈。使用了酸性或有腐蚀蒸气的溶液后，最好拆下套筒，用蒸使用了酸性或有腐蚀蒸气的溶液后，最好拆下套筒，用蒸使用了酸性或有腐蚀蒸气的溶液后，最好拆下套筒，用蒸使用了酸性或有腐蚀蒸气的溶液后，最好拆下套筒，用蒸馏水清洗活塞及密封圈。馏水清洗活塞及密封圈。馏水清洗活塞及密封圈。馏水清洗活塞及密封圈。加样器加样器-注意事项注意事项 第60页/共68页第六十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。连续可调式移液器在取样加样过程中应注意移液嘴不能连续可调式移液器在取样加样过程中应注意移液嘴不能连续可调式移液器在取样加样过程中应注意移液嘴不能连续可调式移液器在取样加样过程中应注意移液

48、嘴不能触及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、废液触及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、废液触及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、废液触及其他物品，以免被污染；移液嘴盒（架子）、废液瓶、所取试剂及加样的样品管应瓶、所取试剂及加样的样品管应瓶、所取试剂及加样的样品管应瓶、所取试剂及加样的样品管应摆放合理摆放合理摆放合理摆放合理，以方便操作过，以方便操作过，以方便操作过，以方便操作过程、程、程、程、避免污染避免污染避免污染避免污染为原则。为原则。为原则。为原则。连续可调式连续可调式连续可调式连续可调式移液器移液器移液器移液器在使用完毕后应置于移液器架上，在使用完毕后应置于移液器架上

49、，在使用完毕后应置于移液器架上，在使用完毕后应置于移液器架上，远离潮湿远离潮湿远离潮湿远离潮湿及腐蚀性物质及腐蚀性物质及腐蚀性物质及腐蚀性物质。在取液之前，所取在取液之前，所取在取液之前，所取在取液之前，所取液体液体液体液体应在应在应在应在室温室温室温室温（15-2515-25 C C）平衡平衡平衡平衡；液体温；液体温；液体温；液体温度与室温有异时，将吸嘴预洗多次再用；移液温度不得超度与室温有异时，将吸嘴预洗多次再用；移液温度不得超度与室温有异时，将吸嘴预洗多次再用；移液温度不得超度与室温有异时，将吸嘴预洗多次再用；移液温度不得超过过过过7070。加样器加样器-注意事项注意事项 第61页/共6

50、8页第六十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。加样器加样器-常规维护常规维护 加样器应根据使用频率进行维护，但至少应每加样器应根据使用频率进行维护，但至少应每加样器应根据使用频率进行维护，但至少应每加样器应根据使用频率进行维护，但至少应每3 3个月进行一次，具体方个月进行一次，具体方个月进行一次，具体方个月进行一次，具体方法如下：法如下：法如下：法如下：1 1一般维护可用中性洗涤剂（如洗餐具用的洗涤灵）清洁，或者用一般维护可用中性洗涤剂（如洗餐具用的洗涤灵）清洁，或者用一般维护可用中性洗涤剂（如洗餐具用的洗涤灵）清洁，或者用一般维护可用中性洗涤剂（如洗餐具用的洗涤灵）清洁，或者用60%60%的