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1、尿液蛋白质、葡萄糖与酮体尿液蛋白质、葡萄糖与酮体检测检测(jin c)长沙(chn sh)医学院临检教研室 陈丽华第一页，共六十五页。目的(md)要求v掌握：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体掌握：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体Rothera改良改良法。法。v熟悉：尿蛋白形成机制与分类、尿蛋白测定的质量熟悉：尿蛋白形成机制与分类、尿蛋白测定的质量控制。控制。v了解：尿酮体的产生了解：尿酮体的产生(chnshng)。v重点：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体重点：尿蛋白、尿糖定性试验和尿酮体Rothera改良改良法。法。v难点：质量控制难点：质量控制第二页，共六十五页。肾单位是肾肾单位是肾的基本功能的基本功能
2、单位，由肾单位，由肾小体和肾小小体和肾小管组成。管组成。肾单位与集合肾单位与集合(jh)管共同完管共同完成泌尿功能。成泌尿功能。肾单位肾单位(dnwi)示意图示意图第三页，共六十五页。肾小球滤过肾小球滤过(l u)膜有筛孔屏障和膜有筛孔屏障和电荷屏障。葡萄电荷屏障。葡萄糖可完全滤过糖可完全滤过(l u)，白蛋白难于，白蛋白难于滤过滤过(l u)。第四页，共六十五页。肾小球滤过肾小球滤过(lu)膜示意图膜示意图第五页，共六十五页。影响肾小球滤影响肾小球滤过的因素：过的因素：肾小球毛细血肾小球毛细血管血压。管血压。囊内压。囊内压。血浆血浆(xujing)胶体渗透压。胶体渗透压。肾血流量。肾血流量。
3、第六页，共六十五页。近球小管重吸收葡萄糖示意图近球小管重吸收葡萄糖示意图重吸收葡萄糖重吸收葡萄糖的部位仅限于的部位仅限于近球小管。近近球小管。近球小管重吸收球小管重吸收葡萄糖有一定葡萄糖有一定的限度。的限度。正常情况正常情况(qngkung)下葡萄糖被全部下葡萄糖被全部重吸收入血。重吸收入血。NaG第七页，共六十五页。脂肪酸脂肪酸乙酰辅酶乙酰辅酶(fmi)A乙酰乙酸乙酰乙酸(y sun)丙酮丙酮(bn tn)羟丁酸羟丁酸酮体在肝细胞中的生成酮体在肝细胞中的生成第八页，共六十五页。羟丁酸羟丁酸乙酰乙酸乙酰乙酸(y sun)乙酰乙酰乙酰乙酰CoA丙酮丙酮(bn tn)自肺、自肺、肾排出肾排出(pi
4、 ch)乙酰乙酰CoA酮体的氧化示意图酮体的氧化示意图酮体肝内生成肝酮体肝内生成肝外利用外利用第九页，共六十五页。第十页，共六十五页。一、概述(i sh)v1.历史：历史：1673年，弗雷德里克年，弗雷德里克.德克斯德克斯(FrederickDekkers)用加热用加热(jir)醋酸酸化尿液方法测定尿液中的醋酸酸化尿液方法测定尿液中的蛋白。蛋白。v1790年，弗兰西斯年，弗兰西斯.贺母（贺母（FancisHome）用硝酸法检）用硝酸法检测水肿患者尿液中的蛋白。测水肿患者尿液中的蛋白。v1827年，理查德年，理查德.伯瑞特（伯瑞特（RichardBright）用加热的）用加热的方法检测肾病患者尿
