《《动物实验操作》PPT课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《《动物实验操作》PPT课件.ppt（67页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、动物实验基本技能大鼠生物学特性大鼠生物学特性l l大大大大鼠鼠鼠鼠汗汗汗汗腺腺腺腺极极极极不不不不发发发发达达达达，仅仅仅仅在在在在爪爪爪爪垫垫垫垫上上上上有有有有汗汗汗汗腺腺腺腺，尾尾尾尾巴巴巴巴是是是是散散散散热热热热器官。器官。器官。器官。l l大鼠无呕吐反应，对许多药物易产生耐药性。大鼠无呕吐反应，对许多药物易产生耐药性。大鼠无呕吐反应，对许多药物易产生耐药性。大鼠无呕吐反应，对许多药物易产生耐药性。l l对营养缺乏敏感，可发生典型的缺乏症状。对营养缺乏敏感，可发生典型的缺乏症状。对营养缺乏敏感，可发生典型的缺乏症状。对营养缺乏敏感，可发生典型的缺乏症状。l l大鼠无胆囊，胆汁通过总胆
2、管进入十二指肠。大鼠无胆囊，胆汁通过总胆管进入十二指肠。大鼠无胆囊，胆汁通过总胆管进入十二指肠。大鼠无胆囊，胆汁通过总胆管进入十二指肠。l l大鼠神经系统与人类相似。大鼠神经系统与人类相似。大鼠神经系统与人类相似。大鼠神经系统与人类相似。动物实验基本技能n n编号与标记方法n n大鼠的抓取n n大鼠麻醉n n供试品给予方法n n采集体液n n大鼠的采血一、编号与标记方法n n染色法染色法染色法染色法n n穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法n n标牌法标牌法标牌法标牌法n n烙印法烙印法烙印法烙印法n n剪毛法剪毛法剪毛法剪毛法n n在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过
3、l0l0l0l0只或一个实验不超过只或一个实验不超过只或一个实验不超过只或一个实验不超过40404040只只只只的情况下适用的情况下适用的情况下适用的情况下适用n n实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠n n染色剂：染色剂：染色剂：染色剂：3-53-53-53-5苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色染色法：单色涂染法n n涂染原则：从左到右、从上到下涂染原则：从左到右、从上到下涂染原则：从左到右、从上到下涂染原则：从左到右、从上到下n n左前肢为左前肢为左前肢为左前肢为1 1 1 1号、左侧腹部号、
4、左侧腹部号、左侧腹部号、左侧腹部2 2 2 2号、左号、左号、左号、左后肢后肢后肢后肢3 3 3 3号，号，号，号，n n两耳后部两耳后部两耳后部两耳后部4 4 4 4号、背部号、背部号、背部号、背部5 5 5 5号、后肢背号、后肢背号、后肢背号、后肢背部部部部6 6 6 6号，号，号，号，n n右前肢右前肢右前肢右前肢7 7 7 7号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部 8 8 8 8号、右号、右号、右号、右后肢后肢后肢后肢9 9 9 9号号号号n n头部为头部为头部为头部为40404040号、尾巴根为号、尾巴根为号、尾巴根为号、尾巴根为10101010号。号。号。号。方法步骤n
5、n在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过100100100100只的情况下适用只的情况下适用只的情况下适用只的情况下适用n n实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠n n常常常常用用用用染染染染色色色色剂剂剂剂：3-53-53-53-5苦苦苦苦味味味味酸酸酸酸溶溶溶溶液液液液，可可可可染染染染成成成成黄黄黄黄色色色色，作为作为作为作为“个个个个”位数位数位数位数n n常常常常用用用用染染染染色色色色剂剂剂剂：0.5%0.5%0.5%0.5%中中中中性性性性红红红红或或或或品品品品红红红红溶溶溶溶液液液液，可可可可染染染染成成成
6、成红色，作为红色，作为红色，作为红色，作为“十十十十”位数位数位数位数染色法：双色涂染法n n用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记 n n用苦味酸用苦味酸用苦味酸用苦味酸(黄色黄色黄色黄色)染色标记作为个位数，个位数染色标记作为个位数，个位数染色标记作为个位数，个位数染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法的染色标记方法同单色涂染法的染色标记方法同单色涂染法的染色标记方法同单色涂染法n n用品红用品红用品红用品红(红色红色红色红色)染色标记作为十位数染色标记作为十位数染色标记作为十位数染色标记作为十位数方法步骤n
