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1、4.2 紫外紫外-可见光谱可见光谱与紫外与紫外-可见光谱仪可见光谱仪内容提要内容提要一、紫外可见光谱概述一、紫外可见光谱概述二、各类化合物的紫外吸收二、各类化合物的紫外吸收三、紫外谱图的解析三、紫外谱图的解析四、紫外光谱应用举例四、紫外光谱应用举例五、五、紫外及可见分光光度计紫外及可见分光光度计六、六、紫外可见分光光度法的应用紫外可见分光光度法的应用1 1。紫外紫外-可见光区的划分可见光区的划分可见光部分：可见光部分：360-760nm360-760nm近紫外：近紫外：200-360nm200-360nm远紫外：远紫外：10-200nm10-200nm 由于远紫外的吸收测量必须在真空条件下进行
2、，故使用由于远紫外的吸收测量必须在真空条件下进行，故使用受到限制；通常紫外受到限制；通常紫外-可见光区域指的是可见光区域指的是200-800nm200-800nm的范围。的范围。一、紫外可见光谱概述一、紫外可见光谱概述赤色赤色橙色橙色红色红色绿色绿色青色青色蓝色蓝色紫色紫色物质颜色物质颜色吸收光吸收光颜色颜色波长波长/nm黄绿黄绿紫紫400-450黄黄蓝蓝450-480橙橙绿蓝绿蓝480-490红红蓝绿蓝绿490-500紫红紫红绿绿500-560紫紫黄绿黄绿560-580蓝蓝黄黄580-600绿蓝绿蓝橙橙600-650蓝绿蓝绿红红650-7502 2。分子的紫外。分子的紫外可见吸收光谱是基于物
3、质分子吸收可见吸收光谱是基于物质分子吸收紫外辐射或可见光，其外层电子跃迁而成，又称分子紫外辐射或可见光，其外层电子跃迁而成，又称分子的电子跃迁光谱。的电子跃迁光谱。与有机物分子紫外与有机物分子紫外-可见吸收光谱有关的电子是：形成可见吸收光谱有关的电子是：形成单键的单键的 电子，形成双键的电子，形成双键的 电子以及未共享的或称为非键电子以及未共享的或称为非键的的n n电子。电子。3。各种电子的能级高低次序。各种电子的能级高低次序 *n n 跃迁跃迁类型类型吸收吸收带带特征特征 maxmax*远紫远紫外区外区远紫外区测定远紫外区测定n n*端吸端吸收收紫外区短波长端至远紫外区的紫外区短波长端至远紫
4、外区的强吸收强吸收*E E1 1芳香环的双键吸收芳香环的双键吸收200200K K(E(E2 2)共轭多稀、共轭多稀、-C=C-C=O-C=C-C=O-等的吸等的吸收收1000010000B B芳香环、芳香杂环合物的吸收，芳香环、芳香杂环合物的吸收，具有精细结构具有精细结构100100n n*R R同时存在杂原子和双键同时存在杂原子和双键 电子电子100-N(CH-N(CH3 3)2 2-NH-NH2 2-OH-OCH-OH-OCH3 3-NHCOCH-NHCOCH3 3-OCOCH-OCOCH3 3-CHCH2 2CHCH2 2COOH-H COOH-H 取代苯取代苯K-K-吸收带吸收带B-
5、B-吸收带吸收带 maxmax(nm(nm)maxmax maxmax(nm(nm)maxmaxC C6 6H H5 5-H-H20420474007400254254204204C C6 6H H5 5-CH-CH3 320720770007000261261225225C C6 6H H5 5-OH-OH2112116200620027027014501450C C6 6H H5 5-NH-NH2 22302308600860028028014301430取代苯取代苯K-K-吸收带吸收带B-B-吸收带吸收带 maxmax(nm(nm)maxmax maxmax(nm(nm)maxmaxC
