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1、需氧革兰阳性杆菌需氧革兰阳性杆菌芽胞杆菌属芽胞杆菌属Bacillus李斯特菌属李斯特菌属Listeria丹毒斯菌属丹毒斯菌属Erysipelothrix加德纳菌属加德纳菌属Gardnerella需氧芽胞杆菌属（需氧芽胞杆菌属（Bacillus）48个种个种与医学有关与医学有关5个种个种炭疽芽胞杆菌（炭疽芽胞杆菌（B.anthracis）蜡样芽胞杆菌（蜡样芽胞杆菌（B.cereus）蕈状芽胞杆菌（蕈状芽胞杆菌（B.mycoides）巨大芽胞杆菌（巨大芽胞杆菌（B.megaterium）苏云金芽胞杆菌苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis）1临床意义临床意义n引起人、蓄共患的急性传染病，包
2、括皮肤炭疽、肺炭引起人、蓄共患的急性传染病，包括皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽、败血性炭疽，疽、肠炭疽、败血性炭疽，烈性传染病烈性传染病,死亡率极死亡率极n致病因子：致病因子：荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子n病后可获得持久免疫力病后可获得持久免疫力炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌2炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌革兰阳性大杆菌，两端截平，竹节状排列，有芽胞、革兰阳性大杆菌，两端截平，竹节状排列，有芽胞、无鞭毛、可有毒株有荚膜，芽胞椭圆形，小于菌体，无鞭毛、可有毒株有荚膜，芽胞椭圆形，小于
3、菌体，位于菌体中央，多在有氧条件下形成，位于菌体中央，多在有氧条件下形成，2530，在，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸体严禁解剖尸体严禁解剖3n普琼平板：灰色、粗糙型菌落；普琼平板：灰色、粗糙型菌落；卷发状边缘（低倍镜下）卷发状边缘（低倍镜下）nBAP：不溶血不溶血nNaHCO3BAP：有毒株产生荚膜呈黏液有毒株产生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴鉴别要点别要点)无毒株无毒株粗糙型菌落粗糙型菌落培养特性培养特
4、性n肉汤培养基：絮状肉汤培养基：絮状沉淀沉淀n明胶明胶371824h表面液化成漏斗状，表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒向四周扩散形成倒松树状。松树状。4生化反应生化反应n葡萄糖葡萄糖+、麦芽糖、麦芽糖+、蔗糖、蔗糖+、n卵磷脂酶弱卵磷脂酶弱+、触酶、触酶+n硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验+、VP、吲哚、硫化氢、吲哚、硫化氢、柠檬酸盐、尿素、柠檬酸盐、尿素n明胶液化明胶液化n胨化牛乳：在牛乳中生长胨化牛乳：在牛乳中生长24天后牛乳凝固天后牛乳凝固并缓慢胨化并缓慢胨化5抗原抗原l菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热，特异性菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热，特异性不高，病兽脏
5、器皮毛加热后仍可与相应抗体不高，病兽脏器皮毛加热后仍可与相应抗体反应，称反应，称Ascoli热沉淀反应热沉淀反应l荚膜多肽抗原：抗吞噬，与毒力有关荚膜多肽抗原：抗吞噬，与毒力有关l芽胞抗原：芽胞抗原：l炭疽毒素炭疽毒素Anthraxtoxin：由保护性抗原、致由保护性抗原、致死因子、水肿因子形成。死因子、水肿因子形成。6抵抗力抵抗力n耐热、耐干燥耐热、耐干燥n对氧化剂敏感对氧化剂敏感n对青霉素、磺胺类抗生素敏感对青霉素、磺胺类抗生素敏感7微生物学检查微生物学检查n标本的采集：分泌物、痰、血液、粪便、标本的采集：分泌物、痰、血液、粪便、呕吐物、脑脊液等，严禁宰杀解剖死蓄。呕吐物、脑脊液等，严禁宰
