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1、微生物标本的采集规范及结果微生物标本的采集规范及结果解读解读XXXX大学第一附属医院检验科大学第一附属医院检验科大学第一附属医院检验科大学第一附属医院检验科XXXXXX内内 容容标本采集 1 血培养 2 导管相关性血流感染 3 脑脊液等无菌穿刺液 4 尿标本 5 痰标本微生物结果解读“正确的微生物学检验正确的微生物学检验,始自始自正确的标本采集”Manual of Clinical Microbiology 主编:Patrick R Murray 46-68.2%4-15%18.5-47%46-68.2%4-15%18.5-47%错误率 Clin Chem.2007 Jul;53(7):133
2、8-42.Epub 2007 May 24.Clin Chem Lab Med.2006;44(6):750-9分析前分析前分析中分析中分析后分析后标本采集标本采集+运送运送+前处理前处理检验全过程检验全过程必须医护人员和检验人员共同配合必须医护人员和检验人员共同配合-分析前分析前实验前环节主要包括：实验前环节主要包括：实验前环节主要包括：实验前环节主要包括：1 1 1 1）病人准备）病人准备）病人准备）病人准备2 2 2 2）标本采集标本采集标本采集标本采集3 3 3 3）标本运送）标本运送）标本运送）标本运送及时及时及时及时采集标本。采集标本。采集标本。采集标本。抗菌药物抗菌药物抗菌药物抗
3、菌药物使用前使用前使用前使用前采集标本。采集标本。采集标本。采集标本。无菌无菌无菌无菌操作操作操作操作及时送检。及时送检。及时送检。及时送检。标本采集的基本原则标本采集的基本原则血培养采集规范血培养采集规范临床常见采血指征临床常见采血指征发热（发热（发热（发热（38383838 C C C C）或低温（）或低温（）或低温（）或低温（36363636 C C C C）寒战寒战寒战寒战 白白白白细细细细胞胞胞胞增增增增多多多多（计计计计数数数数大大大大于于于于10101010，000000000000 101010109 9 9 9/L/L/L/L，特特特特别别别别有有有有“核核核核左移左移左移左
4、移”未成熟的或杆状核的白细胞）未成熟的或杆状核的白细胞）未成熟的或杆状核的白细胞）未成熟的或杆状核的白细胞）粒细胞减少（成熟的多核白细胞粒细胞减少（成熟的多核白细胞粒细胞减少（成熟的多核白细胞粒细胞减少（成熟的多核白细胞1000100010001:5 1:5 1:5 1:5 抑制细菌生长抑制细菌生长抑制细菌生长抑制细菌生长 血液凝固血液凝固血液凝固血液凝固 血液：肉汤血液：肉汤血液：肉汤血液：肉汤1:101:101:10104 cfu/ml 革兰阴性杆菌105 cfu/ml穿刺尿：任意菌报告方式报告方式 “经48小时培养无细菌生长”。痰标本采集规范痰标本采集规范标本留取质量的好坏直接影响到标本
5、留取质量的好坏直接影响到对下呼吸道病原学的诊断对下呼吸道病原学的诊断,导致导致抗菌治疗失败抗菌治疗失败,以及造成耐药菌以及造成耐药菌的出现。的出现。重重 要要！标本采集标本采集1.1.应在用药前留取标本。应在用药前留取标本。2.2.无菌容器留取标本。无菌容器留取标本。采集方法采集方法自然咳痰法自然咳痰法 最常用最常用 注意清洁口腔注意清洁口腔小儿取痰法小儿取痰法小儿取痰法小儿取痰法 支气管镜、支气管穿刺、支气管肺胞灌洗等采集法支气管镜、支气管穿刺、支气管肺胞灌洗等采集法支气管镜、支气管穿刺、支气管肺胞灌洗等采集法支气管镜、支气管穿刺、支气管肺胞灌洗等采集法胃液抽取法胃液抽取法胃液抽取法胃液抽取
