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1、蛋白质的基本单位蛋白质的基本单位本讲稿第一页，共四十三页胺基酸胺基酸 (Amino acid)u為蛋白質的基本單位。u有20種不同的胺基酸。u每個胺基酸之間以胜肽(peptidebond)連結。u胜肽鍵是由兩個胺基酸分別提供羧基和胺基，兩者之間經脫水反應(失去H2O)後所生成的。本讲稿第二页，共四十三页胺基酸的分類胺基酸的分類1.非極性或疏水性的R基群(Non-polarorhydrophobicRgroups)2.不帶電荷或親水性的R基群(UnchargedorhydrophilicRgroups)3.帶負電荷的R基群(NegativelychargedRgroups)4.帶正電荷的R基群(
2、PositivelychargedRgroups)本讲稿第三页，共四十三页胺基酸的種類胺基酸的種類中文名(英文名)結構縮寫功用丙胺酸丙胺酸(Alanine)Ala(A)是肌肉組織及腦部中樞神經的能源之一，可幫助產生抗體，協助糖類及有機酸的代謝。纈胺酸纈胺酸(Valine)Val(V)促進腦力，改善肌肉協調功能及安定情緒。白胺酸白胺酸(Leucine)Leu(L)是身體許多重要生化成份的原料，包括與能量代謝有關的物質，以及腦中與警覺性有關的神經傳導物。異白胺酸異白胺酸(Isoleucine)Ile(I)脯胺酸脯胺酸(Proline)Pro(P)對於維持關節及肌腱的正常功能有舉足輕重的地位，它還可
3、以強化心肌的功能。Hydroxyproline,(-OH)4-Hydroxyproline非非極極性性或或疏疏水水性性的的R R基基群群本讲稿第四页，共四十三页胺基酸的種類胺基酸的種類中文名(英文名)結構縮寫功用甲硫胺酸甲硫胺酸(Methionine)Met(M)能防止頭髮、皮膚及指甲之病變，可以降低膽固醇濃度、降低肝脂肪、防止中毒、協助腎臟排泄阿摩尼亞(Ammonia)。苯丙胺酸苯丙胺酸(Phenylalanine)Phe(F)是腦部及神經細胞製造神輕傳導物新腎上腺素的原料，新腎上腺素可以使我們精神上保持警覺，改善記憶及對抗憂鬱。色胺酸色胺酸(Tryptophan)Trp(W)是天然的精神鬆
4、弛劑，能改善睡眠，減輕焦慮及憂慮，改善頭痛，加強免疫功能，減少心臟血管疾病機會。甘胺酸甘胺酸(Glycine)Gly(G)協助從血液中釋放氧氣到組織細胞，幫助荷爾蒙的製造，加強免疫功能。絲胺酸絲胺酸(Serine)Ser(S)幫助肌肉及肝臟儲存肝糖，協助製造抗體，合成神經纖維之外鞘。非非極極性性或或疏疏水水性性的的R R基基群群不不帶帶電電荷荷或或親親水水性性的的R R基基群群本讲稿第五页，共四十三页胺基酸的種類胺基酸的種類中文名(英文名)結構縮寫功用酥胺酸酥胺酸(Threonine)Thr(T)是人體膠原蛋白，及牙齒紶瑯質之重要成份，它還可以防止肝臟脂肪堆積，及促進胃腸道功能更平順。半胱胺酸
5、半胱胺酸(Cysteine)Cys(C)清除自由基，延續老化及抗輻射，抗空氣污染，中和毒物，它是皮膚構造的重要成分(1014%)，幫助皮膚再生，使燙傷及外傷加速癒合。酪胺酸酪胺酸(Tyrosine)Tyr(Y)它是腦中神經傳導物之一，可協助克服憂鬱、改善記憶。促進甲狀腺，腎上腺及腦下垂體之功能。天門冬醯酸天門冬醯酸(Asparagine)Asn(N)在1806年最先由蘆筍汁中分離出來而得名。麩胺醯酸麩胺醯酸(Glutamine)Gln(Q)不不帶帶電電荷荷或或親親水水性性的的R R基基群群本讲稿第六页，共四十三页胺基酸的種類胺基酸的種類中文名(英文名)結構縮寫功用天門冬胺酸天門冬胺酸(Aspa
