菌种制作技术课件.ppt

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1、第六讲第六讲 二、三级菌种制作技术二、三级菌种制作技术食用菌生产技术课程组二、三级菌种制作技术一一.二、三级菌种培养基的配制二、三级菌种培养基的配制二二.二、三级菌种培养基的灭菌二、三级菌种培养基的灭菌三三.二、三级菌种的接种二、三级菌种的接种四四.二、三级菌种的培养二、三级菌种的培养五五.二、三级菌种的质量鉴定二、三级菌种的质量鉴定2 2pptppt课件课件原种和栽培种的生产技术原种和栽培种的生产技术原原种种和和栽栽培培种种的的生生产产，无无论论是是培培养养基基成成分分，配制方法和灭菌方法基本上是相同的。配制方法和灭菌方法基本上是相同的。1）原原种种：是是由由试试管管斜斜面面培培养养基基培培

2、养养的的母母种种作作种种源源接接种种而而成成，主主要要用用于于繁繁殖殖栽栽培培种种，也也可可直直接接用于生产。用于生产。（母种（母种原种）原种）2）栽栽培培种种：由由原原种种作作种种源源扩扩大大而而成成，只只能能用用于于生产生产。（原种（原种栽培种栽培种)3ppt课件二、三级菌种制作流程二、三级菌种制作流程配制培养基灭 菌二级菌种培 养接 种培 养接 种灭 菌配制培养基三级菌种一级菌种二级菌种(二、三级菌种制作过程大同小异二、三级菌种制作过程大同小异二、三级菌种制作过程大同小异二、三级菌种制作过程大同小异)4 4pptppt课件课件原种、栽培种的制作流程原种、栽培种的制作流程按按配配方方称称取

3、取原原料料拌拌料料装装瓶瓶（袋袋）打打洞洞（孔孔径径1cm深深至至瓶瓶底底）灭灭菌菌（1.5kgcm2，1.52h）冷冷却却接接种种（接接入入黄黄豆豆大大小小一一块块）培培养养（2527）菌菌丝丝长长满满瓶瓶（袋袋）培培养养7d8d扩扩大大成成栽栽培种。培种。5ppt课件一.二、三级菌种培养基的配制（一）配制总原则（一）配制总原则 1 1选择适宜的营养物质。选择适宜的营养物质。2 2营养物质间配制的比例要恰当。营养物质间配制的比例要恰当。3 3选择经济实用、来源广泛的原料。选择经济实用、来源广泛的原料。4 4适宜的适宜的pHpH值和含水量。值和含水量。6 6pptppt课件课件培养基（料）配制

4、原则培养基（料）配制原则掌握碳氮比例掌握碳氮比例食食用用菌菌对对碳碳和和氮氮的的需需要要有有一一个个比比例例，简简称称碳碳氮比（氮比（C）。）。菌丝体生长阶段：菌丝体生长阶段：C=20 1；子实体形成阶段：子实体形成阶段：C=3040 1；C过过高高，菌菌丝丝体体生生长长过过旺旺，而而子子实实体体小小、产量低。产量低。7ppt课件选好培养材料选好培养材料首先选不含杀菌物质的木屑首先选不含杀菌物质的木屑杉杉、松松、樟樟等等树树种种，含含酚酚、酯酯、精精油油等等杀杀菌菌物物质质，会会抑抑制制食食用用菌菌生生长长。要要用用必必须须经经过过处处理理，如：蒸煮、晒等。如：蒸煮、晒等。根据食用菌的喜好选木

5、屑根据食用菌的喜好选木屑如：培养香菇用桦木屑就比椴木屑好；如：培养香菇用桦木屑就比椴木屑好；培培养养金金针针菇菇用用构构，楮楮等等木木屑屑就就比比用用榆榆、槐槐等等木屑好。木屑好。8ppt课件注意物理性状注意物理性状培培养养原原料料要要注注意意颗颗粒粒粗粗细细、质质地地软软硬硬程程度度，以及持水性能等物理性状。以及持水性能等物理性状。调节酸碱度调节酸碱度各各种种食食用用菌菌需需要要的的pH值值不不同同，配配制制培培养养料料时时，应应选选用用NaOH、石石灰灰、盐盐酸酸或或过过磷磷酸酸钙钙等等物物质质调调节节pH值值。霉霉菌菌比比食食用用菌菌喜喜欢欢更更低低的的pH值值，生生产产上上有有时时为为