6、C6 6H H5 5-H-H20420474007400254254204204C C6 6H H5 5-NO-NO2 2268268C C6 6H H5 5-COCH-COCH3 3278.5278.5C C6 6H H5 5-N(CH-N(CH3 3)2 229829821002100 吸电子基使苯环的吸电子基使苯环的B B带往长波长方向移动，吸电子作用带往长波长方向移动，吸电子作用越强，移动越小；吸电子基的作用强度顺序是：越强，移动越小；吸电子基的作用强度顺序是：-N-N+(CH(CH3 3)3 3-NO-NO2 2-SO-SO3 3H-COH-COOH-COH-COO-COOH-COC
7、H-COOH-COCH3 3-ClCl-Br-I Br-I f f、杂芳环化合物、杂芳环化合物 五员杂芳环按照呋喃、吡咯、噻吩的顺序紫外吸收波长五员杂芳环按照呋喃、吡咯、噻吩的顺序紫外吸收波长逐渐增大。由于硫的电子较氮、氧能更好地和二烯的逐渐增大。由于硫的电子较氮、氧能更好地和二烯的电电子共轭。子共轭。g.溶剂的影响溶剂的影响 溶剂极性增大，导致：溶剂极性增大，导致：*跃迁，能量跃迁，能量减少，所以，吸收带减少，所以，吸收带红移红移,n n*跃迁，能量跃迁，能量增大，所以，吸收带增大，所以，吸收带蓝移蓝移。如：如：N-N-亚硝基二甲胺在不同溶剂中的紫外吸收光谱图亚硝基二甲胺在不同溶剂中的紫外吸
8、收光谱图 溶剂极性增溶剂极性增大，吸收峰大，吸收峰呈规律性蓝呈规律性蓝移移 化合物在化合物在220220800nm800nm内内无紫外吸收无紫外吸收，说，说明该化合物是明该化合物是脂肪烃脂肪烃或它们的简单或它们的简单衍生物衍生物(氯化物、醇、醚、羧酸等氯化物、醇、醚、羧酸等)，甚至可能是非，甚至可能是非共轭的烯。共轭的烯。220220250nm250nm内显示内显示强的吸收强的吸收(近近1000010000或更大或更大)，这表明，这表明K K带带的存在。即存在共扼的的存在。即存在共扼的两个不饱和键两个不饱和键(共轭二烯或共轭二烯或，不饱和不饱和醛、酮醛、酮)。3 3。紫外谱图提供的结构信息小结
9、。紫外谱图提供的结构信息小结 250250290nm290nm内显示内显示中等强度吸收中等强度吸收，且常显，且常显示不同程度的示不同程度的精细结构精细结构，说明有，说明有苯环苯环或某些或某些杂杂芳环芳环的存在。的存在。250250350nm350nm内显示内显示中、低强度的吸收中、低强度的吸收，说，说明明羰基羰基或或共轭羰基共轭羰基的存在。的存在。300nm300nm以上的以上的高强度高强度吸收，说明该化合物具吸收，说明该化合物具有较大的有较大的共轭体系共轭体系。若高强度吸收具有明显的。若高强度吸收具有明显的精细结构精细结构。说明。说明稠环芳烃稠环芳烃、稠环杂芳烃或其衍、稠环杂芳烃或其衍生物的
10、存在。生物的存在。两者具有相似的紫外两者具有相似的紫外吸收峰吸收峰,是因为，两分是因为，两分子中有相同的子中有相同的O=C-C=CO=C-C=C共轭结构共轭结构。例例1 1：胆甾酮（：胆甾酮（a a）与异亚丙基丙酮（）与异亚丙基丙酮（b b）的紫外光谱图）的紫外光谱图 *电子跃迁电子跃迁n n*电子跃迁电子跃迁 例例2 2：烷基取代硝基苯烷基取代硝基苯的紫外光谱图的紫外光谱图 与硝基苯相比，与硝基苯相比，2,4,6-2,4,6-三丁基硝基苯在三丁基硝基苯在255nm255nm附近附近的吸收峰已经消失；可以的吸收峰已经消失；可以清楚地看到清楚地看到空间阻碍空间阻碍对分对分子吸收光谱的影响。子吸收