6、杀解剖死蓄。n标本的处理：液体标本取沉渣分离培养；标本的处理：液体标本取沉渣分离培养；固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死非固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死非芽胞菌；血液、脏器、渗出液增菌或直芽胞菌；血液、脏器、渗出液增菌或直接分离培养接分离培养8痰、呕吐物、痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物及炎症分泌物2%兔血清肉兔血清肉汤快速增菌汤快速增菌374h荚荚膜膜荧荧光光抗抗体体染染色色或或荚荚膜膜肿肿胀胀试试验验直接涂片直接涂片荚膜染色荚膜染色G染色染色初步报告初步报告0.2ml注射小白鼠注射小白鼠腹腔，腹腔，8h后解剖后解剖涂片涂片G染色、染色、荚膜染色荚膜染色初步报告初步报告快速检验程序快速检验程序
7、核核酸酸检检测测Ascoli试验试验皮毛、腐皮毛、腐败脏器等败脏器等9生生化化反反应应噬噬菌菌体体裂裂解解青青霉霉素素抑抑制制毒毒力力试试验验皮毛、腐败脏器等皮毛、腐败脏器等血液血液以以NG制成悬液制成悬液经加温或饱和经加温或饱和尿素处理尿素处理肉汤增肉汤增菌培养菌培养BAP或戊或戊烷脒平板烷脒平板2%兔血清肉汤兔血清肉汤48hG染色镜检染色镜检菌落特征菌落特征动动力力观观察察串串珠珠试试验验确定报告确定报告荚荚膜膜肿肿胀胀试试验验分离培养分离培养检验程序检验程序法定报告传染病，发现疑是病例应于法定报告传染病，发现疑是病例应于24小时内上报小时内上报CDC10戊烷脒多粘菌素琼脂戊烷脒多粘菌素琼
8、脂基础培养基基础培养基25g/L戊烷脒戊烷脒:杀灭利什曼原虫等寄生虫杀灭利什曼原虫等寄生虫3000IU/L多粘菌素多粘菌素2%脱纤维羊血脱纤维羊血11检验方法检验方法n涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹节状排列、涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹节状排列、有明显荚膜和芽胞有明显荚膜和芽胞初步报告初步报告n荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验n核酸检测：核酸杂交核酸检测：核酸杂交n分离培养：分离培养：BAP或戊烷脒多粘菌素或戊烷脒多粘菌素B等等选择性选择性培养基。培养基。2%兔血清肉汤增菌兔血清肉汤增菌分离培养分离培养12n菌落特征菌落特征n形态染色形态染色n生化试验生化试验:表表1
9、31n串珠试验串珠试验:接种于含青霉素接种于含青霉素(0.050.5U/ml)的肉汤中，的肉汤中，376h，大而均匀成串的圆球，大而均匀成串的圆球状菌体，与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关，状菌体，与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关，类炭疽无此现象类炭疽无此现象鉴定试验鉴定试验13接种于含青霉素接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，琼脂平板，3724h生长生长受抑制不生长受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验：兔血琼脂平板兔血琼脂平板抑菌环抑菌环青霉素纸片青霉素纸片青霉素抑制试验青霉素抑制试验串珠形成区串珠形成区14噬菌体裂解试验：噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体炭疽噬菌体NaHCO3毒
10、力试验：毒力试验：接种于含接种于含0.5%NaHCO3和和10%马血清的平板，马血清的平板，10%CO2、37、2448h，有毒株，有毒株形成荚膜形成荚膜黏液型菌落，无毒株不形成荚膜黏液型菌落，无毒株不形成荚膜粗糙型粗糙型菌落菌落毒素动物试验：毒素动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种小鼠、家兔或豚鼠皮下接种植物凝集素试验：植物凝集素试验：荧光或酶标记荧光或酶标记PHA与菌体多糖反应与菌体多糖反应Ascoli热沉淀试验热沉淀试验：可作追溯性诊断可作追溯性诊断其它实验其它实验15临床意义临床意义l食物中毒：食物中毒：含菌量达含菌量达105/g以上，夏、秋季以上，夏、秋季多见，中毒食物大多无腐败、变质