6、了了控控制制这这类类杂杂菌菌的的发发生生，往往往将往将pH值适当调高值适当调高0.51。9ppt课件原料选择的注意事项（几点说明）原料选择的注意事项（几点说明）木屑：木屑：树树种种：除除松松树树、杉杉树树、柏柏树树、樟樟树树、芸芸香香属属、按按属属等等树树种种之之外外，绝绝大大多多数数阔阔叶叶树树和和木木屑屑都都可可以以利利用用。（因因其其中中含含有有酚、酯、精油等杀菌物质）酚、酯、精油等杀菌物质）粗粗细细：不不宜宜过过细细，以以免免培培养养基基过过湿湿或或通气不良。通气不良。10ppt课件选选择择：根根据据食食用用菌菌分分解解能能力力选选择择，分分解解能能力力较较强强的的食食用用菌菌采采用用

7、硬硬质质阔阔叶叶树树木木屑屑，反反之之采用软质树种木屑。采用软质树种木屑。如如：金金针针菇菇分分解解能能力力较较弱弱，以以含含单单宁宁较较少少木木屑为宜，木屑越陈越好；屑为宜，木屑越陈越好；茯茯苓苓菌菌分分解解能能力力较较强强，可可采采用用颗颗粒粒粗粗的的松松木木屑或松木钉。屑或松木钉。11ppt课件米糠、麸皮作用米糠、麸皮作用作用：补充氮源和作用：补充氮源和维生素维生素。稻稻草草、麦麦秸秸、木木屑屑、棉棉籽籽壳壳等等纤纤维维素素原原料料，含氮量低。如：木屑含氮量含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。以下。麸皮：麸皮：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。米糠：

8、米糠：含氮量比麸皮少。含氮量比麸皮少。用量：一般用量：一般10%20%，过多易引起污染。，过多易引起污染。12ppt课件加糖的作用加糖的作用初期补充碳源，用量初期补充碳源，用量1%5%。诱导胞外酶的产生。诱导胞外酶的产生。纤纤维维素素原原料料，食食用用菌菌利利用用缓缓慢慢。加加入入少少量量白白糖糖作作为为食食用用菌菌初初期期补补充充碳碳源源，促促进进菌菌丝丝快快速速生生长长，同同时时诱诱导导纤纤维维素素酶酶的的产生，更好地利用纤维素。产生，更好地利用纤维素。13ppt课件Ca2作用作用提提供供食食用用菌菌钙钙离离子子：原原料料中中加加石石膏膏、CaCO3或或过过磷磷酸酸钙钙、骨骨粉粉提提供供食

9、食用用菌菌钙钙离子；离子；钙不断中和食用菌产生的有机酸；钙不断中和食用菌产生的有机酸；钙还能中和单宁；钙还能中和单宁；减减少少过过量量K、Mg对对菌菌丝丝中中毒毒，促促进进菌菌丝生长。丝生长。14ppt课件1、常用培养料的配方和配制方法、常用培养料的配方和配制方法培培养养料料木屑木屑米糠培养料：米糠培养料：木生菇类木生菇类，如：，如：木耳、银耳、香菇；木耳、银耳、香菇；草茎或草粪草茎或草粪厩肥培养料：厩肥培养料：草生菇类草生菇类，如：蘑菇、草菇；如：蘑菇、草菇；棉籽壳棉籽壳米糠培养料米糠培养料：多种菇类。：多种菇类。（二）培养基常用的配方（二）培养基常用的配方15ppt课件粪草培养基（适用于蘑

10、菇）粪草培养基（适用于蘑菇）稻稻草草或或麦麦秸秸20kg、粪粪肥肥（干干）30kg、石石膏膏500g、水适量。、水适量。方方法法：稻稻草草切切成成2cm长长粪粪肥肥混混合合发发酵酵石石膏膏调水调水装瓶装瓶灭菌灭菌1、常用培养料的配方和配制方法、常用培养料的配方和配制方法16ppt课件w稻草麸皮培养基（草菇）稻草麸皮培养基（草菇）w干稻草干稻草78%、麸皮或米糠、麸皮或米糠20%、蔗糖、蔗糖1%、过磷酸钙、过磷酸钙1%、水适量、水适量w方法：稻草切成方法：稻草切成2cm长长发酵发酵蔗糖蔗糖麸皮过磷酸钙麸皮过磷酸钙17ppt课件木屑米糠培养基木屑米糠培养基（香菇、木耳、猴头、平菇香菇、木耳、猴头、

11、平菇等）等）木木屑屑78%、麸麸皮皮或或米米糠糠20%、石石膏膏1%、蔗蔗糖糖1%、水适量。、水适量。木屑、麸皮、黄豆粉培养基（木屑、麸皮、黄豆粉培养基（银耳银耳）木木 屑屑 50kg、麸麸 皮皮 15kg、黄黄 豆豆 粉粉 1kg、蔗蔗 糖糖0.75kg、MgSO40.25kg、水、水7075kg。棉籽壳培养基（棉籽壳培养基（平菇、猴头、金针菇平菇、猴头、金针菇）棉籽壳棉籽壳99.7%、蔗糖、蔗糖0.1%、石膏、石膏0.2%、水适量。、水适量。1、常用培养料的配方和配制方法、常用培养料的配方和配制方法18ppt课件（三）培养基配制步骤（三）培养基配制步骤称料拌料调节pH值分装培养料清洁（洗或

