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1、膜片钳仿真膜片钳(膜片钳(Patch Clamp)Patch Clamp)的基本原理:的基本原理:利用尖端直径0.5-1um的玻璃电极吸附到细胞膜表面,通过负压吸引使电极尖端和细胞膜形成紧密封接,使与电极尖开口处相接的细胞膜小片区域(patch)与其周围在电学上绝缘,在此基础上固定膜电位(clamp),然后对电极尖端下面积仅为几平方微米的细胞膜片上一个或几个离子通道的电流进行记录。从而将电生理学技术提高到记录和研究单个蛋白质的分子水平 核心部分是一场效应管运算放大器构成的I-V转换器,他的正负输入端子为等电位。向正输入端子施加指令电位(Vc)时,经过短路负端子可使膜片等电位,从而达到电位钳制的
2、目的。离子通道电流可作为I-V转换器内的高阻抗反馈电阻的电压降而被检测出。电流信号电流信号单通道电流单通道电流全细胞电流全细胞电流突触电流突触电流电压信号电压信号阈电位阈电位静息电位静息电位动作电位动作电位膜片钳记录的信息膜片钳记录的信息电压钳模式电压钳模式电流钳模式电流钳模式1.1.单通道电流单通道电流1.典型的单通道电流呈一种振幅相同而持续时间不等的脉冲样变化。他有两个电导水平,即0和1,分别对应通道的关闭和开放状态。2.有的矩形脉冲簇状发放时,通道电流不在同一水平,可以明显观察到不同数目离子通道所形成的电流台阶,从而可推断出被测膜片的通道数目。3.有的通道可记录到圆滑型和方波形两种形式。4.有些通道开放活动是持续开放,中间被闪动样的关闭所中断,形成burst开放。有些通道开放活动是簇状开放与短期平静交替出现,形成簇状发放串(Cluster)2.2.全细胞电流全细胞电流全细胞电流是一些形状各异的电流曲线全细胞电流是一些形状各异的电流曲线IA currents2nA20msNa+currentsIK currentsVh=-80mV 40mV-60mV电流钳模式电流钳模式