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1、第十四章第十四章 免疫学实验技免疫学实验技术抗原抗体反应术抗原抗体反应本讲稿第一页，共十二页第一节第一节 抗原抗原-抗体反应抗体反应n n抗原与相应抗体在抗原与相应抗体在抗原与相应抗体在抗原与相应抗体在体内体内体内体内或或或或体外体外体外体外相遇可发生特异性结合，呈现某种反应现相遇可发生特异性结合，呈现某种反应现相遇可发生特异性结合，呈现某种反应现相遇可发生特异性结合，呈现某种反应现象象象象n n因抗体主要来自血清，因此在体外进行的抗原抗体反应称为血清学因抗体主要来自血清，因此在体外进行的抗原抗体反应称为血清学因抗体主要来自血清，因此在体外进行的抗原抗体反应称为血清学因抗体主要来自血清，因此在
2、体外进行的抗原抗体反应称为血清学反应或免疫血清学技术反应或免疫血清学技术反应或免疫血清学技术反应或免疫血清学技术n n由于抗体纯化技术及单克隆抗体技术的发明与应用，抗体不一定来自由于抗体纯化技术及单克隆抗体技术的发明与应用，抗体不一定来自由于抗体纯化技术及单克隆抗体技术的发明与应用，抗体不一定来自由于抗体纯化技术及单克隆抗体技术的发明与应用，抗体不一定来自血清，因此，血清学反应已不能完全代表抗原血清，因此，血清学反应已不能完全代表抗原血清，因此，血清学反应已不能完全代表抗原血清，因此，血清学反应已不能完全代表抗原-抗体反应。抗体反应。抗体反应。抗体反应。本讲稿第二页，共十二页本讲稿第三页，共十
3、二页抗原抗原抗原抗原-抗体反应特点抗体反应特点抗体反应特点抗体反应特点1 1 1 1、抗原与抗体的结合是特异性结合（特异性）、抗原与抗体的结合是特异性结合（特异性）、抗原与抗体的结合是特异性结合（特异性）、抗原与抗体的结合是特异性结合（特异性）l l伤寒杆菌的抗体只与伤寒杆菌结合，不与痢疾杆菌结合，反之亦然伤寒杆菌的抗体只与伤寒杆菌结合，不与痢疾杆菌结合，反之亦然伤寒杆菌的抗体只与伤寒杆菌结合，不与痢疾杆菌结合，反之亦然伤寒杆菌的抗体只与伤寒杆菌结合，不与痢疾杆菌结合，反之亦然l l这种特异性结合是由抗原分子上的决定簇和抗体分子这种特异性结合是由抗原分子上的决定簇和抗体分子这种特异性结合是由抗
4、原分子上的决定簇和抗体分子这种特异性结合是由抗原分子上的决定簇和抗体分子V V V V区中的超变区相互适应区中的超变区相互适应区中的超变区相互适应区中的超变区相互适应所决定的。但抗原成分复杂所决定的。但抗原成分复杂所决定的。但抗原成分复杂所决定的。但抗原成分复杂,常含有多种抗原决定簇常含有多种抗原决定簇常含有多种抗原决定簇常含有多种抗原决定簇,可以刺激机体分别产生可以刺激机体分别产生可以刺激机体分别产生可以刺激机体分别产生相应的抗体相应的抗体相应的抗体相应的抗体,即多克隆抗体即多克隆抗体即多克隆抗体即多克隆抗体.l l如果两种不同的抗原物质具有部分相同或类似结构的决定簇，则与抗体血如果两种不同
5、的抗原物质具有部分相同或类似结构的决定簇，则与抗体血如果两种不同的抗原物质具有部分相同或类似结构的决定簇，则与抗体血如果两种不同的抗原物质具有部分相同或类似结构的决定簇，则与抗体血清反应时可出现交叉反应。如变形杆菌与立克次氏体之间有共同抗原决定清反应时可出现交叉反应。如变形杆菌与立克次氏体之间有共同抗原决定清反应时可出现交叉反应。如变形杆菌与立克次氏体之间有共同抗原决定清反应时可出现交叉反应。如变形杆菌与立克次氏体之间有共同抗原决定族。（其他例子）族。（其他例子）族。（其他例子）族。（其他例子）本讲稿第四页，共十二页CLCLCH1VLVLVHVHCH2CH3C端N端恒恒定定区区可可变变区区FC
6、 段Fab段铰链铰链区区补体结合补体结合FcFc受体结合受体结合抗原结合部位抗原结合部位本讲稿第五页，共十二页本讲稿第六页，共十二页2 2 2 2、抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合（可逆性）、抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合（可逆性）、抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合（可逆性）、抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合（可逆性）l l结合力的大小取决于两分子间由氢键、疏水键、静电引力和范德华力结合力的大小取决于两分子间由氢键、疏水键、静电引力和范德华力结合力的大小取决于两分子间由氢键、疏水键、静电引力和范德华力结合力的大小取决于两分子间由氢键、疏水键、静电引力和范德华力组成的引力与电子