5、液中的蛋白方法检测肾病患者尿液中的蛋白第十一页，共六十五页。v2.正常尿蛋白的含量和组成正常尿蛋白的含量和组成：尿蛋白总量为尿蛋白总量为30130 30130 mg/24hmg/24h，一次随机，一次随机(su j)(su j)尿为尿为080mg/L080mg/L。v蛋白定性试验：阴性。蛋白定性试验：阴性。v主要成分是相对分子质量小的蛋白如主要成分是相对分子质量小的蛋白如2微球蛋白、微球蛋白、2 2微球蛋白、溶菌酶等。微球蛋白、溶菌酶等。v3.3.蛋白尿：蛋白尿：尿蛋白总量超过尿蛋白总量超过150mg/24h150mg/24h或或100mg/L100mg/L，蛋白定性试验：阳性。蛋白定性试验：
6、阳性。第十二页，共六十五页。二、病理性蛋白尿分类(fn li)及原因v1、肾小球性蛋白尿：最常见、肾小球性蛋白尿：最常见v（1）选择性蛋白尿：）选择性蛋白尿：当肾小球损伤较轻时当肾小球损伤较轻时,以以49万的相对万的相对(xingdu)分子质量中等的清蛋白为主，可伴分子质量中等的清蛋白为主，可伴抗凝血酶、转铁蛋白、糖蛋白及少量小相对抗凝血酶、转铁蛋白、糖蛋白及少量小相对(xingdu)分子质量的分子质量的2M、Fc片断等。片断等。Pro:+-+.Pro大于大于3.5g/24h.v最典型的是肾病综合症。最典型的是肾病综合症。第十三页，共六十五页。（2）非选择性蛋白尿）非选择性蛋白尿v反映肾小球毛
7、细血管壁有严重破裂损伤反映肾小球毛细血管壁有严重破裂损伤(snshng)。以。以分子量较大和中等的蛋白质同时存在为主，分子量较大和中等的蛋白质同时存在为主，Pro：。定量。定量0.53g/L。多见于原发或继发肾。多见于原发或继发肾小球疾病。小球疾病。2.肾小管性蛋白尿肾小管性蛋白尿:感染、中毒引起感染、中毒引起(ynq)。小分子蛋白质尿，。小分子蛋白质尿，Pro：。定量。定量12g/L。常见于肾小管疾病。常见于肾小管疾病。第十四页，共六十五页。v3 3、混合性蛋白尿：、混合性蛋白尿：肾小管和肾小球同时损伤，大中肾小管和肾小球同时损伤，大中小小ProPro均增多。均增多。v4 4、溢出性蛋白尿：
8、、溢出性蛋白尿：指血液循环中，出现了以中、小指血液循环中，出现了以中、小相对分子质量为主的异常蛋白质，如：游离相对分子质量为主的异常蛋白质，如：游离HbHb、肌、肌红蛋白、溶菌酶、本周蛋白等增多，经肾小球滤出，红蛋白、溶菌酶、本周蛋白等增多，经肾小球滤出，超过了肾小管的重吸收最大能力，而大量超过了肾小管的重吸收最大能力，而大量(dling)(dling)出现出现在尿中。在尿中。Pro：。常见于。常见于MM。v5、组织性蛋白尿：、组织性蛋白尿：肾组织代谢产生、组织破坏分解肾组织代谢产生、组织破坏分解的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质等。的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质等。Pro：；多为
9、；多为TH糖蛋白糖蛋白第十五页，共六十五页。三、生理性蛋白尿三、生理性蛋白尿v1.1.功能性蛋白尿功能性蛋白尿：剧烈运动、发热、寒冷刺激、精：剧烈运动、发热、寒冷刺激、精神紧张、交感神经兴奋等，多见与青少年。神紧张、交感神经兴奋等，多见与青少年。v2.2.体位性蛋白尿：体位性蛋白尿：又称直立性蛋白尿，特点：卧位又称直立性蛋白尿，特点：卧位时尿蛋白阴性，起床活动或久立后，尿蛋白阳性时尿蛋白阴性，起床活动或久立后，尿蛋白阳性(yngxng)(yngxng)，平卧后又阴性。多见于发育期少年。，平卧后又阴性。多见于发育期少年。v3.3.偶然性蛋白尿：偶然性蛋白尿：又称假性蛋白尿，混入多量血液、又称假性
