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1、专题专题5DNA和蛋白质技术和蛋白质技术考点聚集考点聚集1、DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定2、血红蛋白的提取和分离、血红蛋白的提取和分离考点一DNA的粗提取与鉴定1.1.基本原理基本原理（1 1）根据溶解度不同）根据溶解度不同DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度随浓度的变溶液中的溶解度随浓度的变化而改变，化而改变，DNADNA在在0.14mol0.14molL L的的NaClNaCl溶液中溶液中溶解度最低。溶解度最低。DNADNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。物质则可以溶于酒精。（2）对对酶、高温和洗涤剂的耐酶、高温和洗涤剂的耐受
2、性受性酶的专一性酶的专一性蛋白酶水解蛋白质而蛋白酶水解蛋白质而对对会对会对DNADNA不不产生影响。产生影响。蛋白质、蛋白质、DNADNA热稳定性不同。温度值为热稳定性不同。温度值为60608080，因为该温度值蛋白质，因为该温度值蛋白质变性变性沉淀，沉淀，而而DNADNA不会变性。不会变性。洗涤剂瓦解洗涤剂瓦解细胞膜细胞膜，对，对DNADNA没有影响。没有影响。（3）DNA鉴定原理鉴定原理在在沸水浴沸水浴条件下，条件下，DNADNA遇二苯胺呈现遇二苯胺呈现蓝色蓝色2.2.方法目的方法目的方法方法目的目的溶于溶于NaClNaCl溶液中溶液中并稀释并稀释NaClNaCl溶液物质的量浓度为溶液物质
3、的量浓度为2mol/L2mol/L时，时，DNADNA溶溶解，而部分蛋白质发生解，而部分蛋白质发生盐析盐析而生成沉淀，通过而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaClNaCl溶液的杂溶液的杂质；质；当当NaClNaCl溶液稀释至溶液稀释至0.14mol/L0.14mol/L时，时，DNADNA析出，析出，过滤可除去溶于过滤可除去溶于NaClNaCl溶液的部分蛋白质和其他溶液的部分蛋白质和其他杂质杂质加入嫩肉粉加入嫩肉粉嫩肉粉中含嫩肉粉中含木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶，水解蛋白质，水解蛋白质加入冷却酒精加入冷却酒精（95%95%）DNADNA析出，除去溶于酒精的析出，
4、除去溶于酒精的蛋白质蛋白质加入二苯胺，并加入二苯胺，并沸水浴沸水浴鉴定鉴定DNADNA，在，在沸水浴沸水浴条件下，条件下，DNADNA遇二苯胺呈现遇二苯胺呈现蓝色蓝色要点要点1、三次过滤、三次过滤 过滤过滤目的目的第一次第一次过滤用蒸馏水稀释过过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液的鸡血细胞液获得含获得含核物质核物质的滤液的滤液第二次第二次过滤溶解有过滤溶解有DNA的的2mol/L NaCl溶液溶液获得含获得含DNA的滤液的滤液第三次第三次过滤含黏稠物的过滤含黏稠物的0.14mol/L NaCl溶液溶液获得纱布上的粘获得纱布上的粘稠物，稠物，其化学本质是其化学本质是DNA2 2、两次沉淀析出、两次沉淀
5、析出依据的原理依据的原理第一次第一次DNA在氯化钠的物质的量浓度为在氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L时溶解度最低时溶解度最低第二次第二次DNA在在冷却的冷却的95%的酒精的酒精中能沉淀析出中能沉淀析出3 3、两次加蒸馏水、两次加蒸馏水加蒸馏水的目的加蒸馏水的目的第一次第一次使血细胞破裂使血细胞破裂第二次第二次降低降低NaCl浓度使浓度使DNA析出析出哺乳动物成熟的红细胞不含细胞核，也没有哺乳动物成熟的红细胞不含细胞核，也没有DNADNA，不适合做，不适合做DNADNA提取的材料，但是是提取血红蛋提取的材料，但是是提取血红蛋白的理想材料。白的理想材料。如果提取植物细胞的如果提取植物细胞的
6、DNADNA，植物细胞可以加入，植物细胞可以加入一定量的食盐和洗涤剂。一定量的食盐和洗涤剂。(食盐的作用是溶解食盐的作用是溶解DNADNA，洗涤剂的作用的溶解细胞膜）洗涤剂的作用的溶解细胞膜）1.在在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是中加入蒸馏水的作用是()A.稀释血液、冲洗样品稀释血液、冲洗样品B.使血细胞破裂、降低使血细胞破裂、降低NaCl浓度使浓度使DNA析出析出C.使血细胞破裂、增大使血细胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNAB2.DNA2.DNA析出与鉴定过程中，会出现