7、云产生的排斥力相互作用后的合力组成的引力与电子云产生的排斥力相互作用后的合力组成的引力与电子云产生的排斥力相互作用后的合力组成的引力与电子云产生的排斥力相互作用后的合力l l两分子之间有较强的结合力两分子之间有较强的结合力两分子之间有较强的结合力两分子之间有较强的结合力,但在一定条件下但在一定条件下但在一定条件下但在一定条件下,可发生解离可发生解离可发生解离可发生解离,解离后的抗原和抗解离后的抗原和抗解离后的抗原和抗解离后的抗原和抗体性质不变体性质不变体性质不变体性质不变.l l抗原与抗体的结合是分子表面的结合，这一过程受物理化学的、热力学的抗原与抗体的结合是分子表面的结合，这一过程受物理化学
8、的、热力学的抗原与抗体的结合是分子表面的结合，这一过程受物理化学的、热力学的抗原与抗体的结合是分子表面的结合，这一过程受物理化学的、热力学的法则所制约，结合的温度应在法则所制约，结合的温度应在法则所制约，结合的温度应在法则所制约，结合的温度应在0-400-400-400-40内，内，内，内，pHpHpHpH在在在在4-94-94-94-9范围内。如超过范围内。如超过范围内。如超过范围内。如超过60606060或或或或pHpHpHpH降到降到降到降到3 3 3 3以下时，则抗原抗体复合物又可重新离解。以下时，则抗原抗体复合物又可重新离解。以下时，则抗原抗体复合物又可重新离解。以下时，则抗原抗体复
9、合物又可重新离解。l l利用抗原抗体既能特异性结合，又能在一定条件下重新分离，可进行亲和层利用抗原抗体既能特异性结合，又能在一定条件下重新分离，可进行亲和层利用抗原抗体既能特异性结合，又能在一定条件下重新分离，可进行亲和层利用抗原抗体既能特异性结合，又能在一定条件下重新分离，可进行亲和层析，以制备免疫纯的抗原或抗体。析，以制备免疫纯的抗原或抗体。析，以制备免疫纯的抗原或抗体。析，以制备免疫纯的抗原或抗体。本讲稿第七页，共十二页3 3 3 3、抗原、抗原、抗原、抗原-抗体反应可分为两个阶段（反应的阶段性）抗体反应可分为两个阶段（反应的阶段性）抗体反应可分为两个阶段（反应的阶段性）抗体反应可分为两
10、个阶段（反应的阶段性）l l第一阶段为特异性结合阶段，此阶段需时短，无可见反应出现第一阶段为特异性结合阶段，此阶段需时短，无可见反应出现第一阶段为特异性结合阶段，此阶段需时短，无可见反应出现第一阶段为特异性结合阶段，此阶段需时短，无可见反应出现l l第二阶段为可见反应阶段，需时较长，出现可见现象，表现为沉淀、凝集和第二阶段为可见反应阶段，需时较长，出现可见现象，表现为沉淀、凝集和第二阶段为可见反应阶段，需时较长，出现可见现象，表现为沉淀、凝集和第二阶段为可见反应阶段，需时较长，出现可见现象，表现为沉淀、凝集和细胞溶解等。细胞溶解等。细胞溶解等。细胞溶解等。本讲稿第八页，共十二页4 4 4 4、
11、抗原与抗体结合是否呈现明显可见的反应现象，与两者的分子比例、抗原与抗体结合是否呈现明显可见的反应现象，与两者的分子比例、抗原与抗体结合是否呈现明显可见的反应现象，与两者的分子比例、抗原与抗体结合是否呈现明显可见的反应现象，与两者的分子比例密切相关（最适比例性）密切相关（最适比例性）密切相关（最适比例性）密切相关（最适比例性）l l只有在抗原与抗体呈适当比例时，结合反应才出现凝集，沉淀等可见反应只有在抗原与抗体呈适当比例时，结合反应才出现凝集，沉淀等可见反应只有在抗原与抗体呈适当比例时，结合反应才出现凝集，沉淀等可见反应只有在抗原与抗体呈适当比例时，结合反应才出现凝集，沉淀等可见反应结果，在结果
