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1、医学微生物学医学微生物学实验课件实验课件南华大学病原学实验教学中心南华大学病原学实验教学中心Etiology Experimental Teaching Center of University of South China 一、微生物的分布及理化因素对微生物的影响一、微生物的分布及理化因素对微生物的影响 1 1、空气中微生物的检查（示教）、空气中微生物的检查（示教）2 2、手指皮肤消毒前后微生物的检查（示教）、手指皮肤消毒前后微生物的检查（示教）3 3、紫外线杀菌试验（自做，、紫外线杀菌试验（自做，2 2人人/组）组）4 4、抗生素敏感试验（示教）、抗生素敏感试验（示教）二、细菌的分解代谢产
2、物和细菌的生化反应（示教）二、细菌的分解代谢产物和细菌的生化反应（示教）实验内容：实验内容：实验名称：细菌的新陈代谢和消毒灭菌实验名称：细菌的新陈代谢和消毒灭菌一、微生物的分布一、微生物的分布微生物分布非常广泛。微生物分布非常广泛。通过对通过对外界外界微生物的检查微生物的检查，了解微生物在自然界了解微生物在自然界中的分布，从而树立中的分布，从而树立“有菌观点有菌观点”，认识，认识“无菌无菌操作操作”对于微生物学及医学实践的重要性。对于微生物学及医学实践的重要性。实验操作步骤：实验操作步骤：1 1取取琼琼脂脂平平板板2 2个个，一一个个启启开开皿皿盖盖，培培养养基基面面向向上上，放放在在实实验验
3、桌上，桌上，30min30min后盖好皿盖。另后盖好皿盖。另1 1个平板，不启开盖作为对照。个平板，不启开盖作为对照。2 22 2个平板均置个平板均置3737培养培养181824h24h，观察结果。，观察结果。空气中空气中微生物微生物的的检查检查1 1、消毒（、消毒（disinfectiondisinfection）：）：杀灭物体上或环境中的病原微生杀灭物体上或环境中的病原微生物、并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。物、并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。消毒剂（消毒剂（disinfectantdisinfectant）：用以消毒的药品）：用以消毒的药品2 2、灭菌（、灭菌（ste
4、rilizationsterilization）：杀灭物体上所有微生物的方杀灭物体上所有微生物的方法，包括杀灭细菌芽胞、病毒和霉菌在内的全部病原微法，包括杀灭细菌芽胞、病毒和霉菌在内的全部病原微生物和非病原微生物。生物和非病原微生物。（一）消毒灭菌的常用术语（一）消毒灭菌的常用术语:二、理化因素对微生物的影响二、理化因素对微生物的影响3 3、防腐（、防腐（antisepsisantisepsis）防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的方法。防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的方法。防腐剂（防腐剂（antisepticantiseptic）：用以防腐的药物。）：用以防腐的药物。4 4、无菌（、无菌（ase
5、psisasepsis）：）：不存在活菌的意思，多是灭菌的结果。不存在活菌的意思，多是灭菌的结果。5 5、无菌操作、无菌操作(aseptic technique)(aseptic technique)：防止细菌及其他微生物进入人体或其他物品的操作技术。防止细菌及其他微生物进入人体或其他物品的操作技术。（二）（二）消毒灭菌的方法消毒灭菌的方法物理方法物理方法化学方法化学方法辐射杀菌法辐射杀菌法滤过除菌法滤过除菌法干燥和低温抑菌法等干燥和低温抑菌法等热力灭菌法热力灭菌法干热灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法湿热灭菌法紫外线紫外线电离辐射电离辐射微波微波常用的化学消毒剂常用的化学消毒剂：乙醇、含碘消毒剂、过
6、氧乙酸、过氧化氢、高乙醇、含碘消毒剂、过氧乙酸、过氧化氢、高锰酸钾、新洁尔灭等锰酸钾、新洁尔灭等。1、高压蒸汽灭菌法、高压蒸汽灭菌法 103.4kPa（1.05kg/cm2)（121.3，维维持持1520min）灭菌效果最好，灭菌效果最好，可杀灭包括细菌芽胞可杀灭包括细菌芽胞在内的所用微生物。在内的所用微生物。常常用于一般培养基、生理盐水、手术敷用于一般培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温、耐湿物品的灭菌。料等耐高温、耐湿物品的灭菌。高压蒸汽灭菌器2、手指皮肤消毒前后微生物的检查、手指皮肤消毒前后微生物的检查 络合碘对细菌的作用（示教）络合碘对细菌的作用（示教）（1 1）取琼脂平板）取琼脂平板1
