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1、外界因素对酶活性的影响第1页，本讲稿共11页(一一一一)pH)pH值对酶活性的影响值对酶活性的影响值对酶活性的影响值对酶活性的影响 酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性受受受受环环环环境境境境pHpH的的的的影影影影响响响响极极极极为为为为显显显显著著著著，通通通通常常常常各各各各种种种种酶酶酶酶只只只只有有有有在在在在一一一一定定定定的的的的pHpH范范范范围围围围内内内内才才才才能能能能表表表表现现现现它它它它的的的的活活活活，一一一一种种种种酶酶酶酶表表表表现现现现其其其其最最最最高高高高活活活活性性性性时时时时的的的的pHpH值值值值称称称称为为为为该该该该酶酶酶酶的的的的最最最最适适适适
2、pHpH。高高高高于于于于或或或或低低低低于于于于最最最最适适适适pHpH值值值值时时时时，酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性降降降降低低低低。酶酶酶酶的的的的最最最最适适适适pHpH值值值值受受受受酶酶酶酶的的的的纯纯纯纯度度度度、底底底底物物物物的的的的种种种种类类类类和和和和浓浓浓浓度度度度、缓缓缓缓冲冲冲冲液液液液的的的的种种种种类类类类和和和和浓浓浓浓度度度度以以以以及及及及环环环环境境境境温温温温度度度度等等等等条条条条件影响。件影响。件影响。件影响。(二二二二)温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响 每每每每种种种种酶酶酶酶都都都都有有有有其其其其
3、最最最最适适适适温温温温度度度度，高高高高于于于于或或或或低低低低于于于于此此此此温温温温度度度度酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性都都都都降降降降低低低低。一一一一般般般般而而而而言言言言，酶酶酶酶处处处处于于于于过过过过高高高高的的的的温温温温度度度度环环环环境境境境中中中中，会会会会使使使使酶酶酶酶活活活活性性性性永永永永久久久久地地地地丧丧丧丧失失失失；而而而而处处处处于于于于极极极极低低低低温温温温度度度度的的的的环环环环境境境境中中中中只只只只会会会会使使使使酶酶酶酶活活活活性性性性受受受受到到到到抑抑抑抑制制制制，一一一一旦旦旦旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。温度适宜，酶
4、又会全部或部分地恢复其活性。温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。第2页，本讲稿共11页(三三)酶浓度对酶促反应速度的影响酶浓度对酶促反应速度的影响 在在在在其其其其它它它它条条条条件件件件不不不不变变变变的的的的情情情情况况况况下下下下，若若若若反反反反应应应应物物物物浓浓浓浓度度度度大大大大大大大大高高高高于于于于酶酶酶酶浓浓浓浓度度度度时时时时，则则则则反反反反应应应应速速速速度度度度随随随随酶酶酶酶浓浓浓浓度度度度增增增增加加加加而而而而增增增增加加加加，两两两两者者者者间间间间成成成成正正正正比关系，即：比关系，即：比关系，即：比关系，即：V
5、=kEV=kE 但但但但若若若若反反反反应应应应底底底底物物物物浓浓浓浓度度度度较较较较低低低低，而而而而且且且且酶酶酶酶的的的的浓浓浓浓度度度度足足足足够够够够高高高高时时时时，增加酶浓度，反应速度基本不变。增加酶浓度，反应速度基本不变。增加酶浓度，反应速度基本不变。增加酶浓度，反应速度基本不变。(四四)离子对酶活性的影响离子对酶活性的影响 就就就就唾唾唾唾液液液液淀淀淀淀粉粉粉粉酶酶酶酶而而而而言言言言，低低低低浓浓浓浓度度度度ClCl一一一一可可可可以以以以增增增增加加加加酶酶酶酶活活活活性性性性，高高高高浓浓浓浓度度度度的的的的ClCl一一一一或或或或者者者者低低低低浓浓浓浓度度度度的
6、的的的CuCu2+2+则则则则会会会会抑抑抑抑制制制制酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性，而而而而低低低低浓浓浓浓度度度度的的的的NaNa+、SOSO4 42-2-等等等等对对对对酶酶酶酶活活活活性性性性没没没没有有有有影影影影响响响响。不不不不同同同同的的的的酶酶酶酶对对对对不不不不同同同同的离子具有不同的效应。的离子具有不同的效应。的离子具有不同的效应。的离子具有不同的效应。第3页，本讲稿共11页 三、实验操作三、实验操作(一一)pH对酶活性的影响对酶活性的影响1缓冲溶液的配制缓冲溶液的配制取取6只洁净的三角烧瓶，按表只洁净的三角烧瓶，按表1编号和加试剂：编号和加试剂：表表1.磷酸氢二钠一柠