7、n左前肢为左前肢为左前肢为左前肢为10101010号、号、号、号、左侧腹部左侧腹部左侧腹部左侧腹部20202020号、左后肢号、左后肢号、左后肢号、左后肢30303030号号号号n n两耳后部两耳后部两耳后部两耳后部40404040号、号、号、号、背部背部背部背部50505050号、号、号、号、后肢背部后肢背部后肢背部后肢背部60606060号号号号n n右前肢右前肢右前肢右前肢70707070号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部 80808080号、右后肢号、右后肢号、右后肢号、右后肢90909090号号号号n n第第第第100100100100号不作染色标记号不作染色标记号不作
8、染色标记号不作染色标记方法步骤n n穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代表十位，右耳代表个位。实验动物：兔、犬、耳代表十位，右耳代表个位。实验动物：兔、犬、耳代表十位，右耳代表个位。实验动物：兔、犬、耳代表十位，右耳代表个位。实验动物：兔、犬、猪猪猪猪n n标牌法标牌法标牌法标牌法：一般挂在动物
9、的颈部、耳朵、脚上。实：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。实：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。实：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。实验动物：犬、猴验动物：犬、猴验动物：犬、猴验动物：犬、猴n n烙印法烙印法烙印法烙印法n n剪毛法剪毛法剪毛法剪毛法其它方法器材：器材：器材：器材：大鼠饲养盒大鼠饲养盒大鼠饲养盒大鼠饲养盒 +面罩面罩面罩面罩 1 1 1 1套套套套方法步骤：方法步骤：方法步骤：方法步骤：n n首先戴好防护手套首先戴好防护手套首先戴好防护手套首先戴好防护手套n n用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大用右手拇指和食指抓住小
10、鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上鼠饲养盒的面罩上鼠饲养盒的面罩上鼠饲养盒的面罩上n n左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行n n以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取固定指和手掌
11、握住大鼠背部皮肤，完成抓取固定指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取固定指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取固定二、大鼠的抓取n n动物全身麻醉分四期：动物全身麻醉分四期：动物全身麻醉分四期：动物全身麻醉分四期：第一期：第一期：第一期：第一期：随意兴奋期，出现运动与运动失调随意兴奋期，出现运动与运动失调随意兴奋期，出现运动与运动失调随意兴奋期，出现运动与运动失调 第二期：第二期：第二期：第二期：不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开始时止始时止始时止始时止
12、 第三期：第三期：第三期：第三期：外科麻醉期外科麻醉期外科麻醉期外科麻醉期 第四期：第四期：第四期：第四期：延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量三、实验动物麻醉n n麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、注射（静脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌注射（静脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌注射（静脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌注射（静脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方
13、法使动物麻醉胃等方法使动物麻醉胃等方法使动物麻醉胃等方法使动物麻醉n n常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、硫贲妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡因、利多硫贲妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡因、利多硫贲妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡因、利多硫贲妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡因、利多卡因（局麻）卡因（局麻）卡因（局麻）卡因（局麻）麻醉方法与麻醉药种类种类种类种类戊巴比妥戊巴比妥戊巴比妥戊巴比妥硫贲妥钠硫贲妥钠硫贲妥钠硫贲妥钠盐酸氯胺酮盐酸氯胺酮盐酸氯胺酮盐酸氯胺酮水合氯醛水合氯醛水合氯醛