11、光谱的影响。例例3:3:偶氮苯顺反异构体的紫外吸收谱图偶氮苯顺反异构体的紫外吸收谱图 顺式偶氮苯顺式偶氮苯反式偶氮苯反式偶氮苯 反式偶氮苯的摩尔吸光反式偶氮苯的摩尔吸光系数则远远大于顺式，且系数则远远大于顺式，且吸收峰位红移。因为，反吸收峰位红移。因为，反式偶氮苯的空间位阻小。式偶氮苯的空间位阻小。三、紫外光谱的定析方法三、紫外光谱的定析方法 1.1.比较未知物比较未知物与已知标准物质与已知标准物质的紫外光的紫外光谱图，若两者的谱图相同，则可认为待测样谱图，若两者的谱图相同，则可认为待测样品与已知物质具有相同的生色团。品与已知物质具有相同的生色团。2.2.紫外吸收光谱相同，两种化合物有时紫外吸
12、收光谱相同，两种化合物有时不一定相同，所以在不一定相同，所以在比较比较maxmax的同时，还的同时，还要比较它们的要比较它们的值值。3.3.紫外可见吸收光谱可用于检出紫外可见吸收光谱可用于检出某些某些官能团官能团。1.Lamber-Beer定律定律吸收光谱法基本定律吸收光谱法基本定律四、紫外光谱的定量分析四、紫外光谱的定量分析它描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓它描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系。度的关系。假设一束平行单色光通过一个均匀的、非散射的吸光假设一束平行单色光通过一个均匀的、非散射的吸光物体，取物体中一极薄层，物体，取物体中一极薄层，lLamberLam
13、ber-Beer-Beer定律的适用条件（前提）定律的适用条件（前提）l入射光为单色光，均匀非散射的稀溶液入射光为单色光，均匀非散射的稀溶液l该定律适用于均匀非散射固体、液体和气体样品该定律适用于均匀非散射固体、液体和气体样品l在在同同一一波波长长下下,各各组组分分吸吸光光度度具具有有加加和和性性 A=AA=A1 1+A+A2 2+A+An n2 2吸光度测量的条件选择：吸光度测量的条件选择：1 1）测量波长的选择）测量波长的选择:maxmaxA Amaxmax,测定灵敏度高测定灵敏度高选选选选A=0.15-1.00A=0.15-1.00A=0.15-1.00A=0.15-1.002 2）吸光
14、度读数范围的选择：）吸光度读数范围的选择：3 3）参比溶液）参比溶液(空白溶液空白溶液)的选择：的选择：解两方程即可求出组份解两方程即可求出组份A A和和B B的浓度。的浓度。也可以利用双波长分光光度法或导数分光光度法等新方也可以利用双波长分光光度法或导数分光光度法等新方法测定。法测定。3 3定量分析的类型定量分析的类型（1 1）单组分分析：标准曲线法或标准比较法）单组分分析：标准曲线法或标准比较法（2 2）多组分的分析：）多组分的分析：当各组分的吸收光谱不重叠时，如单组分测定。当各组分的吸收光谱不重叠时，如单组分测定。若两组分的吸收光谱互相重叠时，可以根据吸光度的若两组分的吸收光谱互相重叠时
15、，可以根据吸光度的加和性，在多个波长下测定吸光度并利用解联立方程方加和性，在多个波长下测定吸光度并利用解联立方程方法求解。即法求解。即（3 3）其它分光光度分析法）其它分光光度分析法双波长分光光度法双波长分光光度法a a双波长等吸收法：当光谱重叠、但两组份的两双波长等吸收法：当光谱重叠、但两组份的两吸收峰在测定波长范围内重叠时，在其光谱中选择吸收峰在测定波长范围内重叠时，在其光谱中选择两波长，在选定的波长处，干扰组分有相同的吸收；两波长，在选定的波长处，干扰组分有相同的吸收；被测组分与干扰组分的吸收有足够大的差别。则两被测组分与干扰组分的吸收有足够大的差别。则两波长处吸光度的差值与被测组份的浓