6、rtic acid)(Aspartate)Asp(D)幫助阿摩尼亞(Ammonia)排泄，恢復疲勞，增加身體耐力。麩胺酸麩胺酸(Glutamic acid)(Glutamate)Glu(E)又稱腦細胞的食物，可以提高腦部功能，促進傷口癒合，減輕疲勞，減輕酒癮，降低對醣類之嗜好。它還可促進生長激素合成，增加肌肉量及減少脂肪囤積。離胺酸離胺酸(Lysine)Lys(K)可幫助鈣質吸收，促進膠原蛋白形成，幫助抗體荷爾蒙及酵素之製造，可以輔助治療單純性泡疹。精胺酸精胺酸(Arginine)Arg(R)可增強人體對抗細菌、病毒及腫瘤之免疫力、促進生長激素之分泌，促進傷口癒合及肝細胞再生，還能促進肌肉形成
7、及減少脂肪囤積。組胺酸組胺酸(Histidine)His(H)是人體血紅素的主要成份之一，可以用來治療類風溼關節炎，過敏疾病、貧血病，缺乏組胺酸會造成聽力減退。組織胺組織胺(Histamine)帶帶負負電電荷荷的的R R基基群群帶帶正正電電荷荷的的R R基基群群本讲稿第七页，共四十三页蛋白質的四級結構蛋白質的四級結構u一級結構：u二級結構：因兩碳上的R基團與前後相鄰基團的吸引力或排斥力，使得兩相鄰胜肽鍵平面間的轉動限制在一定角度範圍，而造成規律的兩種主要構形為螺旋(helix)和長帶(sheet)，其主要構成力量都是氫鍵。u三級結構：分子內各部分的二級結構再相互組合，構成完整的球形。u四級結構
8、：數個相同或不同的三級結構分子再結合成一較大的複合體，才能進行完整的活性功能，構成四級結構的每單位分子，稱為次體(subunit)。一級結構一級結構二級結構二級結構三級結構三級結構四級結構四級結構KKGGLVAH本讲稿第八页，共四十三页蛋白質的一級結構蛋白質的一級結構 本讲稿第九页，共四十三页四級結構(QuateruaryStructure)：一些蛋白質由二個以上的peptide鏈(次單位)組成，代表蛋白質的整體結構。本讲稿第十页，共四十三页三位一體密碼三位一體密碼(The triplet code)-mRNA與蛋白質的關係與蛋白質的關係1.傳訊RNA(mRNA)(messengerRNA)2
9、.核醣RNA(rRNA)(ribosomalRNA)3.轉運RNA(tRNA)(transferRNA)本讲稿第十一页，共四十三页三種三種RNA各有所司各有所司1.信使RNA(mRNA,messengerRNA)用來傳遞DNA的遺傳訊息並作為蛋白質合的模板，佔RNA總量5%。2.核醣RNA(rRNA,ribosomalRNA)用來將mRNA所攜帶的蛋白質胺基酸訊息序列，轉譯轉譯成相對應的胺基酸，佔RNA總量的15%。3.轉運RNA(tRNA,transferRNA)核糖體RNA，是組成核糖核蛋白的主要成份。本讲稿第十二页，共四十三页lrRNA是構成核糖體的成份，且具有酵素活性，一些蛋白質會經過
10、核孔進入細胞核，在核仁附近與rRNA結合成兩種次單元（大單元及小單元，若是真核生物其大單元為60S，小單元為40S），這兩個次單元會再次經過核孔離開細胞核，到達細胞質中並組合成為mRNA-核醣體複體(mRNA-ribosomalcomplex)。rRNA的結構和功能Ribosomal RNA(rRNA)is a component of the ribosomes,the protein synthetic factories in the cell.Eukaryotic ribosomes contain four different rRNA molecules:18 s,5.8 s,28
