《蛋白检验.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《蛋白检验.ppt（46页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、第八章第八章 体液蛋白质检验体液蛋白质检验目标：目标：1.血浆中某些蛋白的功能及在疾病时的变化血浆中某些蛋白的功能及在疾病时的变化2.蛋白质主要的检验方法蛋白质主要的检验方法3.蛋白质检验的临床意义蛋白质检验的临床意义第一节第一节 概述概述一、血浆蛋白组成、功能及分类一、血浆蛋白组成、功能及分类二、个别血浆蛋白二、个别血浆蛋白三、疾病时血浆蛋白的变化三、疾病时血浆蛋白的变化一、血浆蛋白组成、功能及分类一、血浆蛋白组成、功能及分类功能：功能：营养作用营养作用维持血浆胶体渗透压维持血浆胶体渗透压维持血浆维持血浆pH值值运输作用运输作用免疫与防御免疫与防御催化催化代谢调控代谢调控凝血、抗凝血及纤溶作
2、用凝血、抗凝血及纤溶作用分类：分类：1.盐析：白蛋白、球蛋白盐析：白蛋白、球蛋白2.醋酸纤维薄膜：白蛋白、醋酸纤维薄膜：白蛋白、a a1-球蛋白、球蛋白、a a2-球蛋白、球蛋白、b b-球蛋白、球蛋白、g g-球蛋白和纤维球蛋白和纤维蛋白原蛋白原SDS-PAGE电泳电泳二维二维电泳电泳功能分类：功能分类：1.载体蛋白：载体蛋白：前白蛋白，白蛋白，载脂蛋白，铜蓝蛋白，运铁蛋白，给合球蛋白，前白蛋白，白蛋白，载脂蛋白，铜蓝蛋白，运铁蛋白，给合球蛋白，血红素结合蛋白，甲状腺素结合蛋白血红素结合蛋白，甲状腺素结合蛋白2.免疫防御系统蛋白：免疫防御系统蛋白：IgG,IgM,IgD,IgE,IgA,补体
3、系统补体系统3.凝血和纤溶蛋白：凝血和纤溶蛋白：凝血因子凝血因子7、8，凝血酶原，纤维蛋白原，纤溶酶原等，凝血酶原，纤维蛋白原，纤溶酶原等4.酶：酶：脂蛋白脂肪酶，卵磷脂脂蛋白脂肪酶，卵磷脂-胆固醇酰基转移酶胆固醇酰基转移酶5.蛋白酶抑制剂：蛋白酶抑制剂：a1-抗胰蛋白酶，抗胰蛋白酶，a1-抗糜蛋白酶，抗糜蛋白酶，a2-巨球蛋白巨球蛋白6.激素：激素：胰岛素，促红细胞生成素胰岛素，促红细胞生成素6.参与炎症应答的蛋白：参与炎症应答的蛋白：a1-酸性糖蛋白，酸性糖蛋白，C-反应蛋白反应蛋白蛋白质测定方法：蛋白质测定方法：免疫化学法：利用特异性抗体免疫化学法：利用特异性抗体 浊度测定、免疫扩散、免
4、疫电泳、放射免疫、酶联免疫浊度测定、免疫扩散、免疫电泳、放射免疫、酶联免疫电泳分离，观察图谱及半定量电泳分离，观察图谱及半定量化学方法：产生有色物质化学方法：产生有色物质二、个别血浆蛋白质二、个别血浆蛋白质（来源、代谢、检验、临床意义）（来源、代谢、检验、临床意义）（一）前白蛋白：（一）前白蛋白：半衰期短，因而营养不良及肝炎时降低早半衰期短，因而营养不良及肝炎时降低早功能：组织修复材料；运载甲状腺素、视黄醇功能：组织修复材料；运载甲状腺素、视黄醇临床意义：临床意义：营养不良、恶性肿瘤、肝硬化、肾炎时降低营养不良、恶性肿瘤、肝硬化、肾炎时降低（二）白蛋白：（二）白蛋白：营养营养胶体渗透压胶体渗透
5、压运输运输（三）（三）a a1-抗胰蛋白酶：抗胰蛋白酶：电泳：位于电泳：位于a a1-球蛋白区带球蛋白区带功能功能:抑制多种蛋白酶。主要表现为抑抑制多种蛋白酶。主要表现为抑制多形核白细胞吞噬作用后释放的弹制多形核白细胞吞噬作用后释放的弹性蛋白酶性蛋白酶临床意义：缺陷临床意义：缺陷-细菌多形核白细细菌多形核白细胞释放的弹性蛋白酶胞释放的弹性蛋白酶-过度作用过度作用于弹性蛋白于弹性蛋白-肺气肿肺气肿（四）（四）a a-酸性糖蛋白酸性糖蛋白急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白炎症时增高炎症时增高（五）甲胎蛋白（五）甲胎蛋白（AFP）：）：胎儿时期产生的蛋白胎儿时期产生的蛋白肝癌：肝癌：80%增高增高胰腺