6、法:适用于婴幼儿患者。适用于婴幼儿患者。适用于婴幼儿患者。适用于婴幼儿患者。痰标本的运送痰标本的运送采样后采样后1 1小时内小时内必须送到实验室。必须送到实验室。痰标本不能及时送检者，可暂存痰标本不能及时送检者，可暂存44冰冰箱箱2 2小时。小时。如室温下放置数小时，口咽部的非致如室温下放置数小时，口咽部的非致病菌呈过度生长，而肺炎球菌、葡萄球病菌呈过度生长，而肺炎球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。痰培养结果的评价痰培养结果的评价质量质量 （上皮细胞上皮细胞 白细胞）白细胞）数量数量（+及以上）及以上）细菌种类细菌种类痰标本是否合格？痰标本是否合格
7、？分分分分 类类类类细胞数细胞数细胞数细胞数/低倍视野低倍视野低倍视野低倍视野白细胞白细胞白细胞白细胞扁平上皮细胞扁平上皮细胞扁平上皮细胞扁平上皮细胞5 5252510252510-2510-253 3252525252 210-2510-2525251 1102525上皮细胞25/LP,白细胞25/LP,上皮细胞5/LP痰标本常见病原菌痰标本常见病原菌主要病原菌主要病原菌 肺炎链球菌肺炎链球菌 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 克雷伯菌属克雷伯菌属.非病原菌非病原菌 酵母菌酵母菌 草绿色链球菌草绿色链球菌 肠球菌肠球菌 凝固酶阴性葡萄球菌等凝固
8、酶阴性葡萄球菌等其他标本采集其他标本采集 粪便粪便粪便粪便 生殖道标本生殖道标本生殖道标本生殖道标本 耳鼻眼标本耳鼻眼标本耳鼻眼标本耳鼻眼标本 脓液及伤口标本：脓液及伤口标本：脓液及伤口标本：脓液及伤口标本：尽可能抽取脓液送检，而不是用尽可能抽取脓液送检，而不是用沾浸脓液的拭子送检。沾浸脓液的拭子送检。鼻咽拭子鼻咽拭子鼻咽拭子鼻咽拭子标本送检常见问题汇总厌氧培养：痰、鼻咽部、皮肤表面痰标本不合格率过高，按要求拒收尿标本部分不合格血培养送检率低标本类型选择有误，具体！药药 敏敏 试试 验验什么是抗菌药物的敏感性试验？什么是抗菌药物的敏感性试验？什么是抗菌药物的敏感性试验？什么是抗菌药物的敏感性试
9、验？测定抗菌药物在测定抗菌药物在测定抗菌药物在测定抗菌药物在体外体外体外体外抑制病原微生物生长的效力抑制病原微生物生长的效力抑制病原微生物生长的效力抑制病原微生物生长的效力 敏感敏感敏感敏感/S/S/S/S：常规剂量，达到较好疗效常规剂量，达到较好疗效常规剂量，达到较好疗效常规剂量，达到较好疗效 中介中介中介中介/I/I/I/I：较大剂量，达到较好疗效：较大剂量，达到较好疗效：较大剂量，达到较好疗效：较大剂量，达到较好疗效 耐药耐药耐药耐药/R/R/R/R：较大剂量，一般达不到治疗效果较大剂量，一般达不到治疗效果较大剂量，一般达不到治疗效果较大剂量，一般达不到治疗效果如何进行药物敏感性试验？如