11、 s,and 5 s rRNA.Three of the rRNA molecules are synthesized in the nucleolus,and one is synthesized elsewhere.rRNA molecules are extremely abundant.They make up at least 80%of the RNA molecules found in a typical eukaryotic cell.http:/www.biochem.uwo.ca/meds/medna/rRNA.html本讲稿第十三页，共四十三页tRNA的結構和功能攜帶胺
12、基酸來完成蛋白質合成：tRNA為單股RNA，折疊成苜蓿葉型(十字形)，它包含一個補密碼及攜帶一個對應的胺基酸，當一連串不同tRNA上面的這些補密碼與mRNA上的一連串密碼子互相配對時，其所攜帶的胺基酸就會連接在一起(這個過程皆發生在核糖體上，如同上面所提到的rRNA具有酵素活性,它可以協助胺基酸的連接)本讲稿第十四页，共四十三页mRNA與蛋白質的合成mRNA是攜帶DNA訊息，經過轉譯作用合成功能性的蛋白質。DNA會經過轉錄作用,將其遺傳密碼經過mRNA送到細胞質中轉譯出蛋白質,來表現遺傳性狀，mRNA中每三個鹼基序列稱為密碼子（如GGA,CUA,）。（這麼做可確保原始遺傳訊息不會被破壞;且因為
13、RNA是單股，容易被分解，故在mRNA進行轉譯後,可確保細胞質不會有過量的RNA且不會過度轉譯太多蛋白質）mRNA是以DNA為模板轉錄的單鏈多聚核苷酸，每三個鹼基代表一個氨基酸訊息，稱三聯體密碼。起始密碼子(AUGorGUG)與tRNA作用後便可進行蛋白質的轉譯。便可進行蛋白質的轉譯。本讲稿第十五页，共四十三页DNA-mRNA-ProteinGeneticinformationProtein（enzyme）PCRtechnology（轉錄）（轉錄）（轉譯）（轉譯）本讲稿第十六页，共四十三页一種新的胺基酸，命名為對氨基苯丙氨酸（p-aminophenylalanine，簡稱pAF)u前加州LaJ
14、olla,Scripps研究中心，目前任職賓州Lancaster,Franklin&Marshall學院的RyanMehl博士就質疑：為何生命只選定20個胺基酸？是否更多的胺基酸能產生更強勢的生物？在物競天擇的壓力下，能否更有效的適應環境？u為了釐清問題，Mehl博士與Scripps研究中心PeterSchultz教授所領導的科學家團隊，利用大腸桿菌的生命代謝路徑，由簡單的碳素來源成功產生了一種新的胺基酸，並命名為對氨基苯丙氨酸（p-aminophenylalanine，簡稱pAF)。u研究結果分析顯示，pAF在20種自然胺基酸的強力競爭下、依然能夠結合成新的蛋白質。本讲稿第十七页，共四十三页
15、第21個胺基酸如何拼碼？如何併入蛋白質合成序列？u該研究團隊將原本是蛋白質合成時、訊息RNA序列上，作為停止合成蛋白質指令的密碼，改換為非自然形成的第21種胺基酸，並建立了全新的蛋白質合成路徑。這項研究的特殊之處在於生物合成，這種細菌能自我合成新胺基酸，有別於從培養基供應的非自然形成胺基酸。u研究還發現，只需要鹽類及基本碳源，這種新創造出的細菌，便能進行後續演化功能，包括從合成新種胺基酸到組成新蛋白質，可謂是全新的非自然物種。u由於大腸桿菌長久以來便以快速增殖能力著稱，再加上細菌產生第21種胺基酸造成突變，難免使人們產生此種細菌變成強勢物種，造成失控及擴散的疑慮！為此，該研究團隊將此新物種的白
16、胺酸（Leucine）生物合成能力破壞（白胺酸為20種必須胺基酸之一），如此便可控制這種細菌免於擴散實驗室之外、引發未知的後續問題。本讲稿第十八页，共四十三页酵素酵素(Enzyme)u酵素的命名：最初酵素命名並無法定規則，但都附有-in 或-zyme 等字尾，如trypsin，renin 及 lysozyme等；後來漸以該酵素催化的反應加上-ase 字尾為名，再冠上此反應的反應物，如 histidinedecarboxylase(反應物+反應-ase)。u酵素的分類：1.氧化還原酶(Oxidoreductases)：電子或質子轉移。2.轉移酶(Transferases)：官能基團的轉移。3.水