7、 1个，将底面分成两等份，注明个，将底面分成两等份，注明A/BA/B。（2 2）用无菌棉签蘸生理盐水，在左手食指头上涂擦。用该指）用无菌棉签蘸生理盐水，在左手食指头上涂擦。用该指头在平板头在平板A A处琼脂表面涂抹，作为消毒前的对照。处琼脂表面涂抹，作为消毒前的对照。（3 3）用棉签蘸络合碘消毒左手食指。待络合碘干后，依上法）用棉签蘸络合碘消毒左手食指。待络合碘干后，依上法在平板在平板B B处琼脂表面涂抹。处琼脂表面涂抹。（4 4）置平板于）置平板于3737培养培养181824h24h。平板平板A A处琼脂表面有细菌生长，处琼脂表面有细菌生长，B B处不长细菌或出现处不长细菌或出现极少的菌落。
8、说明一定浓度的络合碘能杀灭细菌。极少的菌落。说明一定浓度的络合碘能杀灭细菌。【结果结果】3、抗生素敏感试验（示教）、抗生素敏感试验（示教）一种抗生素只对一定种类的生物细胞有拮抗作用，这种作用范一种抗生素只对一定种类的生物细胞有拮抗作用，这种作用范围称围称抗菌谱抗菌谱。抗生素的抗菌机制抗生素的抗菌机制 影响细胞壁的合成；影响细胞壁的合成；损伤或破坏细胞膜的结构；损伤或破坏细胞膜的结构；干扰细胞碳水化合物的代谢；干扰细胞碳水化合物的代谢；抑制核酸或蛋白质的合成，这些作用都有一定的选择性。抑制核酸或蛋白质的合成，这些作用都有一定的选择性。观观察察纸纸片片周周围围有有无无抑抑菌菌圈圈，并并量量出出抑抑
9、菌菌圈圈直直径径大大小小，得得出待测菌对所试抗生素的敏感性。出待测菌对所试抗生素的敏感性。纸片琼脂扩散法试验程序纸片琼脂扩散法试验程序（a）挑取菌落）挑取菌落 （b）转种肉汤）转种肉汤 （c）比浊）比浊 （d）涂布平板上）涂布平板上 （e）放置药敏纸片）放置药敏纸片 （f）量取抑菌圈大小）量取抑菌圈大小4 4、紫外线杀菌实验、紫外线杀菌实验紫外线紫外线DNA T-T二聚体二聚体波长波长240240300nm300nm，265265266nm266nm最强最强干扰干扰DNA复制与转录复制与转录变异或死亡变异或死亡（1 1）原理：）原理：（2 2）特）特 点点 穿透力较弱；穿透力较弱；仅能杀死细菌
10、的繁殖体，不能杀死细菌的芽胞。仅能杀死细菌的繁殖体，不能杀死细菌的芽胞。（3）临床应用）临床应用 仅用于实验室、仅用于实验室、传染传染病房、手术室的空气或病房、手术室的空气或不耐热物品的表面不耐热物品的表面消毒消毒。注意事项：注意事项：紫外线可损伤皮肤、眼睛，使用时应注意防护。紫外线可损伤皮肤、眼睛，使用时应注意防护。三、细菌的分解代谢产物和细菌的生化反应三、细菌的分解代谢产物和细菌的生化反应细菌的新陈代谢细菌的新陈代谢分解代谢分解代谢合成代谢合成代谢热原质热原质毒素与侵袭性酶毒素与侵袭性酶色素色素抗生素抗生素细菌素细菌素维生素维生素合成代谢合成代谢产物产物细菌的分解代谢产物和生化反应（示教）
11、细菌的分解代谢产物和生化反应（示教）细细菌菌对对糖糖、蛋蛋白白质质的的分分解解能能力力的的不不同同，因因而而代代谢谢产产物物各各异异，利利用用生生物物化化学学方方法法鉴鉴别别不不同同细细菌菌称称为为细菌的细菌的生化反应生化反应。糖发酵试验：糖发酵试验：乳糖乳糖乳酸乳酸乳糖酶乳糖酶葡萄糖发酵试验：葡萄糖发酵试验：细细 菌菌葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸各种酸类各种酸类甲甲 酸酸H2+CO2脱氢酶脱氢酶吲哚试验（Indole test):色氨酸色氨酸酶氨基苯甲醛玫瑰吲哚甲基红试验(Methy red test):葡萄糖细菌丙酮酸 脱羧乙酰甲基甲醇（中性）pH5.4 桔黄色:阴性pH4.5 红色:阳性VP
12、试验：葡萄糖细菌细菌丙酮酸脱羧脱羧乙酰甲基甲醇氧化氧化二乙酰含胍基化合物含胍基化合物红色的化合物(VP试验阳性)枸橼酸盐利用试验（Citrate utilizatio)：枸橼酸盐碳酸盐铵 盐氨溴麝香草酚蓝(淡绿)深蓝碱性IMViC试验大肠杆菌：+-产气杆菌：-+第第1页：页：实验内容实验内容一、微生物的分布及理化因素对微生物的影响一、微生物的分布及理化因素对微生物的影响 1 1、空气中微生物的检查（示教）、空气中微生物的检查（示教）2 2、手指皮肤消毒前后微生物的检查（示教）、手指皮肤消毒前后微生物的检查（示教）3 3、紫外线杀菌试验（自做，、紫外线杀菌试验（自做，2 2人人/组）组）4 4、抗生素敏感试验（示教）、抗生素敏感试验（示教）二、细菌的分解代谢产物和细菌的生化反应（示教）二、细菌的分解代谢产物和细菌的生化反应（示教）作作 业业实验名称：细菌的新陈代谢和消毒灭菌实验名称：细菌的新陈代谢和消毒灭菌第第2页：页：记录、分析紫外线杀菌试验的结果。记录、分析紫外线杀菌试验的结果。