7、白色丝状物，用析出与鉴定过程中，会出现白色丝状物，用玻璃棒搅拌时为什么要沿一个方向轻轻搅拌玻璃棒搅拌时为什么要沿一个方向轻轻搅拌 A A、为了省力、为了省力 B B、加快蛋白质的析出、加快蛋白质的析出 C C、为了加大、为了加大DNADNA的溶解度的溶解度 D D、防止、防止DNADNA结构被破坏结构被破坏3.3.在在DNADNA析出与鉴定过程中加入酒精的目的是析出与鉴定过程中加入酒精的目的是 A A、溶解、溶解DNA DNA B B、除去、除去DNADNA中所有杂质中所有杂质 C C、析出、析出DNA DNA D D、稀释溶液降低浓度、稀释溶液降低浓度 DC4.4.关于关于DNADNA粗提取
8、与鉴定实验的有关说法正确的粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是是A A充分溶解充分溶解DNADNA的盐溶液是的盐溶液是0.14mol/L0.14mol/L的的NaClNaCl溶液溶液B B实验中提取较纯净的实验中提取较纯净的DNADNA利用了利用了DNADNA不溶于酒精的不溶于酒精的特点特点C C对最后提取出对最后提取出DNADNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热直接加热D D实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同 B5.5.关于关于DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度，下面的叙述哪溶液中的溶解度，下面的叙述
9、哪一个是正确的（一个是正确的（）A A随着随着NaClNaCl溶液浓度的增大，溶液浓度的增大，DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶溶液中的溶解度也增大解度也增大B B随着随着NaClNaCl溶液浓度的减小，溶液浓度的减小，DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶溶液中的溶解度也减小解度也减小C DNAC DNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度与溶液中的溶解度与NaClNaCl溶液的浓度无溶液的浓度无关关D D当当NaClNaCl溶液的浓度为溶液的浓度为0.14M0.14M时，时，DNADNA的溶解度最低的溶解度最低 D6.6.下列关于下列关于DNADNA粗提取与鉴定的说法正确的是粗提
10、取与鉴定的说法正确的是A A洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度溶液中的溶解度B B在探究洗涤剂对植物细胞在探究洗涤剂对植物细胞DNADNA提取的影响实验中，提取的影响实验中，需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞C C常温下，常温下，DNADNA遇二苯胺被染成蓝色遇二苯胺被染成蓝色D D将滤液放在将滤液放在60607575的恒温水浴箱中保温的恒温水浴箱中保温10101515分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用了分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用了DNADNA和蛋白质对高温耐受性的不同和蛋白质
11、对高温耐受性的不同D7.7.下列有关下列有关“DNA“DNA粗提取与鉴定粗提取与鉴定”实验原理的叙实验原理的叙述正确的是述正确的是 （）A ADNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度，随溶液中的溶解度，随NaClNaCl溶液浓度溶液浓度的降低而减小的降低而减小B B利用利用DNADNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的于酒精的物质而得到较纯的DNADNAC CDNADNA是大分子有机物，不溶于水而溶于所有有是大分子有机物，不溶于水而溶于所有有机溶剂机溶剂D D在沸水中，在沸水中，DNADNA遇二苯胺会出现紫色反应遇二苯胺会出现紫色反应
12、 B 例例1 1（20102010潮州模拟）潮州模拟）DNADNA在氯化钠溶液中溶解度有二重在氯化钠溶液中溶解度有二重性，随着氯化钠溶液浓度的变化而变化。性，随着氯化钠溶液浓度的变化而变化。（1 1）请在下列氯化钠溶液中选出能使）请在下列氯化钠溶液中选出能使DNADNA析出最彻底的一种析出最彻底的一种 和溶解度最高的一种和溶解度最高的一种 。A.0.14mol/LA.0.14mol/LB.2mol/LB.2mol/LC.0.15mol/LC.0.15mol/LD.0.3mol/LD.0.3mol/L（2 2）DNADNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质却可以溶于不溶于酒精溶液，但细胞中的某些