17、解酶(Hydrolases)：加水或脫水分子。4.異構酶(Isomerases)：同一分子內基團之轉移。5.裂解酶(Lyases)：共價鍵生成或裂解。6.連接酶(Ligases)：消耗ATP生成分子間新鍵。l酵素主要由蛋白質所構成，然許多酵素還需加上其它物質。本讲稿第十九页，共四十三页全酶全酶(Holoenzyme)的組成的組成u一般酵素由蛋白質構成，但某些酵素為醣蛋白或脂蛋白，有些要加上輔助因子(cofactor,coenzyme)，才能成為功能完全的酵素稱之為全酶，若全酶失去了輔助因子，剩下的部份稱為原酶(apoenzyme)，輔助因子都是人體無法自行合成，須由外界攝取者，我們日常吃的維他
18、命丸，就幾乎全是輔助因子。(apoenzyme)本讲稿第二十页，共四十三页輔酶輔酶(Coenzyme)u二十種胺基酸的基團中，不是屬於非極性者，就是相當溫和的酸性或鹼性機團，酵素活性區經常需要較強的官能基來引發催化反應，為補足此缺點，且增加酵素的反應能力，部份酵素因此納入蛋白質以外的輔助因子參與其構造，作為催化的重要反應基團。u輔助因子：輔助因子：1.金屬離子：如Zn2+,Mg2+,Mn2+,Fe2+,Cu2+,K+，以離子鍵結合在His,Cys,Glu等胺基酸。2.有機小分子:分子構造稍複雜而多樣又稱輔酶，如維生素B群、葉酸(folicacid)。u輔酶的作用：輔酶的作用：a.改變酵素構形,
19、b.協助催化反應,c.直接提供反應基團本讲稿第二十一页，共四十三页酵素的催化反應酵素的催化反應u在反應物轉變成生成物的過程中，會有一介於兩者之間的中間過渡狀態，是整個催化反應最難達致的步驟，所以酵素的活性區是提供一個催化口袋，此口袋可以穩定中間過渡狀態的形成。也就是說，酵素可以使過渡狀態比較容易形成，所需要的能量(活化能)比較低。本讲稿第二十二页，共四十三页酵素的活性區酵素的活性區(1)可穩定過渡狀態：過渡狀態分子的構造中，經常都有相當高的局部電荷，而催化口袋內的適當位置上，剛好佈置有可以中和掉此局部高電荷的基團，因而得以穩定過渡狀態。(2)防止水分子干擾：在水溶液中，許多離子間的鍵結或反應都
20、會被水分子干擾，故凹陷的催化口袋可隔離大多數水分子，使離子間的反應順利進行。(3)具高反應性基團：在活性區內的胺基酸基團，有些可以因為特別的空間排列，而使得原本反應性低的基團(例如Ser-OH)，因為附近其他基團的影響(如His可奪取其H+)，而變成具有高反應性的基團(如Ser-O-)。(4)有輔酶幫助反應：活性區通常也是輔脢的結合區，輔脢分子都帶有強大的電荷基團，可直接參與反應或者輔助反應進行。本讲稿第二十三页，共四十三页酵素與基質的反應式酵素與基質的反應式u酵素E與受質或基質S一定要先結合在一起成為ES，然後才能得到生成物 P，因此ES的生成速度與消失速度一樣，則反應液中的ES濃度為恆定，
21、此稱為steadystatetheory。本讲稿第二十四页，共四十三页(I)(II)(III)(IV)酵素動力學酵素動力學本讲稿第二十五页，共四十三页酵素動力學實驗酵素動力學實驗u中間圖表示當基質S濃度的高低變化時，會影響酵素反應的速率。u左邊圖因直接作圖法只能以漸近估計求得Vmax，若x及y軸分別改為1/S及1/vo，可作出一條直線，由x軸上的交點求1/Km，由y軸交點求1/Vmax。u右邊圖表示若Km越高，若要達到最高速率時，所添加基質的濃度也要越高，表示該基質與酵素的親和力並不是很好。Vmax/2本讲稿第二十六页，共四十三页酵素活性單位酵素活性單位u一般測定酵素活性時，是在單位時間內測定