10、何进行药物敏感性试验？扩散法扩散法扩散法扩散法（纸片法）（纸片法）（纸片法）（纸片法）Kirby-baure(K-B)Kirby-baure(K-B)Kirby-baure(K-B)Kirby-baure(K-B)法法法法 稀释法稀释法稀释法稀释法(MIC)(MIC)(MIC)(MIC)肉汤稀释法肉汤稀释法肉汤稀释法肉汤稀释法 琼脂稀释法琼脂稀释法琼脂稀释法琼脂稀释法 E-Test E-Test E-Test E-Test纸片扩散法大小和敏感度正相关！大小和敏感度正相关！大小和敏感度正相关！大小和敏感度正相关！稀释法稀释法 最低抑菌浓度（最低抑菌浓度（最低抑菌浓度（最低抑菌浓度（MICMICM
11、ICMIC）：大小和敏感度负相关！）：大小和敏感度负相关！）：大小和敏感度负相关！）：大小和敏感度负相关！E-E-试验（试验（E-TestE-Test）E-testE-testE-testE-test综合了稀释法和扩散法的原理和特点，直接定量测出药物对测试菌综合了稀释法和扩散法的原理和特点，直接定量测出药物对测试菌综合了稀释法和扩散法的原理和特点，直接定量测出药物对测试菌综合了稀释法和扩散法的原理和特点，直接定量测出药物对测试菌的最低抑菌浓度的最低抑菌浓度的最低抑菌浓度的最低抑菌浓度（MICMIC）大小和敏感度负相关！大小和敏感度负相关！大小和敏感度负相关！大小和敏感度负相关！药物选择（执行标
12、准）药物选择（执行标准）美国临床实验室标准化委员会美国临床实验室标准化委员会（CLSICLSI/NCCLS/NCCLS）一菌一药一规则一菌一药一规则肠杆菌科肠杆菌科A A组（常规实验组（常规实验/常常规报告的药物）规报告的药物）B B组（首选实验组（首选实验/有有选择报告的药物）选择报告的药物）C C组（补充实验组（补充实验/有有选择报告的药物）选择报告的药物）U U组（仅用于泌尿道组（仅用于泌尿道的补充实验的药物）的补充实验的药物）氨苄西林氨苄西林阿米卡星阿米卡星氨曲南氨曲南头孢噻吩头孢噻吩头孢唑啉头孢唑啉阿莫西林阿莫西林/克拉维酸克拉维酸氨苄西林氨苄西林/舒巴坦舒巴坦哌拉西林哌拉西林/他唑
13、巴坦他唑巴坦替卡西林替卡西林/克拉维酸克拉维酸头孢他啶头孢他啶洛美沙星洛美沙星 或或氧氟沙星氧氟沙星诺氟沙星诺氟沙星庆大霉素庆大霉素妥布霉素妥布霉素头孢呋辛头孢呋辛氯霉素氯霉素头孢吡肟头孢吡肟四环素四环素头孢替坦头孢替坦头孢西丁头孢西丁呋喃妥因呋喃妥因头孢噻肟头孢噻肟 或或头孢曲松头孢曲松磺胺甲恶唑磺胺甲恶唑环丙沙星环丙沙星左氧氟沙星左氧氟沙星甲氧苄啶甲氧苄啶厄他培南厄他培南亚胺培南亚胺培南美罗培南美罗培南哌拉西林哌拉西林甲氧苄啶甲氧苄啶/磺胺甲恶唑磺胺甲恶唑铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌A A组（常规实验组（常规实验/常常规报告的药物）规报告的药物）B B组（首选实验组（首选实验/有有选择报告的药
14、物）选择报告的药物）C C组（补充实验组（补充实验/有有选择报告的药物）选择报告的药物）U U组（仅用于泌尿道组（仅用于泌尿道的补充实验的药物）的补充实验的药物）头孢他啶头孢他啶阿米卡星阿米卡星洛美沙星洛美沙星 或或氧氟沙星氧氟沙星诺氟沙星诺氟沙星庆大霉素庆大霉素妥布霉素妥布霉素氨曲南氨曲南头孢吡肟头孢吡肟哌拉西林哌拉西林环丙沙星环丙沙星左氧氟沙星左氧氟沙星亚胺培南亚胺培南美罗培南美罗培南哌拉西林哌拉西林/他唑巴坦他唑巴坦替卡西林替卡西林葡萄球菌属葡萄球菌属A组（常规实验/常规报告的药物）B组（首选实验/有选择报告的药物）C组（补充实验/有选择报告的药物）U组（仅用于泌尿道的补充实验的药物）阿