6、癌、肺癌、肝硬化：增高胰腺癌、肺癌、肝硬化：增高肝癌中肝癌中15-20%AFP正常正常胎儿产前诊断：高于正常时，易产生胎儿产前诊断：高于正常时，易产生畸形畸形生殖细胞癌：生殖细胞癌：AFP增高增高（六）结合珠蛋白（六）结合珠蛋白与血红蛋白进行不可逆结合的糖蛋白与血红蛋白进行不可逆结合的糖蛋白红细胞溶解红细胞溶解-自由血红蛋白自由血红蛋白-与结合珠蛋白结合与结合珠蛋白结合-进入肝细进入肝细胞胞-降解（氨基酸、降解（氨基酸、Fe再利用）再利用）若红细胞破坏，引起血红蛋白释放增若红细胞破坏，引起血红蛋白释放增多，则结合珠蛋白减少多，则结合珠蛋白减少测定方法测定方法电泳法电泳法血浆中加过量血红蛋白血浆
7、中加过量血红蛋白-与结合珠与结合珠蛋白结合为复合物蛋白结合为复合物-分离复合物测分离复合物测血红蛋白量血红蛋白量-表示结合珠蛋白量表示结合珠蛋白量测复合物的活性测复合物的活性免疫化学法免疫化学法（七）（七）a a2-巨球蛋白巨球蛋白主要的蛋白酶抑制剂：包住蛋白酶，使不与蛋白结合主要的蛋白酶抑制剂：包住蛋白酶，使不与蛋白结合婴幼儿、儿童：高婴幼儿、儿童：高雌激素：高（增加合成）雌激素：高（增加合成）低蛋白血症：高低蛋白血症：高胰腺炎、前列腺癌：低胰腺炎、前列腺癌：低（八）（八）铜蓝蛋白铜蓝蛋白主要功能：氧化还原作用主要功能：氧化还原作用-多酚或多胺氧化多酚或多胺氧化 Fe2+-Fe3+急性时相反
8、应蛋白；急性时相反应蛋白；协助协助Wilson病的诊断：遗传病，铜代病的诊断：遗传病，铜代 谢障碍，铜蓝蛋白降低。谢障碍，铜蓝蛋白降低。（九）转铁蛋白（九）转铁蛋白结合铁、铜、锌等结合铁、铜、锌等急性时相（感染、组织坏死等）：降低急性时相（感染、组织坏死等）：降低血管内溶血：降低血管内溶血：降低铁缺乏时：升高铁缺乏时：升高（十）（十）b b2-微球蛋白微球蛋白炎症、肿瘤、白血病、肾衰等：升高炎症、肿瘤、白血病、肾衰等：升高（十一）（十一）C-反应蛋白反应蛋白急性时相蛋白。急性时相蛋白。心肌梗死、创伤、感染、手术、肿瘤浸润心肌梗死、创伤、感染、手术、肿瘤浸润结合细菌、真菌及原虫体内的多糖；结合细
9、菌、真菌及原虫体内的多糖；结合卵磷脂、核酸结合卵磷脂、核酸激活补体，引发调理作用，增强细胞吞激活补体，引发调理作用，增强细胞吞噬功能，抑制血小板凝集和血块收缩噬功能，抑制血小板凝集和血块收缩二、疾病时的血浆蛋白质二、疾病时的血浆蛋白质机理：机理：炎症损伤炎症损伤-某些细胞因子某些细胞因子-信号转导系统信号转导系统-转录因子转录因子-某些基因表达变化某些基因表达变化（一）炎症、创伤：（一）炎症、创伤：前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白：下降前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白：下降其它：其它：升高升高肝巨噬细胞肝巨噬细胞（枯否细胞（枯否细胞（Kupffer Cell)）参与免疫调节参与免疫调节（二）（二）肝脏疾病
10、：肝脏疾病：肝脏合成大多血浆蛋白；肝脏合成大多血浆蛋白；急性肝炎时，可出现非典型的急性时相反应。急性肝炎时，可出现非典型的急性时相反应。（三）肾脏疾病（三）肾脏疾病蛋白尿：血浆蛋白丢失蛋白尿：血浆蛋白丢失小分子量蛋白丢失：下降小分子量蛋白丢失：下降大分子量蛋白因代偿性合成增加：可增大分子量蛋白因代偿性合成增加：可增加加（四）风湿病（四）风湿病急性或慢性炎症急性或慢性炎症IgA,IgG,IgM升高。升高。炎症活动期炎症活动期a1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白酸性糖蛋白、结合珠蛋白等升高等升高（五）遗传缺陷（五）遗传缺陷第二节第二节 体液蛋白质测定体液蛋白质测定许多疾病引起血浆蛋白种类和数量的许多疾病引