7、檬酸缓冲溶液的配制磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液的配制 三角烧瓶编号三角烧瓶编号三角烧瓶编号三角烧瓶编号 1 12 23 34 45 56 6pHpH值值值值 5.4 5.4 6.2 6.2 6.8 6.8 7.0 7.0 7.47.48.08.00.2 mol0.2 molL L磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸氢二钠磷酸氢二钠(m1)(m1)11.15 11.15 13.2213.22 15.4515.45 16.4716.47 18.1718.17 19.4519.45 0.1 mol0.1 molL L柠檬酸柠檬酸柠檬酸柠檬酸(m1)(m1)8.858.858.858.85 6.786.78 4.5
8、54.55 3.533.53 1.831.83 0.550.55第4页，本讲稿共11页2.2.2.2.pHpH对酶活性的影响对酶活性的影响对酶活性的影响对酶活性的影响 取取取取6 6 6 6支洁净试管，分别编号后，按表支洁净试管，分别编号后，按表支洁净试管，分别编号后，按表支洁净试管，分别编号后，按表2 2 2 2操作：操作：操作：操作：表表表表2 pH2 pH2 pH2 pH对酶活性的影响对酶活性的影响对酶活性的影响对酶活性的影响管管管管 号号号号 1 12 23 34 45 56 6pHpHpHpH值值值值 5.45.46.26.26.86.87.07.0 7.47.48.08.0缓冲液量
9、缓冲液量缓冲液量缓冲液量(m1)(m1)(m1)(m1)3 33 33 33 33 33 3含含含含NaClNaClNaClNaCl的的的的0.50.50.50.5淀粉淀粉淀粉淀粉(m1)(m1)(m1)(m1)2 22 22 22 22 22 2稀释稀释稀释稀释100100100100倍唾液倍唾液倍唾液倍唾液(m1)(m1)(m1)(m1)2 22 22 22 22 22 2充分摇匀充分摇匀充分摇匀充分摇匀 37373737保温，保温，保温，保温，l minl minl minl min后，用滴管从后，用滴管从后，用滴管从后，用滴管从3 3 3 3#管中吸管中吸管中吸管中吸l l l l滴反
10、应液，放白瓷板用碘液检验滴反应液，放白瓷板用碘液检验滴反应液，放白瓷板用碘液检验滴反应液，放白瓷板用碘液检验(1(1(1(1滴滴滴滴)。以后每。以后每。以后每。以后每隔隔隔隔1min1min1min1min检验一次。当检验一次。当检验一次。当检验一次。当3 3 3 3#管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向6 6 6 6支管中加碘液支管中加碘液支管中加碘液支管中加碘液 碘液碘液碘液碘液(滴滴滴滴)2 22 22 22 22 22 2充分摇匀充分摇匀充分摇匀充分摇匀实验结果实验结果实验结果实验结果 第5页，
11、本讲稿共11页(二二)温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响 取取取取3 3 3 3支洁净试管，按表支洁净试管，按表支洁净试管，按表支洁净试管，按表3 3 3 3操作：操作：操作：操作：表表表表3 3 3 3 温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响管管管管 号号号号 1 12 23 3pH6.8pH6.8pH6.8pH6.8磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液(m1)(m1)(m1)(m1)2 22 22 2含含含含NaClNaClNaClNaCl的的的的O.5O.5O.5O.5淀粉液淀粉液淀粉液淀粉液(m1)(m1)(m1)(m1)2 22 22 2稀唾液
12、稀唾液稀唾液稀唾液1 1 1 1：50(m1)50(m1)50(m1)50(m1)1 11 11 1立即处理温度立即处理温度立即处理温度立即处理温度0 010 010 0 37 37 放置放置放置放置15min15min分别从分别从分别从分别从l l l l、2 2 2 2、3 3 3 3支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果 改变处理温度至改变处理温度至改变处理温度至改变处理温度至 3737 3737 3737 作用时间作用时间作用时间作用时间 15min15min再分别
13、从再分别从再分别从再分别从1 1 1 1、2 2 2 2、3 3 3 3管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果 第6页，本讲稿共11页(三三)酶浓度对酶活性的影响酶浓度对酶活性的影响 1 1取取3 3支支洁洁净净试试管管，编编号号，按按表表4 4加加入入淀淀粉粉液液，缓冲液，加毕后放人缓冲液，加毕后放人3737恒温水浴中保温恒温水浴中保温5 min5 min。表表4 4 酶浓度对酶活性的影响酶浓度对酶活性的影响 管号管号管号管号 含含含含NaClNaClNaClNaCl的的的的O O O
