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1、裸鼠成瘤实验注意事项本讲稿第一页，共十七页裸鼠无胸腺裸鼠（NudeMouse，简称裸鼠）。目前已成为医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。特别是在肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价及有效药品的筛选等实验方面，它有着特殊的价值。裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。杂合子小鼠（nn/+）各方面表现都正常。小鼠中有若干突变基因，它可产生一种为无毛的表现型（phenotype），例如无胸腺裸鼠（Nude）、裸鼠（Naked）、无毛鼠（Hairless）、无鼻毛鼠（Rhinol），不要把这些突变鼠基因相互混淆。裸鼠的唯一特性
2、是胸腺缺陷表现型裸鼠的唯一特性是胸腺缺陷表现型，因此，不能将“裸鼠”与“无毛鼠”两词交换使用。本讲稿第二页，共十七页 裸鼠裸小鼠裸大鼠本讲稿第三页，共十七页裸小鼠(基因符号nu):无毛(hair less),无胸腺(athymus).幼鼠(34周龄),成年鼠(68周龄。抵抗力差，易在SPF环境下可生存，所用的笼具、垫料、饲料、饮水患病毒性肝炎和肺炎，因而饲养和繁殖要求条件比较严格，等都要求经过严密灭菌消毒并采用隔离器饲养，以保证长期存活并进行繁殖。裸大鼠(基因符号rnu)：一般特征似裸小鼠，但躯干部仍有稀少被毛并非象裸小鼠那样完全无毛，头部及四肢毛更多。裸大鼠易患呼吸道疾病。形态特征本讲稿第四
3、页，共十七页 虽然说以裸大鼠代替裸小鼠，具有移植肿瘤大，取血量多，可行某些外科小手术等优点。因此比裸小鼠有一定优越性，其缺点是维持经费比裸SPF小鼠更高，另外裸大鼠目前不怎么流行。所以我们实验室常用的是BALB/c-nu裸小鼠。随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染),裸鼠体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验一般采用4-6周龄的裸鼠。裸鼠的选择本讲稿第五页，共十七页1.人体原发癌 我们实验室均采用细胞株作为材料，这个方式是 性价比最高的，操作简便，材料安全且容易获取。结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、肾癌、宫颈癌、软组织肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百分比（
4、35.7%）的良好生长，并可传代。裸鼠成瘤 2.建株的人体肿瘤组织培养细胞裸鼠成瘤方式理论上建株的肿瘤细胞均可以本讲稿第六页，共十七页细胞的选择大致有一下几个方面：1.国际公认度较高的细胞株。2.根据体内生长情况来确定，很多细胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名。细胞株的选择当然，我们对于细胞株的选择是没有选择的！本讲稿第七页，共十七页常规较容易成瘤的细胞：Hep-G2（肝癌，Hep2（喉癌），NCI-H460(大细胞肺)，A431(表皮癌),SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌），A375/B16-F10（人黑色素瘤细胞）。可以成瘤但是比较慢的细胞：CNE
5、（鼻咽癌），A549（肺癌），SPC-A-1（肺腺癌）。HT-29（结肠癌），EL-7402（肝癌）。一些比较有争议的细胞：Hela（宫颈癌），HCT（人回盲肠癌细胞/人结直肠癌腺癌细胞）。常见的细胞株本讲稿第八页，共十七页1、慢病毒保存理论上慢病毒可在-80保存6个月，在4可保存3天。因为慢病毒每次冻融会降低病毒滴度10%，因此慢病毒实验最好是提前分装。2、MOI值细胞感染达到80%以上所需MOI值，这个大部分细胞是可以查到，不过因为因为慢病毒感染细胞是很灵活的，因此MOI值的选择也是很有差异性的，具体情况具体分析。细胞慢病毒感染本讲稿第九页，共十七页附：慢病毒使用量的相关计算公式MOI=（
6、慢病毒使用的体积*慢病毒滴度）/需要感染的细胞数其中：慢病毒使用体积单位为ml慢病毒滴度单位为TU/ml例如：Hep-G2细胞，MOI=20，慢病毒滴度=1.0*108TU/ml,24孔板的细胞总数：2.0*105个。因此：感染24孔板中1孔的HEP-G2细胞所需要的慢病毒体积为：(20*2.0*105)/1.0*108=0.04ml细胞慢病毒感染本讲稿第十页，共十七页附：一些细胞的慢病毒感染效果图K562A549细胞慢病毒感染本讲稿第十一页，共十七页细胞培养：细胞的状态以及数量是裸鼠皮下成瘤很关键的一步。细胞状态良好，对数生长期，接种很容易形成肿瘤，反之则会导致失败。即浪费了细胞，又错过了裸
7、鼠成瘤的最佳时期裸鼠成瘤-+本讲稿第十二页，共十七页裸鼠成瘤细胞接种：接种的细胞量：无血清培养基重悬成1*107个/ml的悬液，0.2ml/只/针。也就是一只裸鼠最少要用200W个细胞，有的细胞需求可能会达到1000W个/只。接种的部位大部分颈部和腋下皮下。血丰富，能提供大量的营养。当然，这个也是可以调整的。另外裸鼠理论上是1个裸鼠只能接种1针，形成1个肿瘤。因为2个或者以上的肿瘤是会相互影响的。本讲稿第十三页，共十七页附：我们实验一些裸鼠成瘤的成功案例Hep-G2细胞A375细胞裸鼠成瘤本讲稿第十四页，共十七页裸鼠皮下成瘤后，除了一些常规的检测外我们一般可进行以下一些实验操作：裸鼠活体荧光一些其他情况下的裸鼠成瘤本讲稿第十五页，共十七页1、裸鼠的品系。2、裸鼠成瘤用的材料：细胞的选择。3、客户的具体要求：比如说肿瘤形成部位，是否需要详细记录肿瘤的大小变化，是否需要取材后需要怎么拍摄裸鼠的照片等等。相关裸鼠皮下成瘤的建议本讲稿第十六页，共十七页谢谢大家！谢谢大家！本讲稿第十七页，共十七页