15、奇霉素 或 克拉霉素 或 红霉素达托霉素氯霉素洛美沙星诺氟沙星克林霉素利奈唑胺环丙沙星 或 左氧沙星 或 氧氟沙星莫西沙星苯唑西林（头孢西丁）泰利霉素青霉素多西环素四环素庆大霉素呋喃妥因甲氧苄啶/磺胺甲恶唑万古霉素奎奴普汀/达福普汀磺胺甲恶唑利福平甲氧苄啶肠球菌属肠球菌属A A组（常规实验组（常规实验/常常规报告的药物）规报告的药物）B B组（首选实验组（首选实验/有有选择报告的药物）选择报告的药物）C C组（补充实验组（补充实验/有有选择报告的药物）选择报告的药物）U U组（仅用于泌尿道组（仅用于泌尿道的补充实验的药物）的补充实验的药物）氨苄西林氨苄西林青霉素青霉素达托霉素达托霉素庆大霉素（
16、仅用于筛选庆大霉素（仅用于筛选高水平耐药株）高水平耐药株）环丙沙星环丙沙星左氧氟沙星左氧氟沙星诺氟沙星诺氟沙星利奈唑胺利奈唑胺链霉素（仅用于筛选高链霉素（仅用于筛选高水平耐药株）水平耐药株）奎奴普汀奎奴普汀/达福普汀达福普汀呋喃妥因呋喃妥因万古霉素万古霉素四环素四环素洋葱伯克霍尔德菌洋葱伯克霍尔德菌 嗜麦芽窄食单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌A A组（常规实验组（常规实验/常规报告的常规报告的药物）药物）B B组（首选实验组（首选实验/有选择报告的有选择报告的药物）药物）甲氧苄啶甲氧苄啶/磺胺甲恶磺胺甲恶唑唑头孢他啶头孢他啶氯霉素氯霉素左氧氟沙星左氧氟沙星美罗培南美罗培南米诺环素米诺环素替卡西林替卡西林
17、/克拉维克拉维酸酸A A组（常规实验组（常规实验/常规报告的药常规报告的药物）物）B B组（首选实验组（首选实验/有选择报告的有选择报告的药物）药物）甲氧苄啶甲氧苄啶/磺胺甲恶磺胺甲恶唑唑头孢他啶头孢他啶氯霉素氯霉素左氧氟沙星左氧氟沙星米诺环素米诺环素替卡西林替卡西林/克拉维克拉维酸酸CLSI CLSI 注解注解a.a.“警告警告”：对分离于对分离于CSF CSF 中的细菌，下列抗微生物药物不予中的细菌，下列抗微生物药物不予选择用于常规报告。这些抗微生物药物对于治疗细菌性选择用于常规报告。这些抗微生物药物对于治疗细菌性CSFCSF感感染染可能无效，不予采用：可能无效，不予采用：口服抗生素只针对
18、一、二代头孢菌素（头孢呋辛肠外用药除口服抗生素只针对一、二代头孢菌素（头孢呋辛肠外用药除外）以及头霉素、克林霉素、大环内酯类、四环素类、氟喹外）以及头霉素、克林霉素、大环内酯类、四环素类、氟喹诺酮类诺酮类b.b.当从粪便中分离到沙门菌和志贺菌，应作药敏试验。只有氨当从粪便中分离到沙门菌和志贺菌，应作药敏试验。只有氨苄西林、喹诺酮和甲氧苄啶苄西林、喹诺酮和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑可用于常规试验报告。磺胺甲噁唑可用于常规试验报告。此外，对于肠道外沙门菌分离菌株，应测试并报告氯霉素和此外，对于肠道外沙门菌分离菌株，应测试并报告氯霉素和一种一种3 3代头孢菌素。代头孢菌素。C.C.测试红霉素可以预报阿奇霉