22、所得到生成物的量，如圖所示。若生成物以mole表示，則酵素每分鐘催化產生得到 1 mole，稱為一個活性單位，若活性單位再除以蛋白質的mg數目，即得比活性。u在一定時間內測量生成物時，要注意生成物的生成量與反應時間要成正比，如上圖反應時間在30 min 之內都可以，但是反應時間在之外時生成物已不成線性關係，測出來的活性將會不準。本讲稿第二十七页，共四十三页酵素的抑制酵素的抑制u一般細胞內的抑制劑都是屬於可逆性的抑制，也就是說當抑制劑去除後，酵素得以恢復原來的活性。u但有些外來的抑制劑，或者是人工合成的化學抑制劑，都是對酵素分子造成共價性的永久抑制，是為不可逆性的抑制。本讲稿第二十八页，共四十三
23、页三三種種酵酵素素抑抑制制機機制制 本讲稿第二十九页，共四十三页各種酵素的反應例各種酵素的反應例 Oxidoreductases一氧化還原酵素(Oxidoreductase)oxidase(氧化酶)、oxygenase(加氧酶)、peroxidase(過氧化酶)、dehydrogenase(脫氫酶)、reductase(還原酶)等多種。此種酵素作用於氧化還原反應，使物質與氫脫離或氧結合，如：食物在體內產生熱量時，此酵素作用出現e.g.L-lactate dehydrogenase(LDH,EC 1.1.1.27)(S)-lactate+NAD+pyruvate+NADH+H+malate de
24、hydrogenase(MDH,EC 1.1.1.37)(S)-malate+NAD+oxaloacetate+NADH+H+本讲稿第三十页，共四十三页1.Oxidase:以氧為氧化劑，對受質進行氧化催化。如:Glucoseoxidase(GOD,GOx,EC1.1.3.4)Glucose+O2gluconicacid+H2O22.Oxygenase:以氧為氧化劑，催化受質與氧原子結合的反應。如:(Rubisco,EC4.1.1.39)Ribulose1,5bisphosphate+O22-phosphoglycolate+3-phosphoglycerate+2H+Rubisco:ribul
25、ose-1,5-bisphosphatecarboxylase/oxygenase3.Peroxidase:以化學物質為還原劑，將過氧化氫還原催化成H2O。如:(Horseraddishperoxidase,HRP,EC1.11.1.x)ROOR+electrondonor(2e-)+2H+ROH+ROH(1)Ascorbateperoxidase:催化以ascorbicacid為還原劑。(2)Glutathioneperoxidase:催化以glutathione為還原劑。(3)Catalase(EC1.11.1.6):亦為一種peroxidase，為催化H2O2為還原劑。2H2O2O2+2
26、H2O本讲稿第三十一页，共四十三页4.Dehydrogenase:催化由受質移走氫原子的反應，所移走的氫原子，會轉給酵素的輔酶(coenzymes,如NADP+、NAD+或FAD等)。該酵素要在有輔酶的情況下，始能進行催化反應且常具其逆反應之催化性，即從輔酶(coenzymes,如NADPH、NADH或FADH2等)轉移氫原子給受質。如:(1)Malate+NAD+-(MDH)oxaloacetate+NADH+H+(2)Succinate+FAD-(succinatedehydrogenase,EC1.3.5.1)fumarate+FADH2(3)Glucose6-phosphate+NAD