14、水合氯醛乌拉坦乌拉坦乌拉坦乌拉坦mg/kgmg/kg途径途径途径途径mg/kgmg/kg途径途径途径途径mg/kgmg/kg途径途径途径途径mg/kgmg/kg途径途径途径途径mg/kgmg/kg途径途径途径途径小鼠小鼠小鼠小鼠35355050IVIVIPIP25255050I.V.I.V.IPIP22-4422-44IMIM400400IPIP-大鼠大鼠大鼠大鼠25255050IVIVIPIP20204040IVIVIPIP22-4422-44IMIM300300IPIP0.750.75IPIP豚鼠豚鼠豚鼠豚鼠30304040IVIVIPIP20205555IVIVIPIP22-4422-4
15、4IMIM200-200-300300IPIP1.51.5IPIP家兔家兔家兔家兔30304040IVIVIPIP2020IVIV22-4422-441.01.0IVIVIPIP狗狗狗狗3030IVIV2525IVIV125125IVIV1.01.0IVIV猪猪猪猪445kg5kg30-2030-201515IVIVIVIV10-910-95 5IVIVIVIV10-1510-1510-1510-15IMIMIMIM常用麻醉药剂量与注射途径n n麻醉前应禁食麻醉前应禁食麻醉前应禁食麻醉前应禁食8h8h8h8h以上以上以上以上n n麻醉前应准确称体重麻醉前应准确称体重麻醉前应准确称体重麻醉前应准
16、确称体重n n注意麻醉剂量注意麻醉剂量注意麻醉剂量注意麻醉剂量n n麻醉过程中注意观察动物的反应情况麻醉过程中注意观察动物的反应情况麻醉过程中注意观察动物的反应情况麻醉过程中注意观察动物的反应情况n n注意保温注意保温注意保温注意保温n n静脉注射时必须缓慢，静脉注射时必须缓慢，静脉注射时必须缓慢，静脉注射时必须缓慢，n n在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平注意事项n n原原原原理理理理：是是是是使使使使用用用用非非非非挥挥挥挥发发发发性性性性麻
17、麻麻麻醉醉醉醉药药药药对对对对动动动动物物物物进进进进行行行行全全全全麻麻麻麻术的方法术的方法术的方法术的方法n n器材：器材：器材：器材：3 3 3 3戊巴比妥钠、注射器戊巴比妥钠、注射器戊巴比妥钠、注射器戊巴比妥钠、注射器大鼠的麻醉n n用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部n n右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺右
18、手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺n n针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针3mm3mm3mm3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈左右，接着使注射针头与皮肤呈左右，接着使注射针头与皮肤呈左右，接着使注射针头与皮肤呈45454545度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失入腹膜腔后抵抗感消失入腹膜腔后抵抗感消失入腹膜腔后抵抗感消失n n固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如
19、无回血、肠液和固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液尿液后即可注射药液尿液后即可注射药液尿液后即可注射药液大鼠麻醉步骤n n经口给药经口给药n n注射给药注射给药 1.1.1.1.皮下注射给药皮下注射给药皮下注射给药皮下注射给药 2.2.2.2.皮内注射给药皮内注射给药皮内注射给药皮内注射给药 3.3.3.3.肌肉注射给药肌肉注射给药肌肉注射给药肌肉注射给药 4.4.4.4.静脉注射给药静脉注射给药静脉注射给药静脉注射给药 5.5.5.5.腹腔注射给药腹腔注射给药腹
20、腔注射给药腹腔注射给药四、供试品给予方法n n自动口服给药自动口服给药自动口服给药自动口服给药n n灌胃给药灌胃给药灌胃给药灌胃给药:是借器械将药物直接灌入动物胃内是借器械将药物直接灌入动物胃内是借器械将药物直接灌入动物胃内是借器械将药物直接灌入动物胃内的方法，此法可以准确控制给药量，但如果的方法，此法可以准确控制给药量，但如果的方法，此法可以准确控制给药量，但如果的方法，此法可以准确控制给药量，但如果操作不当易造成动物死亡操作不当易造成动物死亡操作不当易造成动物死亡操作不当易造成动物死亡经口给药n n将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液将灌胃针连接