12、擦）瓶、袋外壁封口1.不溶性主、辅料混拌均匀2.可溶性辅料溶于水后拌入主辅料3.注意检查含水量（手测法等）比实际要求的pH值调高1左右容器：菌种瓶菌种瓶、菌种袋菌种袋要求：上紧下松，外紧内松，中间一个洞1919pptppt课件课件二.二、三级菌种培养基的灭菌 1 1灭菌方法及要求灭菌方法及要求 高压蒸汽灭菌：压力1.5kg/cm2，温度126-128，时间1-2h（谷粒和经过堆制发酵的粪草培养基应达到2-2.5h）。常压蒸汽灭菌：100，保持10-12h卧式高压蒸汽灭菌锅2020pptppt课件课件 2 2灭菌效果检验灭菌效果检验 随机取几瓶（袋）置于25-30温度下空白培养空白培养4-6天，

13、会出现以下情况：全部感杂 少数感杂 全部没有杂菌 3 3、高压蒸汽灭菌锅的使用方法、高压蒸汽灭菌锅的使用方法 按照仪器操作说明操作！分析原因？2121pptppt课件课件三.二、三级菌种的接种概念：菌种移至新培养基上的过程关键：无菌操作无菌操作接种接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手操作器具消毒灭菌开启的管口、瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任何地方动作快、准、稳无菌操作要点22ppt课件接种方法二级种三级种用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋中或瓶中料面上注意：1、严格挑选待接的菌种质量；2、勿接入表面老菌丝及老种块。23ppt课件四.二、三级菌种的培养菌种的培养实际

14、就是对菌丝体的培养培养条件场所清洁空气清新光线暗温度约25空气湿度60%70%2424pptppt课件课件培养方法勿堆放过挤及时剔除污染瓶（袋）及时剔除污染瓶（袋）栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧控制菌龄（菌丝长满7-10天后使用）25ppt课件五五.二、三级菌种的质量鉴定二、三级菌种的质量鉴定菌丝白（或呈该菌种应有的颜色）菌丝白（或呈该菌种应有的颜色）均匀、粗壮、有菇香味均匀、粗壮、有菇香味接种后萌发快接种后萌发快无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象 菌种出售菌种出售必须贴有菌种质量合格标签，必须贴有菌种质量合格标签，标明菌种种类、级别、品种、生产单位和标明菌种种类、级别、品种、生产

15、单位和接种日期。接种日期。合格菌种26ppt课件杂菌检查（菌种检查）杂菌检查（菌种检查）接接种种后后的的原原种种，一一般般在在3d5d左左右右菌菌丝丝恢恢复复生生长长，应应每每天天全全面面检检查查杂杂菌菌情情况况，如如有有污污染染及及时时剔剔除除。（正正常常为为白白色色，若若混混有有其其它它色色泽泽，应应及及时时处处理理）；如如发发现现接接种种块块无无新菌丝萌发，则认为是死菌，应及时补种。新菌丝萌发，则认为是死菌，应及时补种。正常：菌丝白色正常：菌丝白色杂菌：黄、红、绿、黑杂菌：黄、红、绿、黑死菌：补种死菌：补种27ppt课件菌种制作过程中，只要做到选择正确的配方和优质原料严格灭菌优良的二、三

16、级菌种优良的二、三级菌种严格无菌操作科学培育选择优良菌种选择优良菌种28ppt课件六、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法六、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理、母种污染处理细菌污染细菌污染底底部部取取菌菌：可可根根据据细细菌菌只只发发生生在在培培养养基基表表面面，而而真真菌菌菌菌丝丝能能穿穿透透到到培培养养基基内内部部的的特特点点，用用无无菌菌操操作作法法敲敲破破试试管管取取出出培培养养基基，在在培培养养基基的的底底部部挑挑取取一一小小块块带带有有菌菌丝丝的的培培养养基基，移移植植到到另另一一试管中培养，可得到纯正的母种。试管中培养，可得到纯正的母种。29ppt课件1、母种污染

17、处理、母种污染处理细菌污染细菌污染覆覆盖盖培培养养：将将熔熔化化培培养养基基冷冷却却到到40，倒倒在在已已污污染染细细菌菌的的斜斜面面上上，使使之之形形成成厚厚约约20cm的的覆覆盖盖层层，当当食食用用菌菌菌菌丝丝透透过过培培养养基基形形成成新新的的菌菌落落时，即可挑取转管纯化。时，即可挑取转管纯化。30ppt课件1、母种污染处理、母种污染处理真菌污染真菌污染若若污污染染的的是是青青霉霉、黄黄霉霉、木木霉霉等等真真菌菌，只只要要母母种种菌菌丝丝与与这这些些杂杂菌菌没没有有相相联联或或尚尚有有一一部部分分菌菌丝丝没没有有相相联联，并并且且这这些些杂杂菌菌的的菌菌丝丝还还没没有有产产生生孢孢子子时