27、P+H2O-(glucose6-phosphatedehydrogenase,EC1.1.1.49)6-phosphogluconate+NADPH+2H+(4)Acetaldedyde+NADH+H+-(ADH,EC1.1.1.1)-alcohol+NAD+(5)pyruvate+NADH+H+-(LDH)lactate+NAD+5.Reductase:泛指可催化對受質進行還原反應的酵素。如上述的peroxidase或dehydrogenase(催化其逆反應時)均是一種reductase。Reductase還有許多種類，如:(1)nitratereductase:催化將硝酸(nitrate,
28、NO3-)還原成亞硝酸(nitrite,NO2-)的反應:2H+NO3-+2e-NO2-+H2O。(2)nitritereductase:催化將亞硝酸(nitrite,NO2-)還原成氨(NH4+)的反應:8H+NO2-+6e-NH4+2H2O。本讲稿第三十二页，共四十三页Glucose-6-phosphate dehydrogenase(G6PDH)deficiency 本讲稿第三十三页，共四十三页各種酵素的反應例各種酵素的反應例-二轉移酵素(transferase)EC2轉移酶轉移酶是一種催化一個分子（稱為供體）的官能團（如甲基或磷酸鹽團）轉移至另一個分子（稱為受體）的酶。例如以下的化學反
29、應就是轉移酶：兩分子之間的原子或官能基的轉移。A-X+BA+B-X Choline acetyltransferase(EC2.3.1.6)isanenzymewhichissynthesizedwithinthebodyofaneuron.Itisthentransferredtothenerveterminalviaaxoplasmicflow.ItjoinsAcetylCoAtocholine,resultingintheformationoftheneurotransmitteracetylcholine.Acetylcholine(乙醯膽鹼）Choline(膽鹼）本讲稿第三十四页，共
30、四十三页各種酵素的反應例各種酵素的反應例-三水解酵素(Hydrolase)EC3 1.1.水解酶水解酶是一種催化化學鍵的水解的酶，催化以下的化學反應就是水解酶：A-B+H2OA-OH+B-H2.此種酵素功能為水解化合物，食物進入體內經水解後，以助體內消化。如澱粉水解成葡萄糖以利體內吸收Glycoside hydrolases(EC3.2.1.x)glucose-6-phosphate(G6P)ishydrolyzedtoglucosebytheglucose-6-phosphatase(G6Pase,EC3.1.3.9)complex本讲稿第三十五页，共四十三页各種酵素的反應例各種酵素的反應例
31、-四裂解酵素(Lysase)EC4從基質內取走官能基，但非經過水解。EC4.1包括分解C-C鍵的裂合酶，如脫羧酶EC4.2包括分解C-O鍵的裂合酶，如脫水酶EC4.3包括分解C-N鍵的裂合酶EC4.4包括分解C-S鍵的裂合酶EC4.5包括分解碳鹵鍵的裂合酶EC4.6包括分解P-O鍵的裂合酶，如腺苷環化酶EC4.99包括其他裂合酶本讲稿第三十六页，共四十三页各種酵素的反應例各種酵素的反應例-五異構酵素(Isomerase)EC5異構酶異構酶是一種催化同分異構體轉換的酶。亦即，使某種物質中的原子重新組合成為異構物 -甲氨基甲氨基-L-丙氨酸，（英文丙氨酸，（英文-methylamino L-ala
32、nine，簡稱，簡稱BMAA），是一種），是一種神神經毒素經毒素，能在，能在蘇鐵蘇鐵科植物種子中找到。這一種科植物種子中找到。這一種非蛋白胺基酸非蛋白胺基酸，與非必要胺基酸，與非必要胺基酸丙氨酸丙氨酸（alanine）十分相似，是由）十分相似，是由念珠藻屬念珠藻屬的的藍藻藍藻產生，而這些藍藻大都生長於植物的產生，而這些藍藻大都生長於植物的根部根部。L-alanine D-alanine本讲稿第三十七页，共四十三页各種酵素的反應例各種酵素的反應例-六接合酵素(Ligases)EC6 連接酶連接酶，或稱連結酶連結酶及結合酶結合酶，是一種催化兩種大型分子以一種新的化學鍵結合一起的酶，一般會涉及水解其