10、蛋白尿，混入多量血液、脓液、粘液或生殖系统分泌物，如：白带、月经血、脓液、粘液或生殖系统分泌物，如：白带、月经血、精液、前列腺液等。精液、前列腺液等。第十六页，共六十五页。尿蛋白尿蛋白血浆血浆(xujing)蛋白蛋白 组织组织(zzh)蛋蛋白白肾小球性肾小球性肾小管性肾小管性混合性混合性溢出溢出(y ch)性性组织性组织性泌尿系统、泌泌尿系统、泌尿外系统尿外系统 肾病综肾病综合征、肾合征、肾病性蛋白病性蛋白尿尿 原发、原发、继发肾小继发肾小球疾病球疾病肾小管间肾小管间质病变、质病变、中毒性肾中毒性肾病病 浆细胞病、浆细胞病、血管内溶血管内溶血、肌肉血、肌肉损伤损伤肾脏疾病、肾脏疾病、炎症、中炎
11、症、中毒、泌尿毒、泌尿道结石道结石 泌尿道、泌尿道、生殖道炎症、生殖道炎症、出血、排泌出血、排泌物污染物污染第十七页，共六十五页。四、蛋白质定性检测(jin c)方法v（一）加热乙酸法（一）加热乙酸法v1.原理：原理：加热煮沸使蛋白变性、凝固，加热煮沸使蛋白变性、凝固，v然后加酸使尿液然后加酸使尿液pHpH接近尿蛋白质等电点，在含有接近尿蛋白质等电点，在含有适量无机盐状况下，蛋白质更易于变性沉淀。适量无机盐状况下，蛋白质更易于变性沉淀。v加酸还可溶解因加热析出的磷酸盐或碳酸盐结晶加酸还可溶解因加热析出的磷酸盐或碳酸盐结晶所致的混浊。所致的混浊。v2、材料：、材料：酒精灯、试管、试管夹、滴管酒精
12、灯、试管、试管夹、滴管v3、试剂、试剂(shj)：醋酸醋酸第十八页，共六十五页。（一）加热(ji r)乙酸法v4.操作操作：（：（1）取大试管）取大试管1支，用试管夹夹住管底部，支，用试管夹夹住管底部，加尿液至试管加尿液至试管2/3处。处。（2）斜持试管下端）斜持试管下端(xidun)，在酒精灯上加热下，在酒精灯上加热下1/3处，处，煮沸即止。煮沸即止。（3）加）加5%乙酸乙酸23滴，再煮沸后立即观察结果。滴，再煮沸后立即观察结果。（4）结果判断如下：）结果判断如下：第十九页，共六十五页。实验结果实验结果结果判断结果判断相当含量（相当含量（g/L）清晰透明无清晰透明无-0改变改变黑色背景下，黑
13、色背景下，0.10.15极轻度混浊极轻度混浊明显白色雾状，明显白色雾状，+0.20.5但无颗粒但无颗粒明显混浊，明显混浊，+0.62.0出现颗粒出现颗粒大量大量(dling)絮状沉淀絮状沉淀+2.05.0但无凝块但无凝块严重混浊，严重混浊，+5.0有大凝块有大凝块第二十页，共六十五页。5.注意事项v（1）操作程序要对：加热）操作程序要对：加热加酸加酸再加热。再加热。v（2）加入醋酸量要适当，）加入醋酸量要适当，pH9或或pH9）或偏酸（）或偏酸（pH9或或pH9时，呈假阳性；时，呈假阳性；pH9假阴性假阴性(ynxng)假阴性假阴性(ynxng)假阳性假阳性pH3假阴性假阴性假阴性假阴性假阴性
14、假阴性青霉素青霉素假阳性假阳性假阴性假阴性第三十一页，共六十五页。七、临床意义v1、生理性蛋白尿、生理性蛋白尿定性定性(dngxng)试验：不超过；定试验：不超过；定量试验：小于量试验：小于0。5g/L（1）功能性蛋白尿：）功能性蛋白尿：（4）偶然性蛋白尿：）偶然性蛋白尿：（2）直立性蛋白尿：）直立性蛋白尿：（5）老年性蛋白尿：）老年性蛋白尿：（3）摄入性蛋白尿：）摄入性蛋白尿：（6）妊娠性蛋白尿：）妊娠性蛋白尿：第三十二页，共六十五页。2.病理性蛋白尿v（1）肾前性蛋白尿）肾前性蛋白尿：浆细胞病；血管内溶血；大面积肌肉损伤；：浆细胞病；血管内溶血；大面积肌肉损伤；酶类增多酶类增多(zndu)
