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1、细胞生物学实验一显微镜的使用第1页，本讲稿共16页1油镜和测微尺的使用及细胞形态观察2叶绿体分离及荧光镜检（密度梯度离心法）3线粒体的分离及活性染色（差速离心法）4细胞化学（Feulgen反应）5细胞融合6小鼠染色体标本制作及观察7植物细胞骨架的制作及观察8自主实验实验内容安排实验内容安排 第2页，本讲稿共16页1实验报告（70%）2平时表现（30%）考试成绩考试成绩 第3页，本讲稿共16页课程特点与期望没想象中简单努力思考、多动脑会分析、会设计、会解决第4页，本讲稿共16页实验一实验一 油镜和测微尺的使用 及细胞形态观察一、实验目的一、实验目的 掌握油镜和测微尺的使用方法，学会用掌握油镜和测
2、微尺的使用方法，学会用显微尺观察和测量细胞，并按比例绘制细胞大显微尺观察和测量细胞，并按比例绘制细胞大小示意图小示意图。第5页，本讲稿共16页二、实验用品二、实验用品1.器材：普通光学显微镜，台尺，目尺；器材：普通光学显微镜，台尺，目尺；2.材料：兔脊神经节（示高尔基体），鼠肝材料：兔脊神经节（示高尔基体），鼠肝（示线粒体）等（示线粒体）等；3.试剂：香柏油，二甲苯试剂：香柏油，二甲苯。第6页，本讲稿共16页显微镜显微镜组成：组成：1.光学系统：物镜、目镜和照明装置光学系统：物镜、目镜和照明装置2.机械装置：镜座、镜臂、载物台、镜筒、物机械装置：镜座、镜臂、载物台、镜筒、物镜转换器和调焦装置等
3、镜转换器和调焦装置等物镜镜头：物镜镜头：40/0.70 (40物镜放大倍数；物镜放大倍数；0.70镜口率镜口率)160/0.17 (160镜筒长度；镜筒长度；0.17盖玻片厚度盖玻片厚度)第7页，本讲稿共16页显微镜使用原则先低后高先近后远先粗后细第8页，本讲稿共16页油镜的使用油镜的使用1.先用低倍镜观察标本，把油镜下所要观察的先用低倍镜观察标本，把油镜下所要观察的移至视野中心，再换高倍镜观察（用细调调移至视野中心，再换高倍镜观察（用细调调节器调节）。节器调节）。2.旋离高倍镜，在标本上滴一滴香柏油，换旋离高倍镜，在标本上滴一滴香柏油，换油镜镜头，继续调节细调即可观察。油镜镜头，继续调节细调
4、即可观察。第9页，本讲稿共16页3.观察完毕后，旋离油镜镜头，下降载物台，先观察完毕后，旋离油镜镜头，下降载物台，先用干擦镜纸擦用干擦镜纸擦12次，把大部分的香柏油擦掉；次，把大部分的香柏油擦掉；再用二甲苯湿润的擦镜纸擦再用二甲苯湿润的擦镜纸擦23次；最后用干次；最后用干擦镜纸擦擦镜纸擦12次。同样方法擦清标本。次。同样方法擦清标本。注意擦注意擦镜头时要顺镜头直径方向擦，不要沿着镜头镜头时要顺镜头直径方向擦，不要沿着镜头的圆周擦。的圆周擦。第10页，本讲稿共16页三、实验原理（测微尺的使用）三、实验原理（测微尺的使用）测微尺由目尺和台尺组成。目尺是一块圆测微尺由目尺和台尺组成。目尺是一块圆形玻
5、璃片，上面刻有等距离的刻度，分成形玻璃片，上面刻有等距离的刻度，分成50100格。实际刻度因不同物镜的放大倍格。实际刻度因不同物镜的放大倍数以及镜筒长度而不同，需要台尺校定。数以及镜筒长度而不同，需要台尺校定。台尺则是一块特制的载玻片，中央封着一台尺则是一块特制的载玻片，中央封着一把刻度标尺，其每个刻度为把刻度标尺，其每个刻度为0.01mm(10 m)。link第11页，本讲稿共16页每个大格又可分为10个小格，每小格的实际长度为0.01mm总长0.1mm镜台测微尺总长1mm共分为10格第12页，本讲稿共16页四、实验步骤四、实验步骤 1.用用台台尺尺标标定定目目尺尺（10倍倍或或40倍倍物物
6、镜镜）：将将目目尺尺装装入入目目镜镜，有有刻刻度度面面朝朝下下。再再将将台台尺尺固固定定在在载载物物台台上上，小小心心移移动动台台尺尺和和转转动动目目尺尺，使使两两尺尺最最左左边边的的直直线线愈愈合合，然然后后由由左左向向右右找找出出两两尺尺另另一一重重合合的的直直线线。记记录录两两次次重重合合线线间间目目尺尺和和台台尺尺的的格格数数，按公式计算出目尺每格的长度（按公式计算出目尺每格的长度（m)：第13页，本讲稿共16页 台尺格数台尺格数 目尺格数目尺格数 取下台尺，换上标本观测。10 m目尺每格长度(m)第14页，本讲稿共16页2.观观察察各各种种切切片片标标本本，注注意意细细胞胞的的形形态
7、态结结构、核的形态及数量。构、核的形态及数量。3.用用目目尺尺测测量量细细胞胞及及核核的的大大小小（横横距距、宽宽距距及及厚厚度度），每每一一类类被被测测物物测测3个个数数据，最后取平均值。据，最后取平均值。4.按按比例比例画出细胞大小的示意图画出细胞大小的示意图。第15页，本讲稿共16页思考题：思考题：低倍镜的镜口率为什么不能过大？低倍镜的镜口率为什么不能过大？为什么光学显微镜的分辩率极限是为什么光学显微镜的分辩率极限是0.2 m？擦镜头有几种方法？你认为哪种更合适？理擦镜头有几种方法？你认为哪种更合适？理由是什么？由是什么？理想的用于擦镜头的试剂应具有哪些特点？理想的用于擦镜头的试剂应具有哪些特点？第16页，本讲稿共16页