11、现象，多见，中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意感官性状正常，应引起注意呕吐型呕吐型耐热肠毒素耐热肠毒素腹泻型腹泻型不耐热肠毒素不耐热肠毒素l全眼球炎（外伤后）全眼球炎（外伤后）l心内膜炎、败血症和脑膜炎心内膜炎、败血症和脑膜炎蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌Bacilluscereus16蜡样芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌Bacilluscereusn形态：革形态：革兰兰阳性大杆菌、两端钝圆、阳性大杆菌、两端钝圆、有芽胞、周鞭毛、无荚膜有芽胞、周鞭毛、无荚膜n培养特性：需氧或兼性厌氧，最适温培养特性：需氧或兼性厌氧，最适温度度3035，营养要求不高。，营养要求不高。普通琼脂平板：菌落较大，灰
12、白色，普通琼脂平板：菌落较大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有蜡表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有蜡样光泽样光泽BAP有有溶血溶血卵黄平板卵黄平板生长迅速，培养生长迅速，培养3h后，后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应卵黄反应17生化反应生化反应n葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等n卵磷脂酶卵磷脂酶+、VPn胨化牛乳、液化明胶，胨化牛乳、液化明胶，n多次传代后生化特性常可改变多次传代后生化特性常可改变18微生物学检查微生物学检查呕吐物、残留食物等呕吐物、残留食物等活菌计数活菌计数
13、接种接种BMBAP卵黄琼脂平板卵黄琼脂平板371824h直接涂直接涂片染色片染色镜检镜检动物试验动物试验生化反应生化反应血清凝集血清凝集报告结果报告结果19结果解释结果解释l因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。起食物中毒的病原菌。n从食物中分离出菌数从食物中分离出菌数105CFU/g，提示本菌，提示本菌活跃生长，构成潜在危险活跃生长，构成潜在危险n从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或或)呕吐物中分离到的菌株属同一血清型呕
14、吐物中分离到的菌株属同一血清型20三、枯草芽胞杆菌三、枯草芽胞杆菌21生物学性状生物学性状形态染色形态染色n革兰阳性大杆菌、革兰阳性大杆菌、两端钝圆两端钝圆n有芽胞、无荚膜、有芽胞、无荚膜、有鞭毛有鞭毛22培养特性培养特性nBM：灰白色、不透明、干燥、锯灰白色、不透明、干燥、锯齿状粗糙大菌落齿状粗糙大菌落nBAP：溶血大菌落溶血大菌落23生化反应生化反应n触酶触酶+n葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖糖n串珠试验串珠试验n卵磷脂酶卵磷脂酶24炭疽芽胞杆菌与其他需氧芽胞杆菌的鉴别炭疽芽胞杆菌与其他需氧芽胞杆菌的鉴别鉴别项目鉴别项目炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌枯草芽胞杆菌枯草芽
15、胞杆菌蜡样及其他芽胞杆菌蜡样及其他芽胞杆菌n形态形态菌体两端平截、长链菌体两端平截、长链两端钝园、短链两端钝园、短链两端钝园、短链两端钝园、短链n荚膜荚膜多肽荚膜多肽荚膜n动力动力+n菌落菌落卷发状，有毒株为卷发状，有毒株为M型型锯齿状、锯齿状、R型型蜡样或蜡样或R型型n肉汤生长肉汤生长絮状沉淀、上层清絮状沉淀、上层清形成菌膜形成菌膜均匀混浊有菌膜均匀混浊有菌膜n卵磷脂酶卵磷脂酶+n溶血反应溶血反应不溶或微溶血不溶或微溶血溶血溶血溶血溶血nAscolis试验试验+n串珠试验串珠试验+n青霉素抑制试验青霉素抑制试验+n植物凝集素试验植物凝集素试验+n荚膜肿胀试验荚膜肿胀试验+n荧光抗体染色荧光抗