15、等。等。v（2）肾性蛋白尿）肾性蛋白尿：v1）肾小球性蛋白尿：肾病综合症；原发性肾小球肾炎；继发性）肾小球性蛋白尿：肾病综合症；原发性肾小球肾炎；继发性肾小球肾炎。肾小球肾炎。v2）肾小管性蛋白尿：肾小管间质病变；重金属中毒；药物中毒；）肾小管性蛋白尿：肾小管间质病变；重金属中毒；药物中毒；器官移植等。器官移植等。v（3）肾后性蛋白尿）肾后性蛋白尿：泌尿、生殖系统炎症；泌尿系统结石、结核、：泌尿、生殖系统炎症；泌尿系统结石、结核、肿瘤等；泌尿系统邻近器官疾病；其他病理性蛋白尿等。肿瘤等；泌尿系统邻近器官疾病；其他病理性蛋白尿等。第三十三页，共六十五页。第三十四页，共六十五页。一、概述(i sh
16、)v1.糖尿糖尿:尿糖定性试验呈阳性的尿液。主要指葡萄糖。尿糖定性试验呈阳性的尿液。主要指葡萄糖。v2.是否是否出现糖尿出现糖尿取决于取决于3 3个因素个因素:v动脉血液动脉血液(xuy)中葡萄糖浓度中葡萄糖浓度v每分钟流经肾小球的血浆量每分钟流经肾小球的血浆量v近端肾小管上皮细胞重吸收葡萄糖的能力近端肾小管上皮细胞重吸收葡萄糖的能力第三十五页，共六十五页。二、尿葡萄糖测定(cdng)的方法v（一）班氏法（一）班氏法（Benedict法）法）v1.原理原理含有醛基的葡萄糖具有含有醛基的葡萄糖具有(jyu)还原性，在高热还原性，在高热及碱性溶液中能将蓝色的硫酸铜还原为黄色的氢氧及碱性溶液中能将蓝
17、色的硫酸铜还原为黄色的氢氧化亚铜及红色氧化亚铜，出现黄色至砖红色沉淀物。化亚铜及红色氧化亚铜，出现黄色至砖红色沉淀物。葡萄糖葡萄糖+硫酸铜硫酸铜氢氧化亚铜氢氧化亚铜氧化亚铜氧化亚铜v2.试剂试剂班氏定性试剂班氏定性试剂v3.操作操作如下如下OH-CHO-黄色黄色(hungs)红棕色红棕色蓝色蓝色第三十六页，共六十五页。加班加班(ji bn)氏试剂氏试剂1ml加热加热(ji r)取尿液取尿液0.1ml加入加入(jir)上述试剂上述试剂中中再加热再加热冷却冷却判断结果判断结果第三十七页，共六十五页。4.4.尿糖定性结果判断尿糖定性结果判断:实验结果实验结果结果判断结果判断相当含量（相当含量（g/L
18、）仍呈蓝色仍呈蓝色-蓝绿色，无沉淀蓝绿色，无沉淀0.1绿色，有少量绿色，有少量+0.10.5绿黄色沉淀绿黄色沉淀黄绿色，有较多黄绿色，有较多+0.51.0沉淀沉淀土黄色，有大量土黄色，有大量+1.02.0沉淀沉淀砖红色砖红色(hngs)沉淀，上沉淀，上+2.0清液无色清液无色第三十八页，共六十五页。5.注意事项v（1）试剂：尿液的比例为）试剂：尿液的比例为10:1,改变比例将影响灵敏改变比例将影响灵敏度和结果。度和结果。v（2）糖尿病患者应于空腹或餐后）糖尿病患者应于空腹或餐后2小时留尿标本小时留尿标本(biobn)检验。检验。v（3）存在大量尿酸盐时，煮沸后可呈绿色但久置后）存在大量尿酸盐时
19、，煮沸后可呈绿色但久置后不变黄而呈灰蓝色，因此必须冷后观察结果。不变黄而呈灰蓝色，因此必须冷后观察结果。第三十九页，共六十五页。5.注意事项v（4）尿中非糖还原性物质过多，如链霉素、青霉素、）尿中非糖还原性物质过多，如链霉素、青霉素、水杨酸、水化氯醛、水杨酸、水化氯醛、VitC、中药大黄、黄岑等可呈、中药大黄、黄岑等可呈阳性反应。所以应停阳性反应。所以应停3天后留标本检测天后留标本检测(jinc)，如静，如静注注VitC5天内不宜做尿糖测定。天内不宜做尿糖测定。v（5）蛋白含量过高，可影响尿糖定性测定，应用加）蛋白含量过高，可影响尿糖定性测定，应用加热乙酸法除去蛋白后再进行检验。热乙酸法除去蛋
