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1、实验七果蝇的双因子杂交实验第1页，本讲稿共14页一、实验目的一、实验目的一、实验目的一、实验目的1 1、学习果蝇、学习果蝇两对因子两对因子杂交实验的原理和方法。杂交实验的原理和方法。2 2、验证两对非等位基因间的、验证两对非等位基因间的自由组合自由组合现象和遗传规律。现象和遗传规律。3 3、掌握果蝇的、掌握果蝇的杂交技术杂交技术，并学会记录交配结果和数据统计处，并学会记录交配结果和数据统计处理的方法。理的方法。第2页，本讲稿共14页二、实验材料二、实验材料二、实验材料二、实验材料黑腹果蝇（黑腹果蝇（Drosophila melanogasterDrosophila melanogaster）品
2、系灰）品系灰体残翅：体残翅：EEvgvg EEvgvg黑檀体长翅黑檀体长翅 ：eeVgVg eeVgVg 果蝇的果蝇的灰体灰体基因（基因（E E）与）与黑檀体黑檀体基因（基因（e e）为一对相）为一对相对性状，位于对性状，位于R70.7R70.7位置，而位置，而长翅长翅（VgVg）与）与残翅残翅（vgvg）为另一对相对性状，位于为另一对相对性状，位于R67.0R67.0位置。这两对基因是没有连位置。这两对基因是没有连锁关系的，位于锁关系的，位于不同染色体上的非等位基因不同染色体上的非等位基因。第3页，本讲稿共14页三、实验仪器设备药品三、实验仪器设备药品三、实验仪器设备药品三、实验仪器设备药品
3、 体视显微镜、恒温培养箱、培养瓶、麻醉瓶、毛笔、体视显微镜、恒温培养箱、培养瓶、麻醉瓶、毛笔、滤纸、培养皿等。滤纸、培养皿等。乙醚、玉米粉、琼脂、红塘、酵母粉、丙酸等。乙醚、玉米粉、琼脂、红塘、酵母粉、丙酸等。第4页，本讲稿共14页四、实验原理四、实验原理自由组合规律自由组合规律：位于非同源染色体上的两对：位于非同源染色体上的两对非等位非等位基因，其杂合体在形成基因，其杂合体在形成配子配子时，等位基因彼此分离，时，等位基因彼此分离，进入不同的配子中，非等位基因可进入不同的配子中，非等位基因可自由组合自由组合进入进入同一配子，结果产生同一配子，结果产生4 4种种比例相等的配子。若显性比例相等的配
4、子。若显性完全，完全，F F1 1自交产生自交产生F F2 2代表现出代表现出4 4种表型，比例为种表型，比例为9 9：3 3：3 3：1 1。第5页，本讲稿共14页 P P：灰体残翅（灰体残翅（）黑檀体长翅（黑檀体长翅（）F F1 1：灰体长翅灰体长翅 EeVgvg EeVgvg F F2 2 四、实验原理四、实验原理正交：正交：灰残灰残 Eevgvg Eevgvg（）黑长黑长 eeVgVg eeVgVg（）反交：反交：黑长黑长 eeVgVg eeVgVg（）灰残灰残 EEvgvg EEvgvg（）注意注意：双因：双因子杂交也可子杂交也可做做反交反交，但，但因残翅果蝇因残翅果蝇不能飞，只不能
5、飞，只能爬行，用能爬行，用做母本比较做母本比较好。好。正正交交自交自交EEvgvg eeVgVg第6页，本讲稿共14页四、实验原理四、实验原理 EVg 1/4EVg 1/4Evg 1/4Evg 1/4eVg 1/4eVg 1/4Evg 1/4Evg 1/4EVg 1/4EVg 1/41/161/161/161/161/161/161/161/16Evg 1/4Evg 1/41/161/161/161/161/161/161/161/16eVg 1/4eVg 1/41/161/161/161/161/161/161/161/16Evg 1/4Evg 1/41/161/161/161/161/16
6、1/161/161/16 1 EEVgVg 1 EEvgvg9 E_Vg_ 2 EEVgvg 2 Eevgvg 2 EeVgVg 1 eeVgVg 4 EeVgvg 2 eevgvg 1 eevgvg3 E_vgvg 3 eeVg_F F2 2配子配子第7页，本讲稿共14页五、实验步骤五、实验步骤 1.1.选选处女蝇：处女蝇：每组做正交每组做正交1 1瓶，瓶，正交正交选灰体残翅为母本，选灰体残翅为母本，黑黑檀体檀体长翅长翅为为父本父本，将旧瓶中的果蝇麻醉全部处死，在，将旧瓶中的果蝇麻醉全部处死，在8h8h内内收集处女蝇至少收集处女蝇至少5 5只，雌雄分开培养，可提前只，雌雄分开培养，可提前2-