21、在注射器上，吸入一定量的药液将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液n n操操操操作作作作前前前前，大大大大致致致致量量量量一一一一下下下下从从从从口口口口到到到到胃胃胃胃的的的的距距距距离离离离，估估估估计计计计灌灌灌灌胃胃胃胃针针针针头头头头插插插插入的深度入的深度入的深度入的深度n n左左左左手手手手捉捉捉捉持持持持动动动动物物物物，使使使使头头头头部部部部向向向向上上上上；右右右右手手手手持持持持针针针针，把把把把灌灌灌灌胃胃胃胃针针针针头头头头的的的的前前前前端端端端放放放放进进进进动动动动物物物物的的的的口口口口腔腔腔腔，顺顺顺顺着着着着上上上上腭腭腭腭部部部部插插插插入入入入咽咽
22、咽咽部部部部，顺顺顺顺咽咽咽咽后后后后壁壁壁壁轻轻轻轻轻轻轻轻往往往往下下下下推推推推，灌灌灌灌胃胃胃胃针针针针会会会会顺顺顺顺着着着着食食食食管管管管滑滑滑滑入入入入动动动动物物物物的的的的胃胃胃胃内内内内，此此此此时时时时没有抵触感没有抵触感没有抵触感没有抵触感n n用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入动物的胃中动物的胃中动物的胃中动物的胃中灌胃给药n n剂量：小鼠约剂量：小鼠约剂量：小鼠约剂量：小鼠约10g10g10g10g体重，最大
23、体积为体重，最大体积为体重，最大体积为体重，最大体积为1.0ml/1.0ml/1.0ml/1.0ml/只；大鼠只；大鼠只；大鼠只；大鼠约约约约1-2 ml1-2 ml1-2 ml1-2 ml100g100g100g100g体重，最大体积为体重，最大体积为体重，最大体积为体重，最大体积为1.0ml/1.0ml/1.0ml/1.0ml/只只只只n n注意：在灌胃过程中，避免误插入气管注意：在灌胃过程中，避免误插入气管注意：在灌胃过程中，避免误插入气管注意：在灌胃过程中，避免误插入气管灌胃给药1.皮下注射给药n n原原原原理理理理：将将将将药药药药液液液液注注注注入入入入皮皮皮皮下下下下结结结结缔缔
24、缔缔组组组组织织织织，经经经经毛毛毛毛细细细细血血血血管管管管、淋巴管吸收进入血液循环淋巴管吸收进入血液循环淋巴管吸收进入血液循环淋巴管吸收进入血液循环n n器材：器材：器材：器材：1m11m11m11m1注射器注射器注射器注射器1 1 1 1支、生理盐水、烧杯、酒精、支、生理盐水、烧杯、酒精、支、生理盐水、烧杯、酒精、支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球碘酒、棉球碘酒、棉球碘酒、棉球注射给药n n注射部位：颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下注射部位：颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下注射部位：颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下注射部位：颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下n n常常常常规规规规消毒注射部位的皮
25、肤，用注射消毒注射部位的皮肤，用注射消毒注射部位的皮肤，用注射消毒注射部位的皮肤，用注射针头针头针头针头取一取一取一取一锐锐锐锐角角度角角度角角度角角度刺入皮下刺入皮下刺入皮下刺入皮下.n n将将将将针针针针头头头头轻轻轻轻轻轻轻轻向向向向左左左左右右右右摆摆摆摆动动动动，易易易易摆摆摆摆动动动动则则则则表表表表示示示示已已已已刺刺刺刺入入入入皮皮皮皮下下下下，再再再再轻轻轻轻轻轻轻轻抽抽抽抽吸吸吸吸，如如如如无无无无回回回回血血血血，可可可可缓缓缓缓慢慢慢慢地地地地将将将将药药药药物注入皮下。物注入皮下。物注入皮下。物注入皮下。n n注射量：注射量：注射量：注射量：0.01ml0.01ml0
26、.01ml0.01ml0.03ml0.03ml0.03ml0.03mlg g g g体重体重体重体重皮下注射方法步骤n n此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应n n注射部位：动物背部，脱毛，用针头平直进入注射部位：动物背部，脱毛，用针头平直进入注射部位：动物背部，脱毛，用针头平直进入注射部位：动物背部，脱毛，用针头平直进入皮内皮内皮内皮内n n注射药液后，皮肤表面鼓起小泡，停片刻拔出注射药液后，皮肤表面鼓起小泡，停片刻拔出注射药液后，皮肤表面鼓起小泡，停片刻拔出注射药液后