20、白后再进行检验。第四十页，共六十五页。6.方法学评价(pngji)v为非特异性试验，可测定尿中所有的还原性物质，因为非特异性试验，可测定尿中所有的还原性物质，因此，尿中此，尿中其它糖其它糖如果糖、乳糖如果糖、乳糖(rtn)和戊糖和和戊糖和一些还原一些还原性药物性药物如氯醛、氨基比林、阿斯匹林、如氯醛、氨基比林、阿斯匹林、VitC和青霉素和青霉素等都可出现等都可出现假阳性假阳性。v已逐渐被葡萄糖氧化酶试带法取代。已逐渐被葡萄糖氧化酶试带法取代。7.参考值：阴性参考值：阴性第四十一页，共六十五页。（二）干化学(huxu)试带法v采用采用(ciyng)葡萄糖氧化酶法原理进行。葡萄糖氧化酶法原理进行。
21、v1.原理：原理：葡萄糖氧化酶试带法：葡萄糖氧化酶试带法：葡萄糖葡萄糖+H2O+O2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶葡萄糖酸葡萄糖酸+H2O2H2O2+色原剂色原剂过氧化物酶过氧化物酶有色物质有色物质（常用的色源剂有邻联甲苯胺（常用的色源剂有邻联甲苯胺(bnn)、碘化钾、氨基比林）、碘化钾、氨基比林）第四十二页，共六十五页。第四十三页，共六十五页。v2.方法学评价方法学评价v（1 1）特异性强，灵敏度高，方法简单快捷可用于目）特异性强，灵敏度高，方法简单快捷可用于目视比色和自动化分析视比色和自动化分析v（2 2）干扰因素：）干扰因素：v假阳性假阳性：a.尿标本容器尿标本容器(rngq)残留强氧化性物质
22、如残留强氧化性物质如漂白粉等；漂白粉等；b.尿比密过低；尿比密过低；v假阴性假阴性：a.标本久置葡萄糖分解；标本久置葡萄糖分解；b.尿酮体浓度过尿酮体浓度过高。高。c.VitC、L-多巴、水杨酸、氟化钠。多巴、水杨酸、氟化钠。第四十四页，共六十五页。（三）（三）薄层薄层(bo cn)(bo cn)层析法层析法1.原理：原理：在层析法中有固定相和流动相，两相间可在层析法中有固定相和流动相，两相间可做相对流动。当样品中各种糖随流动相通过固定相做相对流动。当样品中各种糖随流动相通过固定相时，即反复发生吸附、脱附、解析或其他时，即反复发生吸附、脱附、解析或其他(qt)(qt)亲和亲和作用，由于各种糖在
23、上述性能上的差异而产生移动作用，由于各种糖在上述性能上的差异而产生移动速度的差异，而相互分离。速度的差异，而相互分离。v2.2.方法学评价：方法学评价：可作为确证试验。是鉴定非葡萄糖可作为确证试验。是鉴定非葡萄糖的还原性糖的首选方法。操作繁杂、费时，成本高，的还原性糖的首选方法。操作繁杂、费时，成本高，多用于临床和基础研究。多用于临床和基础研究。第四十五页，共六十五页。三、质量(zhling)控制v1.检测检测(jinc)前：容器、标本、消除前：容器、标本、消除VitC干扰。干扰。v2.检测中：做好室内质控，严格遵循标准化操作规检测中：做好室内质控，严格遵循标准化操作规程。程。v3.检测后：报
24、告审核，与临床联系。检测后：报告审核，与临床联系。第四十六页，共六十五页。q氧化酶试纸法阴性，班氏试剂（还原）实验法阳性氧化酶试纸法阴性，班氏试剂（还原）实验法阳性试纸质量问题试纸质量问题(wnt)(wnt)葡萄糖以外的其他还原糖葡萄糖以外的其他还原糖 尿液中含有较高浓度的还原性物质尿液中含有较高浓度的还原性物质 存在少量葡萄糖伴有高浓度的还原物质存在少量葡萄糖伴有高浓度的还原物质q氧化酶试纸法阳性，还原实验法阴性氧化酶试纸法阳性，还原实验法阴性尿液标本被过氧化物或者次氯酸盐污染尿液标本被过氧化物或者次氯酸盐污染四、尿糖测定四、尿糖测定(cdng)(cdng)结果分析：结果分析：第四十七页，共