14、O5 5 5 5淀粉淀粉淀粉淀粉液液液液 pH6.8pH6.8pH6.8pH6.8的的的的缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液 稀释唾液稀释唾液稀释唾液稀释唾液 褪色褪色褪色褪色时间时间时间时间 101050501001001 13 ml3 ml3 ml3 ml 2 ml2 ml2 ml2 ml 1 ml1 ml1 ml1 ml2 23 ml3 ml3 ml3 ml 2 ml2 ml2 ml2 ml1 ml1 ml1 ml1 ml3 33 ml3 ml3 ml3 ml 2 ml2 ml2 ml2 ml1 ml1 ml1 ml1 ml第7页，本讲稿共11页 2 2保保温温后后，快快速速加加不不同同浓浓度度的
15、的稀稀释释唾唾液液，摇摇匀匀，立立即即放放入入3737恒恒温温水水浴浴中中。计计时时，并并每每隔隔1 1 minmin从从各各管管中中取取出出1 1滴滴，用用碘碘液液检检验验，记记录录从从加加进酶液至碘液检验为橙黄色所需时间。进酶液至碘液检验为橙黄色所需时间。第8页，本讲稿共11页(四四)离子对酶活性的影响离子对酶活性的影响 取取3 3支洁净试管，编号后按表支洁净试管，编号后按表5 5操作：操作：表表5 5 离子对酶活性的影响离子对酶活性的影响管管管管 号号号号 1 12 23 31 1 1 1NaCl(m1)NaCl(m1)NaCl(m1)NaCl(m1)1 10.10.10.10.1CuS
16、OCuSOCuSOCuSO4 4 4 4(m1)(m1)(m1)(m1)1 1蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水(m1)(m1)(m1)(m1)1 1O O O O1 1 1 1淀粉液淀粉液淀粉液淀粉液(m1)(m1)(m1)(m1)3 33 33 3100100100100倍稀释唾液倍稀释唾液倍稀释唾液倍稀释唾液(m1)(m1)(m1)(m1)1 11 11 137373737恒温恒温恒温恒温15min15min15min15min，然后冷却，然后冷却，然后冷却，然后冷却 碘液碘液碘液碘液(滴滴滴滴)2 22 22 2结果结果结果结果 第9页，本讲稿共11页五、实验建议五、实验建议(1)(1)因因各各
17、人人的的唾唾液液淀淀粉粉酶酶活活性性有有所所差差异异，若若某某一一碘碘液液检检验验结结果果为为全全部部变变为为淡淡黄黄色色，或或无无一一变变为为淡淡黄黄色色，则则需需增增大大或或减减少少唾唾液液稀稀释释倍倍数数，或者改变酶作用时间。或者改变酶作用时间。(2)(2)配制缓冲液时，吸量要准确。配制缓冲液时，吸量要准确。(3)(3)检验离子对酶活性影响时，切勿吸错或污染检验离子对酶活性影响时，切勿吸错或污染了试剂。了试剂。第10页，本讲稿共11页六六 实验报告及作业实验报告及作业 1 1 1 1以以以以反反反反应应应应速速速速度度度度为为为为纵纵纵纵坐坐坐坐标标标标，pHpHpHpH值值值值、温温温
18、温度度度度或或或或酶酶酶酶浓浓浓浓度度度度为为为为横横横横坐坐坐坐标标标标，作作作作出出出出反应速度和反应速度和反应速度和反应速度和pHpHpHpH，温度或酶浓度的关系图。，温度或酶浓度的关系图。，温度或酶浓度的关系图。，温度或酶浓度的关系图。2 2 2 2唾唾唾唾液液液液淀淀淀淀粉粉粉粉酶酶酶酶的的的的最最最最适适适适pHpHpHpH和和和和最最最最适适适适温温温温度度度度是是是是多多多多少少少少？如如如如何何何何进进进进一一一一步步步步确确确确定？定？定？定？3.3.3.3.温温温温度度度度为为为为0000和和和和100100100100两两两两支支支支试试试试管管管管中中中中反反反反应应
19、应应液液液液遇遇遇遇碘碘碘碘呈呈呈呈蓝蓝蓝蓝色色色色，其其其其原原原原因有何不同？若恢复最适温度，其结果为什么有差异？因有何不同？若恢复最适温度，其结果为什么有差异？因有何不同？若恢复最适温度，其结果为什么有差异？因有何不同？若恢复最适温度，其结果为什么有差异？4.4.4.4.如如如如何何何何确确确确定定定定氯氯氯氯化化化化钠钠钠钠中中中中氯氯氯氯离离离离子子子子是是是是激激激激活活活活剂剂剂剂，硫硫硫硫酸酸酸酸铜铜铜铜中中中中铜铜铜铜离离离离子子子子是是是是抑抑抑抑制制制制剂？剂？剂？剂？5.5.5.5.什什什什么么么么是是是是酶酶酶酶的的的的最最最最适适适适温温温温度度度度、最最最最适适适
20、适pHpHpHpH，有有有有何何何何实实实实践践践践意意意意义义义义？温温温温度度度度、pHpHpHpH的的的的改变对酶活性有何影响？改变对酶活性有何影响？改变对酶活性有何影响？改变对酶活性有何影响？6.6.6.6.为为为为什什什什么么么么最最最最适适适适温温温温度度度度不不不不是是是是一一一一个个个个物物物物理理理理常常常常数数数数？最最最最适适适适pHpHpHpH是是是是否否否否为为为为一一一一个个个个常常常常数数数数？7.7.7.7.进行酶的实验必须注意控制哪些条件？为什么？进行酶的实验必须注意控制哪些条件？为什么？进行酶的实验必须注意控制哪些条件？为什么？进行酶的实验必须注意控制哪些条件？为什么？第11页，本讲稿共11页