27、，皮肤表面鼓起小泡，停片刻拔出针头针头针头针头2.皮内注射给药n n原原原原理理理理：将将将将药药药药液液液液注注注注入入入入动动动动物物物物的的的的肌肌肌肌肉肉肉肉组组组组织织织织，经经经经毛毛毛毛细细细细血血血血管管管管吸收进入血液循环吸收进入血液循环吸收进入血液循环吸收进入血液循环 n n器材：器材：器材：器材：1ml1ml1ml1ml注射器注射器注射器注射器1 1 1 1支、生理盐水、烧杯、酒精、支、生理盐水、烧杯、酒精、支、生理盐水、烧杯、酒精、支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球碘酒、棉球碘酒、棉球碘酒、棉球n n注射部位：注射部位：注射部位：注射部位：一般选择肌肉丰富而无大血管通
28、过的一般选择肌肉丰富而无大血管通过的一般选择肌肉丰富而无大血管通过的一般选择肌肉丰富而无大血管通过的臀部或大腿外测，回抽无血即可注射臀部或大腿外测，回抽无血即可注射臀部或大腿外测，回抽无血即可注射臀部或大腿外测，回抽无血即可注射3.肌肉注射给药n n原理：将药液注入小鼠的尾静脉原理：将药液注入小鼠的尾静脉原理：将药液注入小鼠的尾静脉原理：将药液注入小鼠的尾静脉n n器材：器材：器材：器材：1m11m11m11m1注射器注射器注射器注射器1 1 1 1支、生理盐水、烧杯、金属笼支、生理盐水、烧杯、金属笼支、生理盐水、烧杯、金属笼支、生理盐水、烧杯、金属笼或大小鼠器或大小鼠器或大小鼠器或大小鼠器
29、、酒精、碘酒、棉球、酒精、碘酒、棉球、酒精、碘酒、棉球、酒精、碘酒、棉球 4.静脉注射给药n n将将将将大大大大小小小小鼠鼠鼠鼠放放放放在在在在金金金金属属属属笼笼笼笼或或或或小小小小鼠鼠鼠鼠固固固固定定定定器器器器中中中中，通通通通过过过过金金金金属属属属笼笼笼笼或或或或大大大大小小小小鼠鼠鼠鼠固固固固定定定定器器器器的的的的孔孔孔孔拉拉拉拉出出出出鼠尾巴鼠尾巴鼠尾巴鼠尾巴n n用左手捏住鼠尾巴中下部，用用左手捏住鼠尾巴中下部，用用左手捏住鼠尾巴中下部，用用左手捏住鼠尾巴中下部，用75757575酒精棉球反复擦拭尾部；酒精棉球反复擦拭尾部；酒精棉球反复擦拭尾部；酒精棉球反复擦拭尾部；注射时，
30、以左手注射时，以左手注射时，以左手注射时，以左手拇指和中指捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的拇指和中指捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的拇指和中指捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的拇指和中指捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的末梢。末梢。末梢。末梢。n n右手持右手持右手持右手持4 4 4 4号号号号针头针头针头针头的注射器，使的注射器，使的注射器，使的注射器，使针头针头针头针头与静脉平行与静脉平行与静脉平行与静脉平行(小于小于小于小于30303030度角度角度角度角)；从鼠尾巴下从鼠尾巴下从鼠尾巴下从鼠尾巴下1/4
31、1/41/41/4处进针，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，处进针，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，处进针，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，处进针，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，即可注入药物即可注入药物即可注入药物即可注入药物 n n拔出针头后，用干棉球压住注射部位约拔出针头后，用干棉球压住注射部位约拔出针头后，用干棉球压住注射部位约拔出针头后，用干棉球压住注射部位约l-2minl-2minl-2minl-2min，防止出血，防止出血，防止出血，防止出血n n注射量：小鼠注射量：小鼠注射量：小鼠注射量：小鼠
32、 0.005m10.005m10.005m10.005m10.01 m10.01 m10.01 m10.01 m1g g g g体重。体重。体重。体重。大鼠大鼠大鼠大鼠 m1m1m1m1100100g g g g体重体重体重体重静脉注射方法步骤n n原理：原理：原理：原理：将药液注入大鼠的腹腔将药液注入大鼠的腹腔将药液注入大鼠的腹腔将药液注入大鼠的腹腔n n器材：器材：器材：器材：注射器注射器注射器注射器1 1 1 1支、生理盐水、烧杯支、生理盐水、烧杯支、生理盐水、烧杯支、生理盐水、烧杯5.腹腔注射给药n n用用用用左左左左手手手手将将将将大大大大鼠鼠鼠鼠捉捉捉捉持持持持保保保保定定定定，使
33、使使使鼠鼠鼠鼠腹腹腹腹部部部部朝朝朝朝上上上上，鼠鼠鼠鼠头头头头略略略略低低低低于于于于尾尾尾尾部部部部；右右右右手手手手持持持持注注注注射射射射器器器器将将将将针针针针头头头头在在在在下下下下腹腹腹腹部部部部靠靠靠靠近近近近腹腹腹腹白白白白线线线线的的的的两两两两侧进行穿刺侧进行穿刺侧进行穿刺侧进行穿刺n n针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针3mm3mm3mm3mm左右，接着使注射针头与皮左右，接着使注射针头与皮左右，接着使注射针头与皮左右，接着使注射针头与皮肤呈肤呈肤呈肤呈45454545度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖度角刺入腹肌，穿过腹肌进