25、六十五页。五、临床意义v1.血糖增高性糖尿血糖增高性糖尿：糖尿病性糖尿。糖尿病性糖尿。其他内分其他内分泌异常：如甲亢。泌异常：如甲亢。应激状态：脑血管意外、突然应激状态：脑血管意外、突然(trn)情绪紧张。情绪紧张。饮食因素：一次性摄食过多糖。饮食因素：一次性摄食过多糖。v2.血糖正常性糖尿血糖正常性糖尿：即肾性糖尿。见于慢性肾小球：即肾性糖尿。见于慢性肾小球肾炎、肾病综合征、新生儿糖尿等及妊娠晚期。肾炎、肾病综合征、新生儿糖尿等及妊娠晚期。v3.其他糖尿其他糖尿：乳糖、半乳糖、果糖、戊糖等。：乳糖、半乳糖、果糖、戊糖等。第四十八页，共六十五页。尿糖检查尿糖检查(jinch)(jinch)的临
26、床意义的临床意义糖糖糖糖尿尿尿尿非葡萄糖尿非葡萄糖尿非葡萄糖尿非葡萄糖尿葡萄糖尿葡萄糖尿葡萄糖尿葡萄糖尿胰岛外性糖尿胰岛外性糖尿胰岛外性糖尿胰岛外性糖尿生理性糖尿生理性糖尿生理性糖尿生理性糖尿摄食摄食摄食摄食(shsh)(shsh)性性性性糖尿糖尿糖尿糖尿妊娠妊娠妊娠妊娠(rnshn)(rnshn)性性性性糖尿糖尿糖尿糖尿神经精神性糖尿神经精神性糖尿神经精神性糖尿神经精神性糖尿病理性糖尿病理性糖尿病理性糖尿病理性糖尿真性糖尿真性糖尿真性糖尿真性糖尿半乳糖尿半乳糖尿半乳糖尿半乳糖尿果糖尿果糖尿果糖尿果糖尿戊糖尿戊糖尿戊糖尿戊糖尿其他糖尿其他糖尿其他糖尿其他糖尿第四十九页，共六十五页。第五十页，共
27、六十五页。酮体酮体：脂肪酸分解代谢的中间(zhngjin)产物 丙酮 2%乙酰乙酸 20%-羟丁酸 78%酮血症酮血症酮尿酮尿第五十一页，共六十五页。一、尿液酮体检测一、尿液酮体检测(jin c)原理原理v（一）亚硝基铁氰化钠法原理（一）亚硝基铁氰化钠法原理 尿中丙酮和乙酰乙酸在碱性溶液中与亚硝基铁氰化尿中丙酮和乙酰乙酸在碱性溶液中与亚硝基铁氰化钠反应钠反应(fnyng)(fnyng)生成紫色化合物生成紫色化合物（注：不与酮体中（注：不与酮体中-羟丁酸检测羟丁酸检测)。第五十二页，共六十五页。基于(jy)亚硝基铁氰化钠法原理的尿酮体检测v1.试带法试带法v2.Lange法（朗格法）法（朗格法）
28、v3.RotheraRothera法法v4.4.改良改良(giling)(giling)RotheraRothera法（酮体粉法）法（酮体粉法）v5.5.片剂法片剂法第五十三页，共六十五页。改良改良(giling)(giling)RotheraRothera法（酮体粉法）法（酮体粉法）v试剂试剂(shj)酮体粉：亚硝基铁氰化钠酮体粉：亚硝基铁氰化钠0.5g（粉红色颗（粉红色颗粒），粒），无水碳酸钠无水碳酸钠10g，硫酸铵，硫酸铵10g，混合并研磨均，混合并研磨均匀，密闭于棕色磨口瓶内，严防受潮。匀，密闭于棕色磨口瓶内，严防受潮。v操作操作向玻片或试管中加向玻片或试管中加1小勺酮体粉。小勺酮体粉
29、。v滴加尿液于酮体粉上，至完全浸润。滴加尿液于酮体粉上，至完全浸润。v结果观察：结果观察：5分钟内出现紫色为阳性。结果判定如分钟内出现紫色为阳性。结果判定如下表：下表：第五十四页，共六十五页。表 尿酮体定性结果判断(pndun)标准反应表现反应表现结果结果报告方式报告方式立即出现深紫色立即出现深紫色强阳性强阳性3+4+立即出现淡紫色立即出现淡紫色阳性阳性2+逐渐出现淡紫色逐渐出现淡紫色弱阳性弱阳性+5分钟内无颜色改变分钟内无颜色改变(gibin)阴性阴性-参考值参考值阴性阴性第五十五页，共六十五页。注意事项v标本应新鲜标本应新鲜(xn xin)(xn xin)：由于尿酮体中的丙酮和乙酰由于尿酮
