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1、实验一无菌技术及培实验一无菌技术及培养基的配制养基的配制第1页，本讲稿共24页主要参考资料微生物学实验指导：黄秀梨微生物学实验指导：黄秀梨，高等教育出版社，高等教育出版社，2002微生物学实验教程：杨革微生物学实验教程：杨革，科学出版社，科学出版社微生物学教程（第微生物学教程（第2版）：周德庆版）：周德庆，高等教育出版社，高等教育出版社，2000工业微生物实验操作手册工业微生物实验操作手册，诸葛健，轻工出版社，诸葛健，轻工出版社，1997。伯杰士细菌系统发育手册伯杰士细菌系统发育手册、真菌鉴定手册真菌鉴定手册、酵母鉴定手册酵母鉴定手册、放线菌鉴定手册放线菌鉴定手册等工具书等工具书第2页，本讲稿
2、共24页成绩评定单独设课，作为一门独立课程严格进行成绩考核。本门课程单独设课，作为一门独立课程严格进行成绩考核。本门课程成绩评定由平时成绩（成绩评定由平时成绩（80%）+实验理论考试（实验理论考试（20%）组成。）组成。平时成绩包括下列项目：平时成绩包括下列项目：实验纪律及准备（实验纪律及准备（20）平时实验操作和技能（平时实验操作和技能（25）实验报告（实验报告（20）实验设计创新能力及其它能力（实验设计创新能力及其它能力（15）第3页，本讲稿共24页实验考试为理论与实践结合的考试，随机从题库中抽取题目，分为：实验考试为理论与实践结合的考试，随机从题库中抽取题目，分为：(1)微生物学实验的基
3、本操作技能，包括根据菌落形态鉴别所属菌类，微生物学实验的基本操作技能，包括根据菌落形态鉴别所属菌类，制片镜检，选择相应的配方，配制斜面、平板培养基，包扎灭菌，在制片镜检，选择相应的配方，配制斜面、平板培养基，包扎灭菌，在培养基上进行分离接种操作等；培养基上进行分离接种操作等；(2)设计一个大型综合实验的具体实验方案。设计一个大型综合实验的具体实验方案。相对应的考核方法为：相对应的考核方法为：(1)由学生从题库中随机抽取由学生从题库中随机抽取5道题，现场口头回答，每题道题，现场口头回答，每题2分力，教分力，教师根据其回答情况评分，一共师根据其回答情况评分，一共10分；分；(2)开卷，在大型综合实
4、验，即实验四进行之前完成，占开卷，在大型综合实验，即实验四进行之前完成，占10分。分。第4页，本讲稿共24页实验安排实验安排模模块块实验项实验项目目学学时时备备注注I I培养基的制培养基的制备备6 6必做必做微生物的分离微生物的分离纯纯化化8 8必做必做微生物微生物显显微技微技术术6 6必做必做IIII曲曲药药中高温芽中高温芽孢孢菌的分离及初步菌的分离及初步鉴鉴定定1212选选做做酿酿酒微生物生酒微生物生产产特性的特性的检测检测1212选选做做窖（曲）房空气微生物的窖（曲）房空气微生物的检测检测1212选选做做酿酿酒酵母的酒酵母的诱变诱变及高乙醇耐受性菌株的及高乙醇耐受性菌株的筛选筛选1212
5、选选做做四大四大类类型菌型菌DNADNA的提取及的提取及PCRPCR扩扩增增1212选选做做第5页，本讲稿共24页实验报告内容实验报告内容目的要求目的要求实验原理实验原理实验材料实验材料实验步骤实验步骤结果与讨论结果与讨论第6页，本讲稿共24页1.1 无菌技术与培养基的制备无菌技术与培养基的制备（1）微生物培养的常用器具及其灭菌（2）培养基配置的一般过程（3）选择培养基第7页，本讲稿共24页1、Petri dish（1）微生物培养的常用器具及其灭菌）微生物培养的常用器具及其灭菌第8页，本讲稿共24页第9页，本讲稿共24页第10页，本讲稿共24页第11页，本讲稿共24页（2）培养基制备的一般程序
6、）培养基制备的一般程序调配调配 过滤过滤 矫正矫正pH 分装过滤分装过滤 灭菌（一般灭菌（一般121.3，20-30min）鉴定是否有菌鉴定是否有菌 放入冰箱冷藏备用放入冰箱冷藏备用鉴定是否有菌可将培养基置于鉴定是否有菌可将培养基置于37 培养培养24小时，然后观小时，然后观察察第12页，本讲稿共24页培养基：培养基：液体培养基；液体培养基；固体培养基；固体培养基；半固体培养基；半固体培养基；第13页，本讲稿共24页固体培养基；固体培养基；半固体培养基；半固体培养基；琼脂琼脂第14页，本讲稿共24页实验室常用培养基实验室常用培养基肉膏蛋白胨培养基：肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏牛肉膏3g3g，蛋白胨
7、，蛋白胨10g10g，NaCl5gNaCl5g，琼脂，琼脂15-20g15-20g，水，水1000ml1000ml，pH7.0-7.2pH7.0-7.2；淀粉琼脂培养基（高氏淀粉琼脂培养基（高氏1 1号培养基）：号培养基）：可溶性淀粉可溶性淀粉20g20g，KNOKNO3 31g1g，NaCl0.5gNaCl0.5g，K K2 2HPOHPO4 40.5g0.5g，FeSOFeSO4 40.01g0.01g，琼脂，琼脂20g20g，水，水1000ml1000ml，pH7.0-7.2;pH7.0-7.2;PDAPDA培养基：培养基：马铃薯（去皮）马铃薯（去皮）200g200g，蔗糖或葡萄糖，蔗糖
8、或葡萄糖15g15g，琼脂，琼脂15-20g15-20g，水，水1000ml;1000ml;第15页，本讲稿共24页因高压之后因高压之后pH值会下降值会下降0.1左右，所以矫正左右，所以矫正pH时应比所需的时应比所需的pH高高第16页，本讲稿共24页 e.加棉塞，包装。加棉塞，包装。第17页，本讲稿共24页第18页，本讲稿共24页待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制t 高温下培养：分离嗜热细菌；t 培养基中不含N：分离固氮菌；t 培养基加抗生素：分离抗性菌；（3）选择培养基第19页，本讲稿共24页第20页，本讲稿共24页第21页，本讲稿共24页富集培养从自然界中分离到所需的特定微生物特定的环境条件仅适应于该条件的微生物旺盛生长待分离微生物在群落中的数量大大增加第22页，本讲稿共24页营养和生理条件几乎可无穷尽组合营养和生理条件几乎可无穷尽组合根据微生物的特殊要求，分离特定已知微生物种类；根据微生物的特殊要求，分离特定已知微生物种类；分离培养在特定环境中能生长的微生物；分离培养在特定环境中能生长的微生物；第23页，本讲稿共24页二元培养物t 病毒和宿主细胞；t 纤毛虫、变形虫和粘细菌捕食细菌等；蛭弧蛭弧菌菌第24页，本讲稿共24页