7、32-3天收集。天收集。2.2.杂交杂交：将处：将处女蝇女蝇5 5只只和和5 5只黑檀体雄蝇只黑檀体雄蝇麻醉、转移到新的杂麻醉、转移到新的杂交瓶中，确保杂交瓶中各只果蝇完全苏醒，没有死蝇。交瓶中，确保杂交瓶中各只果蝇完全苏醒，没有死蝇。贴好标签，于贴好标签，于2525培养；培养；3.3.处死亲本处死亲本：7d7d后，处死后，处死杂交亲本杂交亲本。4.4.观察观察F F1 1：再过再过4-54-5天，天，F F1 1成蝇出现，连续观察成蝇出现，连续观察2 23 3天，或在处天，或在处死亲本死亲本7 7天后，集中观察记录天后，集中观察记录F F1 1表型表型。第8页，本讲稿共14页五、实验步骤五、
8、实验步骤 4.F4.F1 1互交互交：选取：选取5 5对对F F1 1果蝇，分别转入一新培养瓶（不需处果蝇，分别转入一新培养瓶（不需处女蝇），贴好标签，于女蝇），贴好标签，于2525培养。培养。5.5.处死亲本处死亲本：7d7d后，杀死后，杀死F F1 1代亲本代亲本果蝇果蝇6.6.观察观察F F2 2：再过再过5d5d，F F2 2成蝇出现，开始观察记录成蝇出现，开始观察记录F F2 2 ，连续，连续统计统计7-8d7-8d。注意：（统计过的果蝇放入酒精瓶中，杀死）注意：（统计过的果蝇放入酒精瓶中，杀死）第9页，本讲稿共14页六、实验结果六、实验结果 1.1.观察并统计观察并统计F F1 1
9、代表型代表型及及个体数个体数，分析相对性状间的显、隐，分析相对性状间的显、隐性关系；把你的统计结果，填入性关系；把你的统计结果，填入表表1 1 。2.2.观察并统计观察并统计F F2 2代表型代表型及各种表型的及各种表型的个体数个体数，特别要注意新性状，特别要注意新性状组合个体的出现。计算不同表型个体数的比例，确定这两队基因组合个体的出现。计算不同表型个体数的比例，确定这两队基因的遗传规律。把你的统计结果，填入的遗传规律。把你的统计结果，填入表表2 2 。3.3.根据你的结果，对该实验根据你的结果，对该实验F F2 2代的统计结果作代的统计结果作X X2 2测验测验，填入，填入表表3 3 。第
10、10页，本讲稿共14页 观察结果观察结果统计日期统计日期灰体残翅（灰体残翅（）黑檀体长翅（黑檀体长翅（）灰体灰体长长翅数翅数灰体残翅数灰体残翅数黑檀体黑檀体长长翅数翅数黑檀体残翅数黑檀体残翅数表表1 F1 F1 1代表型数量统计表代表型数量统计表 观察结果观察结果统计日期统计日期 （）（）灰体灰体长长翅数翅数灰体残翅数灰体残翅数黑檀体黑檀体长长翅数翅数黑檀体残翅数黑檀体残翅数 合合 计计六、实验结果六、实验结果 表表2 F2 F2 2代表型数量统计表代表型数量统计表第11页，本讲稿共14页灰体长翅数灰体长翅数 灰体残翅数灰体残翅数 黑檀体长翅黑檀体长翅数数黑檀体残翅黑檀体残翅数数实际观察数实际
11、观察数（O O）预期数（预期数（E E）偏差（偏差（O-EO-E）(O-E)(O-E)2 2/E/E自由度自由度n n1 1表表3 F3 F2 2代的统计结果做代的统计结果做X X2 2测验测验六、实验结果六、实验结果 x x2 2(O-E)(O-E)2 2/E/E第12页，本讲稿共14页x x2 2表表 Pn0.990.950.500.100.050.020.0110.000160.00390.152.713.845.416.6420.02010.1031.394.615.997.829.2130.1150.3522.376.257.829.8411.3540.2970.7113.367.789.4911.6713.2850.5541.1454.359.2411.0713.3915.09102.5583.9409.3415.9918.3121.1623.21六、实验结果六、实验结果 第13页，本讲稿共14页 六六 作作 业业1.1.交实验报告，完成各种统计表格内容。交实验报告，完成各种统计表格内容。2.2.为什么要选择处女蝇做杂交？为什么要选择处女蝇做杂交？七、思考题七、思考题1.1.基因间发生自由组合的前提是什么？基因间发生自由组合的前提是什么？2 2、如何判断两个基因是连锁遗传还是自由组合？、如何判断两个基因是连锁遗传还是自由组合？第14页，本讲稿共14页