30、体中的丙酮和乙酰乙酸都具有挥发性，乙酰乙酸更易受热分解成丙乙酸都具有挥发性，乙酰乙酸更易受热分解成丙酮；尿液被细菌污染后，酮体消失，因此尿液必酮；尿液被细菌污染后，酮体消失，因此尿液必须新鲜，及时送检，以免因酮体的挥发或分解出须新鲜，及时送检，以免因酮体的挥发或分解出现假阴性结果或结果偏低现假阴性结果或结果偏低 。第五十六页，共六十五页。注意事项v不同方法灵敏度的差异不同方法灵敏度的差异：干学法与酮体粉法灵：干学法与酮体粉法灵敏度存在敏度存在(cnzi)差异，故同一病理标本两种方法可差异，故同一病理标本两种方法可能出现结果的差异，分析结果时应特别注意。能出现结果的差异，分析结果时应特别注意。第
31、五十七页，共六十五页。注意事项v根据病程分析结果：根据病程分析结果：早期，主要酮体成分早期，主要酮体成分(chngfn)羟丁酸，很少或缺乏乙酰乙酸，此时测得结果可导羟丁酸，很少或缺乏乙酰乙酸，此时测得结果可导致对总酮体量估计不足。致对总酮体量估计不足。v在糖尿病酮症酸中毒症状缓解之后，在糖尿病酮症酸中毒症状缓解之后，-羟丁酸转变羟丁酸转变为乙酰乙酸，反而使乙酰乙酸含量比初始急性期增为乙酰乙酸，反而使乙酰乙酸含量比初始急性期增高，易对病情估计过重。高，易对病情估计过重。v因此检验人员必须注意病程发展，与临床医生共同因此检验人员必须注意病程发展，与临床医生共同分析实验结果分析实验结果。第五十八页，
32、共六十五页。方法学评价(pngji)v1.灵敏度：灵敏度：不同方法不同方法(fngf)对各种成分灵敏度不一对各种成分灵敏度不一致。本法与乙酰乙酸发生强反应，与丙酮发生弱致。本法与乙酰乙酸发生强反应，与丙酮发生弱反应，与反应，与-羟丁酸不反应。羟丁酸不反应。v2.干扰因素干扰因素v（1）假阳性：）假阳性：尿中含多量肌酐、肌酸，高色素尿中含多量肌酐、肌酸，高色素尿，尿中含酞、苯丙酮、左旋多巴代谢物等。尿，尿中含酞、苯丙酮、左旋多巴代谢物等。第五十九页，共六十五页。方法学评价(pngji)v（2）假阴性：）假阴性：标本收集和保存不当，标本收集和保存不当，亚硝基铁氰化钠失效，亚硝基铁氰化钠失效，大量维
33、生素大量维生素C，糖尿病酮症酸中毒者肾功能严重受损而肾阈值升高糖尿病酮症酸中毒者肾功能严重受损而肾阈值升高(shno)时，尿酮体可减少，出现加阴性。时，尿酮体可减少，出现加阴性。乙酰乙酸和丙酮不稳定，易分解或挥发导致假阴性。乙酰乙酸和丙酮不稳定，易分解或挥发导致假阴性。第六十页，共六十五页。（二）（二）GerhardtGerhardt法：法：尿中乙酰乙酸的检测：尿中乙酰乙酸的检测：试验原理：尿液中的乙酰乙酸与氯化高铁作用形成赭红色（酒红试验原理：尿液中的乙酰乙酸与氯化高铁作用形成赭红色（酒红试验原理：尿液中的乙酰乙酸与氯化高铁作用形成赭红色（酒红试验原理：尿液中的乙酰乙酸与氯化高铁作用形成赭红
34、色（酒红色）乙酰乙酸铁化合物。色）乙酰乙酸铁化合物。色）乙酰乙酸铁化合物。色）乙酰乙酸铁化合物。vv该法对乙酰乙酸测定的敏感度为该法对乙酰乙酸测定的敏感度为该法对乙酰乙酸测定的敏感度为该法对乙酰乙酸测定的敏感度为700mg/L700mg/L700mg/L700mg/L，尿液久置后乙酰乙酸，尿液久置后乙酰乙酸，尿液久置后乙酰乙酸，尿液久置后乙酰乙酸可转变为丙酮，使结果可转变为丙酮，使结果可转变为丙酮，使结果可转变为丙酮，使结果(ji gu)(ji gu)(ji gu)(ji gu)偏低。偏低。偏低。偏低。vv尿液中的酚类、安替比林、水杨酸盐和重碳酸钠等药物可尿液中的酚类、安替比林、水杨酸盐和重碳