16、度成正比。波长处吸光度的差值与被测组份的浓度成正比。因为所以可见，在双波长分光光度法中吸光度可见，在双波长分光光度法中吸光度的差值与干扰组份无关。的差值与干扰组份无关。b b比例系数双波长法：当光谱重叠、但干扰组份的吸收比例系数双波长法：当光谱重叠、但干扰组份的吸收峰不在测定波长范围内的两组份共存时，在其光谱中选峰不在测定波长范围内的两组份共存时，在其光谱中选择两波长，在选定的波长处，干扰组分的吸收与测定波择两波长，在选定的波长处，干扰组分的吸收与测定波长处的吸收存在一定比例，长处的吸收存在一定比例，即即 时，时，；被测组分与干扰组；被测组分与干扰组分的吸收有足够大的差别。则两波长处吸光度的差
17、值与分的吸收有足够大的差别。则两波长处吸光度的差值与被测组份的浓度成正比。被测组份的浓度成正比。导数分光光度法导数分光光度法导数分光光度法是利用自动电路对光谱进行求导，导数分光光度法是利用自动电路对光谱进行求导，其导数信号与浓度成正比，即其导数信号与浓度成正比，即 奇数阶导数光谱中的奇数阶导数光谱中的零，偶数阶导数光谱中零，偶数阶导数光谱中的极值（极大或极小），的极值（极大或极小），对应于常规吸收曲线上对应于常规吸收曲线上的最大值。的最大值。随着导数阶数增加，吸随着导数阶数增加，吸收峰的尖锐程度增大，收峰的尖锐程度增大，带宽减小带宽减小，因此有利于因此有利于重叠峰的分离、有利于重叠峰的分离、有
18、利于肩峰的测定、并能准确肩峰的测定、并能准确地确定宽吸收带上的最地确定宽吸收带上的最大吸收波长。大吸收波长。3.3.偏离偏离BeerBeer定律的因素定律的因素l偏离偏离BeerBeer定律的主要因定律的主要因素表现为以下两个方面素表现为以下两个方面光学因素光学因素化学因素化学因素透光率的测量误差透光率的测量误差五、五、紫外及可见分光光度计紫外及可见分光光度计UV-1201UV-1201紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计 1.整机结构：由光源、色散系统（单色器）、样品整机结构：由光源、色散系统（单色器）、样品室、检测系统、信号读出与显示系统等五部分组成。室、检测系统、信号读出与显示系统等五
19、部分组成。钨灯或卤钨灯钨灯或卤钨灯可见光源可见光源 350-1000nm350-1000nm氢灯或氘灯氢灯或氘灯紫外光源紫外光源 200-360nm200-360nmn光源：光源：钨灯钨灯氘灯氘灯n吸收池：吸收池：玻璃玻璃-能吸收能吸收UVUV光，仅光，仅适用于可见光区适用于可见光区石英石英-不能吸收紫外光，不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区适用于紫外和可见光区要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）n色散系统色散系统组成组成:由由单色器或滤色片单色器或滤色片组成。组成。主要目的主要目的:从复合光中选择或分离出从复合光中选择或分离出某一特定波长某一特定波长
