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1、现代生物技术研究背景实验材料试验方法结论实验目的与原理阿尔茨海默病 n阿尔茨海默病（AD）是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。n临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征。65岁以前发病者，称早老性痴呆；65岁以后发病者称老年痴呆。文献研究背景n每年都有数百万人患阿尔茨海默病，预计2050年每85人就有一人患此病。n可是，目前还没有发现有效治愈或抑制阿尔茨海默病的方法。阿尔茨海默病现状阿尔茨海默病的病因 淀粉样变产生的不溶性纤维蛋白聚合物（淀粉样蛋白）在大脑中沉积形成斑块“老年斑”，还形成有毒的可溶性的低聚物，对神经细胞
2、有毒害作用。实验目的开创一种快速有效经济检测AD的方法，以便能更好的分析病情实验试剂 氧化石墨烯（GO）白藜芦醇(Res)淀粉样蛋白(A)实验原理 淀粉样蛋白 AD白藜芦醇是一种具有荧光的天然物质，与氧化石墨烯形成复合物之后，白藜芦醇的荧光被淬灭。这种复合物能够准确的识别淀粉样蛋白的单体和多聚体，并且使白藜芦醇的荧光回复。这样就可以通过荧光的有无来检测淀粉样蛋白。实验原理氧化石墨烯氧化石墨烯白藜芦醇白藜芦醇-淀粉样蛋白淀粉样蛋白氧化石墨烯的结构n氧化石墨烯(graphene oxide)是石墨烯的氧化物，是单一的原子层，可以随时在横向尺寸上扩展到数十微米。n氧化石墨仍保持石墨的层状结构，但在每
3、一层的石墨烯单片上引入了许多氧基功能团。结构模型是在氧化石墨烯单片上随机分布着羟基和环氧基，而在单片的边缘则引入了羧基和羰基。氧化石墨烯的结构及优点n良好的光学性质：石墨烯氧化物由于原子结构和电子结构的不均一行，可以再从紫外到近红外的区域发出荧光。用作荧光淬灭剂。n可溶性：氧化石墨烯实际上具有两亲性，从石墨烯薄片边缘到中央呈现亲水至疏水的性质分布。n低毒n便宜氧化石墨烯的优点n白藜芦醇是多酚类化合物，主要来源于葡萄（红葡萄酒）、虎杖、花生、桑椹等植物。n白藜芦醇无味、白色晶体（甲醇）；难溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂。熔点253-255，261即升华。n在紫外光照射下能产生荧光n具有神经保护功能
4、n能够特异性结合淀粉样蛋白n稳定性较差-现配现用白藜芦醇n 淀粉样蛋白(amyloid-，A)是由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein，APP)经-和-分泌酶的蛋白水解作用而产生的含有 3943 个氨基酸的多肽。n由细胞分泌，在细胞基质沉淀聚积后具有很强的神经毒性作用。nA 的神经毒性作用在阿尔茨海默病的病程进展中发挥着主要作用。淀粉样蛋白n沉积状态（脑内的老年斑）的 A 对神经元有毒性作用，引起与阿尔茨海默病的病理变化神经突退缩和神经元变性n溶解状态的 A 在短时间内可促使某些神经突生长，提高神经元的存活率。可溶性的A也具有神经毒性，不同种类的神经元可能对不同形
5、式的A敏感。n而可溶性A与A聚合物可能在AD进展的不同时期起作用，从而导致临床表现的多样性和进行性。淀粉样蛋白n检测氧化石墨烯对白藜芦醇的荧光淬灭效应n证明Res和GO结合n其它蛋白质、离子对检测结果的影响n检测ResGO对单体和多聚体A40/A42的识别作用n脑部荧光显像n检测限实验步骤检测氧化石墨烯对白藜芦醇的荧光淬灭与恢复a:向白藜芦醇向白藜芦醇(Res,20 M)中加入氧化石墨烯中加入氧化石墨烯(GO,050 g/mL),荧荧光变化。光变化。b:向向ResGO中中A42(0200M)，荧光变化。，荧光变化。环境：磷酸盐缓冲液中环境：磷酸盐缓冲液中(0.2 M,pH 7.4)紫外灯照射下
