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1、-沙门氏菌的检验沙门氏菌的检验1目的目的规沙门氏菌检测方法，使产品检验有据可依。2消毒灭菌要求消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌前方能使用。注：本实验采用湿热灭菌法，吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度和压力灭菌，一般是 1211.5MPa下灭菌 20min。3原理原理沙门氏菌的检验分四个连续阶段：4操作步骤操作步骤4.1 准备工作配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基无需灭菌、HE培养基、三糖铁培养基等，并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。4.2 前增菌在无菌环境下，称取 25g 待
2、检样品放入盛有 225ml 灭菌好的缓冲蛋白胨水中，然后放到 361的恒温培养箱进展前增菌 4-6h;4.3 增菌在无菌环境下，用灭菌好的吸管吸取 10ml 前增菌液接种与 100ml 亚硒酸盐胱氨酸培养基中进展二次增菌，恒温培养箱 361，培养 18-24h;4.4 别离培养.z.-将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径 3mm 的接种环挑取一环，划线于外表无凝结水的 BS 和 SS 琼脂平板各一个，于 361培养 18-24h。观察各个平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落，应再继续培养242h。然后观察培养的平板黄色的菌落是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫化氢，菌落中心黑色或
3、几乎全黑色为可疑沙门氏菌。沙门氏菌属各亚属在其他选择性琼脂平板的菌落特征4.5 生化实验用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁培养基上，恒温培养箱 361，培养 18-24h;典型沙门氏菌培养物斜面显红色碱性，底端显黄色酸性，有气体产生，形成硫化氢琼脂变黑。三糖铁培养基变化表肠杆菌科各属在三糖铁琼脂的反响结果同时将三糖铁培养基上可疑的菌株，做生化实验，将可疑的沙门氏菌落分别接种于尿素、赖氨酸脱羧等发酵管中恒温培养箱 361，培养 18-24h根据上表进展判定,将可疑的沙门氏菌补做进一步的生化试验，如下表：三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养基筛选三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶培养
4、基筛选三糖铁琼脂反响斜面KKAAK底层AAAAK产气/硫化氢/赖氨酸脱羧酶培养基/可能的菌属可疑沙门氏菌属可疑沙门氏菌属可疑亚利桑那菌非沙门氏菌属非沙门氏菌属备注：K-产碱；A-产酸；-阳性反响，阴性反响，少见反响，/阳性或阴性反响三糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选三糖铁琼脂和尿素酶琼脂筛选.z.-三糖铁琼脂反响斜面KAKAK底层AAAAK产气/硫化氢/尿素酶琼脂/可能的菌属可疑沙门氏菌属可疑亚利桑那菌非沙门氏菌属非沙门氏菌属非沙门氏菌属备注：K-产碱；A-产酸；-阳性反响，阴性反响，少见反响，/阳性或阴性反响沙门氏菌属反响序号1234567尿素酶试验V-P 试验氰化钾试验赖氨酸脱羧酶试验吲哚试验丙二
5、酸钠试验卫矛醇试验生化工程反应沙门氏菌d亚利桑那菌备注：-阳性反响，阴性反响，d反响不定A、靛基质反响接种后在恒温培养箱 361，培养 18-24h，形成红色说明是阳性反响；B、尿素反响接种后在恒温培养箱 361，培养 2-24h，发现颜色变红说明是阳性反响；沙门氏菌生化实验鉴定结果4.6 血清学实验在干净的培养皿上，用灭菌好的接种环沾取两环 AFO 多价血清，取适量的菌种制成菌悬液，将玻片轻轻摇动 30-60s,观察反响，如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状物，则认为菌体与 AFO 多价血清凝结，反之不凝结；不凝结是认为检验样品中不含沙门氏菌，如果凝结，在干净的波片上加一滴生理盐水，将待
6、试培养物混合于生理盐水滴，使成为均一性的混浊悬菌液。将玻片轻轻摇动 3060s。观察反响，如菌体彼此相凝集成明显或比较明显小颗粒状.z.-物，即认为有自凝性，反之无自凝性。有自凝性的菌株可排除；无自凝性的菌株，做以下实验：1、O 抗原检查：用认为无自凝力的纯菌落，用 1 滴 O 型血清例如 O4、O5、O16、O12 等代替生理盐水，对该菌株进展排查，如发生凝集，判为阳性，对照国标的附表判定是什么菌种。2、H 抗原检查：如果 O 抗原不能确定是何种菌株，按照表用上述同样的方法测试 H 抗原，如发生凝集，判为阳性，对照国标的附表判定是什么菌种。3、Vi 抗原检查：假设以上还不能检定菌种，则取大量菌种和生理盐水制成浓的菌悬液在酒精灯上煮沸，然后按照上述方法做 Vi 抗原实验，如发生凝集，判为阳性，对照国标的附表判定是什么菌种。生化试验鉴定结果5.结果报告5.1 报告阳性结果：发现沙门氏菌或发现亚桑娜菌或发现沙门氏菌和亚利桑那菌。5.2 报告阴性结果：未发现沙门氏菌或未发现亚桑娜菌或未发现沙门氏菌和亚利桑那菌。.z.