20、的光。的光。滤色片：一种简单而廉价的波长选择器。通常有滤色片：一种简单而廉价的波长选择器。通常有中性中性滤滤光片、光片、截止截止滤光片、滤光片、带通带通滤光片以及滤光片以及校正校正滤光片等。滤光片等。棱镜棱镜对不同波长的光折射率不同对不同波长的光折射率不同色散元件色散元件 分出的光波长不等距分出的光波长不等距 光栅光栅衍射和干涉衍射和干涉 分出的光波长等距分出的光波长等距单色器的组成：单色器的组成：入射狭缝入射狭缝、准直装置准直装置(透镜或凹面反射镜透镜或凹面反射镜)、色散元件色散元件(棱镜或光栅棱镜或光栅)、聚焦元件聚焦元件以及以及出射狭缝出射狭缝等部等部分组成。分组成。分光过程：分光过程：
21、入射狭缝用于限制杂散光进入单色器，入射狭缝用于限制杂散光进入单色器，准直镜将入射光束变为平行光束后进入棱镜。棱镜将准直镜将入射光束变为平行光束后进入棱镜。棱镜将复合光分解成单色光，然后通过聚焦镜将出自色散元复合光分解成单色光，然后通过聚焦镜将出自色散元件的同波长的平行光聚焦于出口狭缝。通过移动出口件的同波长的平行光聚焦于出口狭缝。通过移动出口狭缝的位置就可以将不同波长的光选择性射出。狭缝的位置就可以将不同波长的光选择性射出。棱镜单色器的结构如下图所示棱镜单色器的结构如下图所示光栅单色器的结构如下图所示光栅单色器的结构如下图所示 设设S S为位于透镜为位于透镜L L1 1物方物方焦面上的入射狭缝
22、，焦面上的入射狭缝，G G为光栅，光栅常量为为光栅，光栅常量为d d，自自L L1 1射出的平行光垂射出的平行光垂直照射在光栅直照射在光栅G G上；透上；透镜镜L L2 2将与光栅法线成将与光栅法线成 角的衍射光会聚于出口角的衍射光会聚于出口狭缝所在的面上，则产狭缝所在的面上，则产生衍射亮条纹的条件为：生衍射亮条纹的条件为：调整调整 角的大小，就可角的大小，就可以将不同波长的光选择以将不同波长的光选择性射出。性射出。n 检测器：将光信号转变为电信号的装置检测器：将光信号转变为电信号的装置光电池光电池光电管（红敏和蓝敏）光电管（红敏和蓝敏）光电倍增管光电倍增管(PMT)(PMT)二极管阵列检测器
23、二极管阵列检测器检测器检测器 内部抽真空的玻璃内部抽真空的玻璃管内配置有光电阴极管内配置有光电阴极(K)(K)和阳极和阳极(A(A，位于两，位于两者之间的是若干个倍增者之间的是若干个倍增极极(1-3(1-3个个)。光电阴极光电阴极和倍增极上涂有容易发和倍增极上涂有容易发射电子的光敏物质射电子的光敏物质(如如SbSb-Cs-Cs或或Ag-O-CsAg-O-Cs等等)，在在K K和和A A之间施加之间施加1000V1000V的直流电压。的直流电压。PMTPMT的结构与原理的结构与原理 当光信号照射在当光信号照射在K K上时，由于光上时，由于光电效应而产生电子，并被电场加电效应而产生电子，并被电场加
24、速撞击倍增极速撞击倍增极(1-3)(1-3)，产生出，产生出2-52-5倍的次级电子，依此类推，最后倍的次级电子，依此类推，最后在在A A上收集到的电子数将是上收集到的电子数将是K K发出发出的电子数的的电子数的10105 5一一10108 8倍光电流。倍光电流。单光束型单光束型紫外可见光谱仪：紫外可见光谱仪：这种光谱仪的单一分析这种光谱仪的单一分析光束从单色器分离而得，交互通过参比溶液和样品溶光束从单色器分离而得，交互通过参比溶液和样品溶液来进行吸光度的比较并测定。液来进行吸光度的比较并测定。2 2、紫外可见光谱仪的类型、紫外可见光谱仪的类型根据仪器的光路，根据仪器的光路，分为分为单光束和双