19、素、克拉霉素和地红霉素的敏感测试红霉素可以预报阿奇霉素、克拉霉素和地红霉素的敏感性及耐药性。性及耐药性。d.d.对四环素敏感的菌株也对多西环素和米诺环素敏感。对四环素敏感的菌株也对多西环素和米诺环素敏感。院感需要监测的几种耐药模式院感需要监测的几种耐药模式 MRSAMRSA VRSAVRSA VREVRE ESBLsESBLs PDR/PA PDR/PA C CRABRAB CRECRE MRSA MRSA MRSA MRSA 耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌（耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌（MRSAMRSA）:对现在可用的所有对现在可用的所有 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素是
20、耐药的。（青霉素类、头孢类、是耐药的。（青霉素类、头孢类、复合制剂、氨曲南、碳青霉烯类）复合制剂、氨曲南、碳青霉烯类）VRSA VRSA VRSA VRSA ESBLs(ESBLs(ESBLs(ESBLs(超广谱超广谱超广谱超广谱B B内酰胺酶）内酰胺酶）内酰胺酶）内酰胺酶）20102010年以前年以前CLSICLSI标准标准:ESBLsESBLsESBLsESBLs（+）报告所有的一、二、三代头孢菌报告所有的一、二、三代头孢菌报告所有的一、二、三代头孢菌报告所有的一、二、三代头孢菌 素及安曲南耐药，不管其体外敏感与否。素及安曲南耐药，不管其体外敏感与否。素及安曲南耐药，不管其体外敏感与否。素
21、及安曲南耐药，不管其体外敏感与否。2010 2010 2010 2010年以后年以后年以后年以后CLSICLSICLSICLSI标准标准标准标准:不需要修正结果不需要修正结果不需要修正结果不需要修正结果 Rx Rx Rx Rx：首选碳青酶烯类、也可选用含酶抑制剂的首选碳青酶烯类、也可选用含酶抑制剂的首选碳青酶烯类、也可选用含酶抑制剂的首选碳青酶烯类、也可选用含酶抑制剂的抗生素复合制剂，如特治星、舒普深等。抗生素复合制剂，如特治星、舒普深等。抗生素复合制剂，如特治星、舒普深等。抗生素复合制剂，如特治星、舒普深等。碳青酶烯酶产碳青霉烯酶菌株主要发生在产碳青霉烯酶菌株主要发生在产碳青霉烯酶菌株主要发
22、生在产碳青霉烯酶菌株主要发生在鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌(CRAB)(CRAB)、铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌(CRPA)(CRPA)、部分肠杆菌科细菌、部分肠杆菌科细菌、部分肠杆菌科细菌、部分肠杆菌科细菌（CRE)CRE)可水解各种广谱可水解各种广谱可水解各种广谱可水解各种广谱-内酰胺类抗生素包括第三代、内酰胺类抗生素包括第三代、内酰胺类抗生素包括第三代、内酰胺类抗生素包括第三代、第四代头孢菌素和酶抑制剂复方制剂、头霉素类、第四代头孢菌素和酶抑制剂复方制剂、头霉素类、第四代头孢菌素和酶抑制剂复方制剂、头霉素类、第四代头孢菌素和酶抑制剂复方制剂、头霉素类、碳青霉烯类等；多数为碳青霉烯类等；多数为碳青霉烯类等；多数为碳青霉烯类等；多数为泛耐药株泛耐药株泛耐药株泛耐药株，并可同时对氟喹，并可同时对氟喹，并可同时对氟喹，并可同时对氟喹酮类和氨基糖苷类耐药酮类和氨基糖苷类耐药酮类和氨基糖苷类耐药酮类和氨基糖苷类耐药需要上报临床的多重耐药菌 MRSAMRSA C CRABRAB CRECRE检验科8-13日开始报临床（制度要求）小 结合格的标本是保证微生物结果可靠合格的标本是保证微生物结果可靠 的基本条件的基本条件对对微生物结果的评价应紧密结合临床微生物结果的评价应紧密结合临床