33、中一個分子的團。亦即，連結兩個分子，並隨之分解ATP中的焦磷酸鹽鍵A-b+CA-C+bA-c+D-bA-D+b+c 如：如：X+Y+ATP X-Y+ADP+Pi 本讲稿第三十八页，共四十三页酵素的命名酵素的命名 http:/juang.bst.ntu.edu.tw/BCbasics/Enzyme12.htm#1a.早期命名：最初酵素命名最初酵素命名並無法定規則，但都附有-in或-zyme等字尾，例如trypsin,renin及lysozyme等；後來後來漸以該酵素催化的反應加上-ase字尾為名，再冠上此反應的反應物，如histidinedecarboxylase(反應物+反應-ase)。b.系
34、統命名法：1965年命名系統化，把所有酵素依催化反應分成六大類，以四組數字名之(IUBMB系統)；例如histidinecarboxylase為EC4.1.1.22：Main Class：4Lyases分裂C-C,C-O,C-N鍵Subclass ：4.1C-Clyase分裂C-C鍵Sub-subclass：4.1.1Carboxylase分裂C-COO鍵序列號碼序列號碼：22第22個4.1.1分裂組胺酸的C-COO鍵本讲稿第三十九页，共四十三页吸光法原理：吸光法原理：Beer-Lamberts law化學物質在波長的吸光值(A)與下列兩項因子成一正比關係:(1)化學物質在溶液中的濃度(c;單
35、位:M或mg/ml等)。(2)所用石英管(cuvette)的寬度(l;單位:cm)。(3)化學物質在波長的吸光值(A;absorbance)定義為A=log(I0/I)。吸光值另稱為opticaldensity(OD)，分光光度儀(spectrophotometer)測定吸光值。此正比關係稱為Beers law(或Beer-Lambertslaw):即A =c l l-l-ITransmittedlightintensityIoIncidentlightintensity石英管寬度石英管寬度l l本讲稿第四十页，共四十三页H2O2在波長240nm的240nm=0.0395mM-1cm-1NAD
36、H在波長340nm的240nm=6220mM-1cm-1NADH於酸中不安定本讲稿第四十一页，共四十三页酵素的活性單位酵素的活性單位(1)抽出液中含有多種蛋白質，這當中有些則具有某些酵素活性。如，種子抽出液中，含有多種酵素，其中有一種即為a-amylase。常用的單位有兩種:(a)units/ml:即1ml的抽出液中含多少unit(單位)的該種酵素活性。(b)unit/mg:即抽出液中，每1mg的蛋白質含有多少unit(單位)的該種酵素活性，此法稱為抽出液中所含有該酵素的比活性比活性(specificactivity)。比活性愈高，則抽出液含有該酵素的純度愈高。(2)酵素活性單位(unit)，指在單位時間(通常為分鐘)內，酵素使受質減少(或產物增加)的量。受質減少(或產物增加)的量，可視實驗的需求或方便性，以mole、g、OD吸光值等表示。1U=mole/min(1961),1 kat=1 mole/sec(1972)=60 x 106 mole/min=6 x 107 U O.D.值變化量活性(ko)=min-1orsec-1(樣品蛋白質含量)x(反應時間)本讲稿第四十二页，共四十三页Thanks for your attention本讲稿第四十三页，共四十三页