25、光束单光束和双光束型两种类型。型两种类型。这种光谱仪的最大优点是结构简单，价廉耐用，维修这种光谱仪的最大优点是结构简单，价廉耐用，维修容易，适用于常规分析。容易，适用于常规分析。2.2.双光束光谱仪双光束光谱仪 从光源出发的紫外和可见光经聚焦后通过狭缝进人单色从光源出发的紫外和可见光经聚焦后通过狭缝进人单色器中。从复合光中经色散得到的单色光经准直和聚焦后在器中。从复合光中经色散得到的单色光经准直和聚焦后在分光器上分为两束，并分别通过样品池和参比池。经样品分光器上分为两束，并分别通过样品池和参比池。经样品池紫外吸收后的光强度和参比池光强度的差异由检测器检池紫外吸收后的光强度和参比池光强度的差异由
26、检测器检出、放大后以吸光度一波长或透射率一波长的形式记录下出、放大后以吸光度一波长或透射率一波长的形式记录下来，就可以获得样品的来，就可以获得样品的UV-VisUV-Vis的吸收光谱。的吸收光谱。3、紫外可见光谱仪的操作、紫外可见光谱仪的操作A A、先将仪器预热至少、先将仪器预热至少1010分钟，启动紫外可见分光光分钟，启动紫外可见分光光度计应用程序，软件将自动进入到自检画面进行光谱度计应用程序，软件将自动进入到自检画面进行光谱仪的校正。仪的校正。波长校正波长校正可用随机配置的镨铷可用随机配置的镨铷(Pr-(Pr-NdNd)玻璃或玻璃或鈥鈥（huo）(Ho)(Ho)玻璃所具有的特征吸收峰来校正
27、。玻璃所具有的特征吸收峰来校正。吸光度的校正吸光度的校正可通过若干物质如可通过若干物质如CuS0CuS04 4、K K2 2 Cr0Cr04 4的标准的标准溶液来进行。溶液来进行。校正前按仪器厂家要求的浓度配制好标准物，在一定校正前按仪器厂家要求的浓度配制好标准物，在一定温度温度(25(25o oC)C)下利用不同波长测量标准吸光度值，再与下利用不同波长测量标准吸光度值，再与仪器厂家提供的吸光度校正表对照调整即可。仪器厂家提供的吸光度校正表对照调整即可。B B、进行光谱扫描、进行光谱扫描 对参照物和待测物进行光谱扫描，如实地显示样品对参照物和待测物进行光谱扫描，如实地显示样品的全波长图谱并保存
28、起来以用于分析。的全波长图谱并保存起来以用于分析。4 4、进行紫外可见光谱检测时的分析条件的选择优化、进行紫外可见光谱检测时的分析条件的选择优化a.a.样品浓度样品浓度 通常样品浓度小于通常样品浓度小于0.Olmol/L0.Olmol/L的稀溶液才遵从朗伯比尔的稀溶液才遵从朗伯比尔定律，所以样品浓度过大或过小时会影响测定结果。通常定律，所以样品浓度过大或过小时会影响测定结果。通常应调节样品浓度使之在合适的吸光度范围应调节样品浓度使之在合适的吸光度范围(0.2-0.8)(0.2-0.8)之内。之内。b.b.测量波长与狭缝宽度测量波长与狭缝宽度 应选择最强吸收带的最大吸收波长应选择最强吸收带的最大
29、吸收波长maxmax为测量波长以得为测量波长以得到最大的测量灵敏度。另外，狭缝宽度大约为样品吸收峰到最大的测量灵敏度。另外，狭缝宽度大约为样品吸收峰半宽度的十分之一左右才能兼顾灵敏度和光强度。半宽度的十分之一左右才能兼顾灵敏度和光强度。C C、溶剂的选择、溶剂的选择 考虑到紫外可见光谱仪测定中存在的溶剂效应问题，考虑到紫外可见光谱仪测定中存在的溶剂效应问题，制备分析用样品的溶液时必须考虑选择合适的溶剂。制备分析用样品的溶液时必须考虑选择合适的溶剂。对溶剂的基本要求是在测定波长范围内无吸收、透明对溶剂的基本要求是在测定波长范围内无吸收、透明且化学惰性且化学惰性(不与样品发生化学反应不与样品发生化