18、时，可可以以用用无无菌菌方方法法仔仔细细挑挑取取没没有有相相联联的的一一部部分分菌菌丝丝，移移植植到到另另外外的的试试管管中中继继续续培培育育，就能得到纯正的母种。就能得到纯正的母种。31ppt课件2、原原种种、栽栽培培种种被被杂杂菌菌污污染染的的原原因因有有哪哪些些？怎怎样鉴别？样鉴别？根根据据杂杂菌菌开开始始发发生生的的部部位位，大大致致有有以以下下几几种种污染原因：污染原因：若若杂杂菌菌同同时时在在培培养养基基的的上上、中中、下下部部位位发发生生，主要是由于主要是由于培养基灭菌不彻底培养基灭菌不彻底造成的。造成的。若若杂杂菌菌开开始始发发生生在在接接种种块块上上，这这很很可可能能是是母母

19、种种或或原原种种已已经经感感染染了了杂杂菌菌；或或者者是是由由于于接接种种工工具不严格具不严格（消毒），把杂菌带入。（消毒），把杂菌带入。32ppt课件2、原原种种、栽栽培培种种被被杂杂菌菌污污染染的的原原因因有有哪哪些？怎样鉴别？些？怎样鉴别？若若杂杂菌菌先先在在培培养养基基表表面面发发生生，这这是是由由于于接接种种过程中过程中无菌操作不严无菌操作不严而引起的。而引起的。若若杂杂菌菌是是在在接接种种后后若若干干天天才才发发生生的的，而而且且是是发发生生在在瓶瓶口口往往下下挂挂的的，这这说说明明杂杂菌菌是是从从棉棉花花塞塞侵侵入入培培养养基基的的。引引起起的的原原因因是是培培养养室室湿湿度度过

20、过大大、棉塞受潮，造成霉菌滋生所致棉塞受潮，造成霉菌滋生所致。33ppt课件3、为什么母种不能多次转管移植？、为什么母种不能多次转管移植？母母种种转转管管次次数数多多了了会会削削弱弱菌菌丝丝的的生生活活力力，降降低低出出菇菇率率，甚甚至至造造成成菌菌丝丝不不孕孕而而不不能能形形成成子子实实体体。因因此此母母种种培培育育可可以以一一次次多多培培育育几几支支试试管管，不不要要反反复复多多次次分分离离转转管管，以以确确保保菌菌丝丝旺旺盛盛的的生生活力。活力。（发生变异）（发生变异）34ppt课件4、优良菌种的标准是什么？、优良菌种的标准是什么？各各种种食食用用菌菌菌菌种种，既既有有特特定定的的质质量

21、量标标准准，也也有有共共同同的的质质量量标标准准。这这些些共共同同的的质质量量标标准准主主要要是是纯纯、壮壮两条。两条。纯纯：除除银银耳耳菌菌种种，其其余余各各种种栽栽培培食食用用菌菌均均是是一一种种菌菌丝丝体体的的纯纯培培养养物物，不不得得混混入入杂杂菌菌或或纯纯培培养养物物以外的其它菌种。以外的其它菌种。例例如如：香香菇菇7925菌菌种种，只只能能是是7925菌菌株株菌菌丝丝体体的的纯培养。纯培养。35ppt课件复习思考题 1 1简述二、三级菌种的制作流程。简述二、三级菌种的制作流程。2 2根据实际操作说明如何测定培养基的含水量和根据实际操作说明如何测定培养基的含水量和pHpH值。值。3.

22、3.分装培养料时，为何要在料中打一个孔？分装培养料时，为何要在料中打一个孔？4.4.简述二、三级培养基的灭菌方法及要求。简述二、三级培养基的灭菌方法及要求。5.5.如何检验二、三级菌种培养基的灭菌效果？如何检验二、三级菌种培养基的灭菌效果？6.6.简述一级菌种转接二级菌种，二级菌种转接三级菌简述一级菌种转接二级菌种，二级菌种转接三级菌种的过程。种的过程。7.7.合格的培养室有什么要求？合格的培养室有什么要求？8 8试述二、三级菌种的培养方法？试述二、三级菌种的培养方法？9 9如何检查二、三级菌种质量？如何检查二、三级菌种质量？1010请你以一个菌种厂厂长或技术员的身份，谈谈如请你以一个菌种厂厂长或技术员的身份，谈谈如何搞好菌种生产。何搞好菌种生产。36ppt课件37ppt课件