13、物质却可以溶于酒精溶液，利用这一原理可以酒精溶液，利用这一原理可以 ，可以推测溶于，可以推测溶于酒精中的物质可能有酒精中的物质可能有 。（3 3）利用）利用DNADNA与与 变蓝色的特性，将该物质作为变蓝色的特性，将该物质作为鉴定鉴定 的试剂。其实验过程要点是向放有的试剂。其实验过程要点是向放有 的试管中加入的试管中加入4mL4mL的的 。混合均匀后，将试管。混合均匀后，将试管置于置于 5min5min，待试管，待试管 ，观察试管中溶液颜色的变化，这个实验也，观察试管中溶液颜色的变化，这个实验也说明说明DNADNA耐耐 温。温。答案：答案：（1 1）A AB B（2 2）除去杂质某些脂类、蛋白
14、质、糖类）除去杂质某些脂类、蛋白质、糖类或其他大分子物质（或其他大分子物质（3 3）二苯胺）二苯胺DNADNADNADNA二苯胺试剂沸二苯胺试剂沸水中水浴加热冷却后高水中水浴加热冷却后高2.在DNA粗提取与鉴定实验中，将获得的含有DNA的黏稠物(含较多物质)分别处理如下：操作过程黏稠物滤液放入2mol/L的氯化钠溶液中，搅拌后过滤放入0.14mol/L的氯化钠溶液中，搅拌后过滤放入冷却的95%的酒精溶液中，搅拌后过滤其中杂质所处的位置在（）A.B.C.D.C考点二血红蛋白的提取和分离1.1.凝胶色谱法凝胶色谱法凝胶色谱法是根据凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小相对分子质量的大小分离蛋白质的方法
15、之一。分离蛋白质的方法之一。所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的，小球体内部有许多贯穿的通道，当一个由多糖类化合物构成的，小球体内部有许多贯穿的通道，当一个含有各种分子的样品溶液缓慢流经时，含有各种分子的样品溶液缓慢流经时，相对分子质量较大相对分子质量较大的蛋白的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路质分子不能进入凝胶颗粒内部，只能分布在颗粒之间，通过的路程程较短较短，移动速度，移动速度较快较快；相对分子质量较小相对分子质量较小的蛋白质分子比较容的蛋白质分子比较容易进入凝胶内的
16、通道，通过的路程易进入凝胶内的通道，通过的路程较长较长，移动速度，移动速度较慢较慢。因此，。因此，样品中样品中相对分子质量较大相对分子质量较大的蛋白质先流出，的蛋白质先流出，相对分子质量较小相对分子质量较小的的分子后流出。分子后流出。2.2.电泳电泳电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各电泳技术就是在电场的作用下，利用待分离样品中各种分子种分子带电性质带电性质以及以及分子本身大小分子本身大小、形状形状等性质的差异，等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行使带电分子产生不同的迁移速度，从而达到对样品进行分离、鉴定或提纯的目的。分离、鉴定或提纯的目的。下列有关提取和分
17、离血红蛋白的叙述中，不正确的（）下列有关提取和分离血红蛋白的叙述中，不正确的（）A.A.样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液B.B.通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质，此通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取为样品的粗提取C.C.可以通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除可以通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即样品的纯化去，即样品的纯化D.D.可以通过可以通过SDSSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度B解析：选B。样品处理是洗涤红细胞，使血红蛋白释放出来，通过离心法得到血红蛋白溶液。透析袋能使小分子自由进出，则大分子留在袋内，这样可以去除样品中相对分子质量较小的杂质。当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，这些蛋白质分子就可以分离开。判断纯化的蛋白质是否达到要求，通常用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法对蛋白质的纯度进行鉴定。让梦想一起飞让梦想一起飞