6、紫外灯照射下（I）ResGO几乎没有荧光几乎没有荧光 (II)加入加入A42后荧光恢复后荧光恢复（只需（只需3min快速！）快速！）证明Res和GO结合每个物质都有其特定的吸收峰氧化石墨烯：230nm白藜芦醇：210nm、330nm ResGO：250nm、300nm紫外吸收光谱Res和Go通过键结合吸收峰改变原子力显微镜下不同阶段直观图其它蛋白质、离子对检测结果的影响 当ResGO遇到A42(200 M)和核糖核酸酶A、溶酶体、胃蛋白酶、细胞色素C、生理缓冲液中各种离子时的荧光变化。可以说明其它蛋白、离子对实验结果并没有干扰作用，ResGO与A42的结合具有特异性。检测ResGO分别对A40
7、、A42的单体与多聚体的识别作用上图说明：A40、A42的单体与多聚体都可以被ResGO特异性识别。患AD病小鼠脑部荧光显像b与c叠加后重合度显示图上图直观表明本研究方法与传统检测方法检测到物质相同，此方法是准确的被测物的检测限横坐标表示检测物浓度，纵坐标表示荧光吸收值a：A40单体 b：A40多聚体 c：A42单体d：A42多聚体由上图可推出其检出限分别为277、219、270、120nM实验方法的优点1.省时 传统的荧光免疫检测需要12h;本方法在鼠脑中30min即可显像，在生理缓冲液中只需3min。2.经济 传统方法每检测100份样的成本是1500元，而本方法每100份只需0.85元。#
8、精品课件精品课件！精品课件精品课件！感谢聆听17.要冒一险!整个生命就是一场冒险，走得最远的人常是愿意去做、愿意去冒险的人。15.成功需要改变，用新的方法改变过去的结果。13.拿望远镜看别人，拿放大镜看自己。8、我们确实活得艰难，一要承受种种外部的压力，更要面对自己内心的困惑。在苦苦挣扎中，如果有人向你投以理解的目光，你会感到一种生命的暖意，或许仅有短暂的一瞥，就足以使我感奋不已。3.贫穷是不需要计划的，致富才需要一个周密的计划并去实践它。10.如果我们做与不做都会有人笑，如果做不好与做得好还会有人笑，那么我们索性就做得更好，来给人笑吧!3、遇到会做的题：仔细;遇到不会做的题：冷静。12.磨难
9、有如一种锻炼，一方面消耗大量体能，一方面却又强身健骨。对待磨难有两种态度。一种是主动迎接，一种是被动承受。主动迎接磨难的人，在忍受磨难的痛苦时，内心多是坦然的，磨难使他好象刀剑愈见锋芒。被动承受磨难的人，在为磨难所煎熬时，内心多充满惶惑，磨难使他仿佛卵石愈见圆滑。（）12.这世上的一切都借希望而完成，农夫不会剥下一粒玉米，如果他不曾希望它长成种粒;单身汉不会娶妻，如果他不曾希望有孩子;商人也不会去工作，如果他不曾希望因此而有收益。24、一个有信念者所开发出的力量，大于99个只有兴趣者。2、不是境况造就人，而是人造就境况。2.选择了自由，就得忍受孤寂。19.学会宽容，意味着成长，秀木出木可吸纳更
10、多的日月风华，舒展茁壮而更具成熟的力量。2.来是偶然的，走是必然的。所以你必须，随缘不变，不变随缘。14.进入黑名单就意味着你不再是我看重的人，连陌生人都比不上。6.幸福是需要提醒的，苦难是人生最好的老师。11.感谢那些曾让我伤心难过的日子，我知道快乐已经离我不远了。10.滴水能穿石，只因为它永远打击同一点。15、夫妇一条心，泥土变黄金。11.我们可以失望，但不能盲目。11.人生舞台的大幕随时都可能拉开，关键是你愿意表演，还是选择躲避。2.高峰只对攀登它而不是仰望它的人来说才有真正意义。1、忘掉失败，不过要牢记失败中的教训。7.年轻人看到人生路上满是灿烂的鲜花，老年人看到人生途中的是凄美的斜阳。12.昨晚多几分钟的准备，今天少几小时的麻烦。23、没有口水与汗水，就没有成功的泪水。