12、，在结果，在结果，在最适比例最适比例最适比例最适比例时，反应最明显。时，反应最明显。时，反应最明显。时，反应最明显。l l因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反应的现象，称为因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反应的现象，称为因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反应的现象，称为因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反应的现象，称为带现象带现象带现象带现象。l l凝集反应时，因抗原为大的颗粒性抗原，容易因抗体过多而出现凝集反应时，因抗原为大的颗粒性抗原，容易因抗体过多而出现凝集反应时，因抗原为大的颗粒性抗原，容易因抗体过多而出现凝集反应时，因抗原为大的颗粒性抗原，容易因抗体过多而出现前带现象前带现象前带现
13、象前带现象，因而需将抗体作递度稀释，而固定抗原浓度。因而需将抗体作递度稀释，而固定抗原浓度。因而需将抗体作递度稀释，而固定抗原浓度。因而需将抗体作递度稀释，而固定抗原浓度。l l沉淀反应的抗原为小分子的可溶性抗原，通常稀释抗原，以避免抗原过剩而沉淀反应的抗原为小分子的可溶性抗原，通常稀释抗原，以避免抗原过剩而沉淀反应的抗原为小分子的可溶性抗原，通常稀释抗原，以避免抗原过剩而沉淀反应的抗原为小分子的可溶性抗原，通常稀释抗原，以避免抗原过剩而出现出现出现出现后带现象后带现象后带现象后带现象。本讲稿第九页，共十二页抗原抗体反应主要影响因素抗原抗体反应主要影响因素抗原抗体反应主要影响因素抗原抗体反应主
14、要影响因素1 1 1 1、电解质、电解质、电解质、电解质u u在中性或碱性条件下，抗原抗体均带负电荷，适当浓度的电解质会使它们失在中性或碱性条件下，抗原抗体均带负电荷，适当浓度的电解质会使它们失在中性或碱性条件下，抗原抗体均带负电荷，适当浓度的电解质会使它们失在中性或碱性条件下，抗原抗体均带负电荷，适当浓度的电解质会使它们失去一部分负电荷而相互结合，出现明显的沉淀或凝集现象。去一部分负电荷而相互结合，出现明显的沉淀或凝集现象。去一部分负电荷而相互结合，出现明显的沉淀或凝集现象。去一部分负电荷而相互结合，出现明显的沉淀或凝集现象。u u通常应用通常应用通常应用通常应用0.85%0.85%0.85
15、%0.85%的氯化钠作为稀释液，以供给适当浓度的电解质。的氯化钠作为稀释液，以供给适当浓度的电解质。的氯化钠作为稀释液，以供给适当浓度的电解质。的氯化钠作为稀释液，以供给适当浓度的电解质。2 2 2 2、温度、温度、温度、温度一般常使反应在一般常使反应在一般常使反应在一般常使反应在37373737水浴中进行。水浴中进行。水浴中进行。水浴中进行。3 3 3 3、酸碱度、酸碱度、酸碱度、酸碱度抗原抗原抗原抗原-抗体反应适宜的抗体反应适宜的抗体反应适宜的抗体反应适宜的pHpHpHpH为为为为6-86-86-86-8本讲稿第十页，共十二页抗原抗原抗原抗原-抗体反应种类抗体反应种类抗体反应种类抗体反应种
16、类根据抗原的物理性状及参加反应的成分不同，分为：根据抗原的物理性状及参加反应的成分不同，分为：根据抗原的物理性状及参加反应的成分不同，分为：根据抗原的物理性状及参加反应的成分不同，分为：沉淀反应沉淀反应沉淀反应沉淀反应 可溶性抗原与相应抗体结合所发生的反应可溶性抗原与相应抗体结合所发生的反应可溶性抗原与相应抗体结合所发生的反应可溶性抗原与相应抗体结合所发生的反应凝集反应凝集反应凝集反应凝集反应 颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的反应颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的反应颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的反应颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的反应补体结合反应补体结合反应补体结合反应补体结合反应 抗原抗体结合后激活补体所致的反应抗原抗体结合后激活补体所致的反应抗原抗体结合后激活补体所致的反应抗原抗体结合后激活补体所致的反应中和反应中和反应中和反应中和反应 细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应本讲稿第十一页，共十二页 本章思考题本章思考题本章思考题本章思考题 简述抗原抗体反应的特点及影响因素简述抗原抗体反应的特点及影响因素本讲稿第十二页，共十二页