11、起血浆蛋白种类和数量的变化变化一、血清总蛋白测定一、血清总蛋白测定两个假设：两个假设：1.都是单纯蛋白；都是单纯蛋白；2.所有蛋白与化学试剂发生相同反应。所有蛋白与化学试剂发生相同反应。1.凯氏定氮法凯氏定氮法蛋白蛋白+强酸消化强酸消化-铵盐铵盐+碱碱-氨氨-酸滴定，测定总氮量酸滴定，测定总氮量-6.252.双缩脲法双缩脲法+-HOH甘氨酰甘氨酸甘氨酰甘氨酸肽键-CO-NH-碱性下与碱性下与Cu2+络合成紫色化络合成紫色化合物合物与蛋白量成正比。与蛋白量成正比。简单、准确、重复性好简单、准确、重复性好3 酚试剂法（酚试剂法（Lowry法）法）酪氨酸残基和色氨酸残基与酚试剂的酪氨酸残基和色氨酸残
12、基与酚试剂的磷钨酸、磷钼酸磷钨酸、磷钼酸-蓝色化合物蓝色化合物加上加上Cu2+,结合双缩脲法，提高灵敏度结合双缩脲法，提高灵敏度适于测单一蛋白，且适用于蛋白含量较适于测单一蛋白，且适用于蛋白含量较少的样品少的样品4 比浊法比浊法酸性试剂酸性试剂+蛋白质蛋白质-沉淀沉淀5 染料结合法染料结合法酸性条件下，蛋白质酸性条件下，蛋白质-NH3+酪，酪，与染料中阴离子产生颜色反应。与染料中阴离子产生颜色反应。氨基黑、考马斯亮兰氨基黑、考马斯亮兰6 紫外分光光度法紫外分光光度法色氨酸、酪氨酸色氨酸、酪氨酸 在在280nm有吸收峰有吸收峰保持蛋白活性保持蛋白活性7 折光测定法折光测定法溶于溶液中的固体可增加
13、它的光折射溶于溶液中的固体可增加它的光折射率率固定波长、固定温度下，光折射率与蛋固定波长、固定温度下，光折射率与蛋白浓度成正比白浓度成正比蛋白浓度（蛋白浓度（g/L)=1.45A280-0.74A260血清总蛋白血清总蛋白-临床意义：临床意义：升高：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症升高：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等。等。降低：白蛋白合成减少，或蛋白丢失降低：白蛋白合成减少，或蛋白丢失二、血清白蛋白测定二、血清白蛋白测定1.染料结合法染料结合法白蛋白与染料结合，球蛋白很少与染料白蛋白与染料结合，球蛋白很少与染料结合结合溴甲酚绿，溴甲酚紫溴甲酚绿，溴甲酚紫白蛋白（白蛋白（pH4.2,+)+BCG-蓝蓝绿
14、色化绿色化合物合物-OD与白蛋白浓度成正比与白蛋白浓度成正比2.盐析法盐析法球蛋白先沉淀球蛋白先沉淀3.电泳法电泳法4免疫化学法免疫化学法抗原抗体反应；抗体过量抗原抗体反应；抗体过量临床意义临床意义合成减少合成减少吸收减少吸收减少丢失过多丢失过多七、脑脊液蛋白质测定七、脑脊液蛋白质测定脉络膜的毛细血管壁超滤形成，及少脉络膜的毛细血管壁超滤形成，及少量中枢神经系统合成量中枢神经系统合成浊度法浊度法染料结合法：考马斯亮兰，邻苯三酚红染料结合法：考马斯亮兰，邻苯三酚红钼络合显色法。钼络合显色法。临床意义：临床意义：神经系统疾病神经系统疾病血脑屏障通透性增加；血管性脑水肿，血脑屏障通透性增加；血管性脑水肿，细胞含量过多，神经细胞坏死等细胞含量过多，神经细胞坏死等三、血清球蛋白测定三、血清球蛋白测定球蛋白中色氨酸占球蛋白中色氨酸占2%，而白蛋中仅，而白蛋中仅0.2%乙酰色氨酸乙酰色氨酸+乙醛酸反应乙醛酸反应-紫色紫色四、血清纤维蛋白原测定四、血清纤维蛋白原测定1.凝块测定法：加凝血酶凝块测定法：加凝血酶血块血块-挑出挑出双缩脲双缩脲-比色比色2.比浊法：比浊法：13.3%硫酸铵硫酸铵3.盐析盐析4.免疫化学法：免疫化学法：临床意义：临床意义：升高：急性时相反应蛋白。升高：急性时相反应蛋白。降低：营养不良，严重肝损伤，降低：营养不良，严重肝损伤，血管内血管内凝血，先天缺乏凝血，先天缺乏