30、学反应)，同时也应考虑，同时也应考虑挥发性小、毒性低、不易燃等。另外，样品应在所选挥发性小、毒性低、不易燃等。另外，样品应在所选溶剂中有足够的溶解度，浓度一般宜在溶剂中有足够的溶解度，浓度一般宜在1010-5-5-10-10-2-2mol/Lmol/L范围内。下表是若干常用有机溶剂及其吸收特性，可范围内。下表是若干常用有机溶剂及其吸收特性，可供参考。供参考。d d、分析方法、分析方法 分析条件优化之后，应根据定性或定量分析的目的分析条件优化之后，应根据定性或定量分析的目的进行分析方法的合理选择。进行分析方法的合理选择。定性分析定性分析是根据样品物质的摩尔吸收系数是根据样品物质的摩尔吸收系数、峰
31、形等、峰形等测定参数与已知的数据进行比对，以推断出样品物质的测定参数与已知的数据进行比对，以推断出样品物质的结构、纯度方面的信息。结构、纯度方面的信息。定量分析定量分析的基本依据就是的基本依据就是Lambert-BeerLambert-Beer定律，即在定律，即在特定波长处被测样品的吸光度与其浓度成线性关系。特定波长处被测样品的吸光度与其浓度成线性关系。定量分析方法定量分析方法(1)(1)标准曲线法标准曲线法:预预先配制一系列不同浓先配制一系列不同浓度的标准溶液，以不度的标准溶液，以不含待测组分的空白溶含待测组分的空白溶液作参比。测定标准液作参比。测定标准溶液的吸光度，描绘溶液的吸光度，描绘出
32、吸光度出吸光度-浓度的标浓度的标准曲线。根据在同等准曲线。根据在同等条件下测定的样品的条件下测定的样品的吸光度，即可从标准吸光度，即可从标准曲线上求得未知样品曲线上求得未知样品的浓度。的浓度。举例：芦丁含量测定，取样品举例：芦丁含量测定，取样品3mg3mg稀释至稀释至25mL25mL。0.710mg/25mL0.710mg/25mL(2)(2)标准加入法：它适用于标准溶液组成与未知样品组分标准加入法：它适用于标准溶液组成与未知样品组分不尽一致的情况。不尽一致的情况。其方法是其方法是:取若干份同等体积的未知样液，除第一份外，取若干份同等体积的未知样液，除第一份外，其余的依次递增加入不同量的少量标
33、准溶液，再测定各样其余的依次递增加入不同量的少量标准溶液，再测定各样液的吸光度。把测得的吸光度对被测组分的增量作曲线，液的吸光度。把测得的吸光度对被测组分的增量作曲线，可得如图所示的工作曲线。可得如图所示的工作曲线。图中的图中的0 0点显示，未知样点显示，未知样液中虽然未加入标准溶液，但液中虽然未加入标准溶液，但其本身含有一定量的待测组分，其本身含有一定量的待测组分，使其不经过原点。曲线外推至使其不经过原点。曲线外推至横轴，在横轴上的截距横轴，在横轴上的截距(x)x)所对应的增量值即为未知试样所对应的增量值即为未知试样中待测组分的含量。中待测组分的含量。此法既保持了标准曲线法的优点，又可克服其
34、他成分对此法既保持了标准曲线法的优点，又可克服其他成分对测定的干扰。但使用的前提是原标准曲线必须通过原点。测定的干扰。但使用的前提是原标准曲线必须通过原点。习题习题1.1.试说明有化合物的紫试说明有化合物的紫外吸收光谱的电子跃外吸收光谱的电子跃迁有哪几种类型以及迁有哪几种类型以及吸收带的类型。吸收带的类型。2.2.根据根据woodwar-fieserwoodwar-fieser规则计算图中四种规则计算图中四种，-不饱和酮在乙醇中不饱和酮在乙醇中的的 maxmax。3.3.某化合物初步推断其可能的结构如下图中的某化合物初步推断其可能的结构如下图中的（a a）和）和 （b b），在乙醇中测得），在乙醇中测得 maxmax=352nm,=352nm,试根据试根据紫外光谱推断为那种结构，为什么？紫外光谱推断为那种结构，为什么？