16、体染色n动物毒力试验动物毒力试验+蜡样芽胞杆菌的肠毒素可致蜡样芽胞杆菌的肠毒素可致小鼠等动物发病致死，但不产生荚膜，其他需氧芽胞杆菌（）小鼠等动物发病致死，但不产生荚膜，其他需氧芽胞杆菌（）n噬菌体裂解试验噬菌体裂解试验+25李斯特菌属李斯特菌属产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌红斑丹毒丝菌红斑丹毒丝菌26一、产单核细胞李斯特菌一、产单核细胞李斯特菌生物学性状生物学性状n革兰阳性短小杆菌成双排列革兰阳性短小杆菌成双排列n有鞭毛（有鞭毛（1820有动力；有动力；37动力缓慢），无芽胞，无荚膜动力缓慢），无芽胞，无荚膜n4可生长可生长nBAP：灰白色菌落，有狭窄的：灰白色菌落，有狭窄的溶血环溶血
17、环n半固体培养基：倒伞形生长半固体培养基：倒伞形生长27生化反应生化反应n发酵多种糖类发酵多种糖类n硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验n甲基红甲基红+nVP试验试验+抵抗力抵抗力n耐碱不耐酸耐碱不耐酸n对热敏感对热敏感n对多种抗生素敏感对多种抗生素敏感（首选氨苄青霉素）（首选氨苄青霉素）对磺胺、杆菌肽、多对磺胺、杆菌肽、多粘菌素耐药粘菌素耐药28临床意义临床意义n主要引起脑膜炎、败血症主要引起脑膜炎、败血症n传播途径：粪口途径，胎盘和产道传播途径：粪口途径，胎盘和产道n致病因子：溶血素和菌体表面成分致病因子：溶血素和菌体表面成分29微生物检查微生物检查标本标本涂片革兰涂片革兰染色镜检染色镜检荧光抗荧
18、光抗体染色体染色动力检查动力检查（25，37）血液血液肉汤增菌肉汤增菌脑脊液脑脊液沉淀物沉淀物咽喉拭子、咽喉拭子、组织、粪组织、粪便冷增菌便冷增菌接种羊血琼脂平板接种羊血琼脂平板生生化化反反应应血血清清学学试试验验动动物物试试验验30二、红斑丹毒丝菌二、红斑丹毒丝菌革兰阳性杆菌，无芽胞，无鞭毛，无荚膜革兰阳性杆菌，无芽胞，无鞭毛，无荚膜厌氧或微需氧厌氧或微需氧BAP：形成两种菌落形成两种菌落光滑型小菌落和粗造型大菌光滑型小菌落和粗造型大菌落。落。发酵葡萄糖及乳糖、液化明胶、产生硫化氢发酵葡萄糖及乳糖、液化明胶、产生硫化氢主要引起家畜感染及人类丹毒主要引起家畜感染及人类丹毒31加德纳菌属加德纳菌
19、属阴道加特纳菌阴道加特纳菌32生物学性状生物学性状n多形性，单个或成双排列，染色不定（视菌龄多形性，单个或成双排列，染色不定（视菌龄和菌种而定：临床株和菌种而定：临床株G+，保存株保存株G），无），无芽胞、无荚膜、无鞭毛芽胞、无荚膜、无鞭毛n兼性厌氧，营养要求高，兼性厌氧，营养要求高，BAP：可有：可有溶血溶血n葡萄糖、麦芽糖、蔗糖葡萄糖、麦芽糖、蔗糖n氧化酶、触酶氧化酶、触酶n对青霉素类敏感、对磺胺类耐药对青霉素类敏感、对磺胺类耐药33临床意义临床意义n与与非特异性阴道炎（非特异性阴道炎（BV）有关有关BV是阴道内乳酸杆菌被另一组厌氧是阴道内乳酸杆菌被另一组厌氧菌为主的细菌取代，同时伴有阴道
20、分泌菌为主的细菌取代，同时伴有阴道分泌物性质改变的一组综合征。物性质改变的一组综合征。主要病因为阴道内乳酸杆菌大量减主要病因为阴道内乳酸杆菌大量减少，伴有阴道加特纳菌、类杆菌、消化少，伴有阴道加特纳菌、类杆菌、消化球菌及支原体大量增殖。球菌及支原体大量增殖。34微生物学检查微生物学检查分泌物（阴道、宫颈）分泌物（阴道、宫颈）涂片染色镜检涂片染色镜检分离培养（分离培养（5%人血平板）人血平板）溶血菌落溶血菌落纯培养（纯培养（5%人血平板）人血平板）触酶、氧化酶（）触酶、氧化酶（）初步报告初步报告GV的主要鉴定试验的主要鉴定试验最后报告最后报告35本章要点概念：串珠试验、概念：串珠试验、Ascoli热沉淀试验、青霉素抑热沉淀试验、青霉素抑制试验、制试验、NaHCO3毒力试验毒力试验炭疽芽胞杆菌所致疾病与致病机理、微生物学炭疽芽胞杆菌所致疾病与致病机理、微生物学诊断方法与判断依据诊断方法与判断依据36思考题如何鉴定炭疽杆菌与非炭疽杆菌？如何鉴定炭疽杆菌与非炭疽杆菌？37