35、酸钠等药物可尿液中的酚类、安替比林、水杨酸盐和重碳酸钠等药物可尿液中的酚类、安替比林、水杨酸盐和重碳酸钠等药物可呈假阳性反应。呈假阳性反应。呈假阳性反应。呈假阳性反应。第六十一页，共六十五页。附：附：-羟丁酸检测羟丁酸检测(jin c)(jin c)(分光光度法）：分光光度法）：-羟丁酸羟丁酸+NAD +NAD 乙酰乙酸乙酰乙酸+NADH +NADH (烟碱辅酶腺嘌呤二核苷酸烟碱辅酶腺嘌呤二核苷酸)在乳酸脱氢酶抑制剂存在下，加入在乳酸脱氢酶抑制剂存在下，加入-羟丁酸脱氢酶羟丁酸脱氢酶和和NADNAD，测定，测定340nm340nm NADHNADH增加的速度。增加的速度。-羟丁酸羟丁酸脱氢酶脱
36、氢酶意义：意义：意义：意义：-羟丁酸的肾阈值比较高，如尿中出现较多羟丁酸的肾阈值比较高，如尿中出现较多-羟丁酸。表明羟丁酸。表明(biomng)(biomng)酮血症加重。酮血症加重。第六十二页，共六十五页。二、临床意义v1.糖尿病酮症酸中毒。糖尿病酮症酸中毒。早期诊断早期诊断治疗监测。治疗监测。新生儿：出现新生儿：出现(chxin)尿酮体强阳性，应怀疑为遗传性疾病。尿酮体强阳性，应怀疑为遗传性疾病。v2.2.非糖尿病性酮症者：非糖尿病性酮症者：（1 1）碳水化合物摄入不足碳水化合物摄入不足（2 2）碳水化合物碳水化合物丢失丢失v3中毒：（中毒：（1）如氯仿、乙醚麻醉后、磷中毒等（）如氯仿、乙
37、醚麻醉后、磷中毒等（2）服用双胍类降糖药）服用双胍类降糖药（如降糖灵）等。（如降糖灵）等。v4.其他：其他：应激状态，感染性疾病如肺炎、伤寒、败血症、结核等发应激状态，感染性疾病如肺炎、伤寒、败血症、结核等发热期，严重腹泻、呕吐包括妊娠反应性、全身麻醉后等均可出现热期，严重腹泻、呕吐包括妊娠反应性、全身麻醉后等均可出现酮尿。酮尿。第六十三页，共六十五页。v当一些原因引起肾糖阈下降时，尿中也可出现尿糖。当一些原因引起肾糖阈下降时，尿中也可出现尿糖。这些原因包括这些原因包括(boku)：1.30%的孕妇会出现生理性肾糖阈下降；的孕妇会出现生理性肾糖阈下降；2.另外肾小管病变也另外肾小管病变也可导致
38、肾糖阈下降（如家庭性肾性糖尿、范可尼综合症、肾小管酸中毒，可导致肾糖阈下降（如家庭性肾性糖尿、范可尼综合症、肾小管酸中毒，葡萄糖重吸收障碍，肾病综合症时有糖尿）；葡萄糖重吸收障碍，肾病综合症时有糖尿）；3.由于进食过多的半乳糖、由于进食过多的半乳糖、甘露糖、果糖、乳糖以及一些糖，在体内代谢失常时可出现相应的糖尿。甘露糖、果糖、乳糖以及一些糖，在体内代谢失常时可出现相应的糖尿。颅脑外伤、脑血管意外、急性心肌梗塞等，由于肾上腺素释放出现应激颅脑外伤、脑血管意外、急性心肌梗塞等，由于肾上腺素释放出现应激性糖尿。性糖尿。4.尿酸、维生素尿酸、维生素C、葡萄糖醛酸，或一些随尿排泄的药物，异、葡萄糖醛酸，
39、或一些随尿排泄的药物，异烟肼、青霉素、强心甙、噻嗪类利尿剂，在尿中浓度升高时，使尿糖假烟肼、青霉素、强心甙、噻嗪类利尿剂，在尿中浓度升高时，使尿糖假阳性。阳性。第六十四页，共六十五页。内容(nirng)总结尿液蛋白质、葡萄糖与酮体检测。Pro:+-+.Pro大于3.5g/24h.。Pro：。肾病综合征、肾病性蛋白尿。尿酸盐和尿酸过多，可出现假阳性。原理：pH指示剂的蛋白误差原理。尿液离子强度低（无盐或低盐饮食者）时，可呈假阴性。1.原理：在层析法中有固定相和流动相，两相间可做相对(xingdu)流动。1.灵敏度：不同方法对各种成分灵敏度不一致。这些原因包括：1.30%的孕妇会出现生理性肾糖阈下降第六十五页，共六十五页。