34、入腹膜腔，当针尖度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失n n固固固固定定定定针针针针头头头头，保保保保持持持持针针针针尖尖尖尖不不不不动动动动，回回回回抽抽抽抽针针针针栓栓栓栓，如如如如无无无无回回回回血血血血、肠肠肠肠液和尿液后即可注射药液液和尿液后即可注射药液液和尿液后即可注射药液液和尿液后即可注射药液n n注射量：注射量：注射量：注射量：0.010.010.010.010.02m10.02m10.02m10.02m1g g g
35、g体重体重体重体重腹腔注射方法步骤n n胸水胸水胸水胸水n n腹水腹水腹水腹水n n消化液消化液消化液消化液n n尿液尿液尿液尿液n n骨髓液骨髓液骨髓液骨髓液n n动物精液动物精液动物精液动物精液n n乳汁乳汁乳汁乳汁五、采集体液n n代谢笼法代谢笼法代谢笼法代谢笼法:此法较常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量此法较常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量此法较常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量此法较常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量1-3ml/24h1-3ml/24h1-3ml/24h1-3ml/24h，大鼠为大鼠为大鼠为大鼠为55-75ml/24h55-75ml/24h55-75ml/24h55-75ml/24hn n
36、导尿法：导尿法：导尿法：导尿法：常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到无污常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到无污常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到无污常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到无污染的尿液染的尿液染的尿液染的尿液n n压迫膀胱法：压迫膀胱法：压迫膀胱法：压迫膀胱法：此法适用于兔、猫、犬等大动物此法适用于兔、猫、犬等大动物此法适用于兔、猫、犬等大动物此法适用于兔、猫、犬等大动物n n输尿管插管法输尿管插管法输尿管插管法输尿管插管法n n膀胱插管法膀胱插管法膀胱插管法膀胱插管法n n膀胱穿刺法膀胱穿刺法膀胱穿刺法膀胱穿刺法n n剖腹采尿法剖腹采尿法剖腹采尿法剖腹
37、采尿法n n反射排尿法反射排尿法反射排尿法反射排尿法尿液的采集n n眼眶后静脉丛眼眶后静脉丛眼眶后静脉丛眼眶后静脉丛(窦窦窦窦)取血取血取血取血n n器器器器材材材材：毛毛毛毛细细细细管管管管(玻玻玻玻璃璃璃璃或或或或塑塑塑塑料料料料均均均均可可可可)、1 1 1 1肝肝肝肝素素素素溶溶溶溶液液液液、干燥皿、乙醚、试管、干棉球干燥皿、乙醚、试管、干棉球干燥皿、乙醚、试管、干棉球干燥皿、乙醚、试管、干棉球六、大鼠的采血n n先将毛细管浸泡在先将毛细管浸泡在先将毛细管浸泡在先将毛细管浸泡在1 1 1 1肝素溶液中数分钟，取出干燥备用肝素溶液中数分钟，取出干燥备用肝素溶液中数分钟，取出干燥备用肝素溶
38、液中数分钟，取出干燥备用n n将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位n n左左左左手手手手拇拇拇拇指指指指、食食食食指指指指抓抓抓抓住住住住两两两两鼠鼠鼠鼠耳耳耳耳之之之之间间间间的的的的颈颈颈颈部部部部头头头头皮皮皮皮，并并并并轻轻轻轻轻轻轻轻向向向向下下下下压压压压迫迫迫迫颈颈颈颈部部部部两两两两侧侧侧侧，致致致致大大大大鼠鼠鼠鼠静静静静脉脉脉脉血血血血回回回回流流流流障障障障碍碍碍碍，眼眼眼眼球球球球外外外外突突突突，眶眶眶眶后后后后静脉静脉静脉静脉丛丛丛丛充血充血充血充血n n右右右右手手手手持持
39、持持毛毛毛毛细细细细管管管管由由由由大大大大鼠鼠鼠鼠的的的的目目目目内内内内眦眦眦眦部部部部插插插插入入入入结结结结膜膜膜膜，使使使使毛毛毛毛细细细细管管管管与与与与眶眶眶眶壁平行地向喉头方向推进，深度约壁平行地向喉头方向推进，深度约壁平行地向喉头方向推进，深度约壁平行地向喉头方向推进，深度约3 3 3 35mm5mm5mm5mmn n轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出n n采血量：采血量：采血量：采血量：0.40.40.40.4
40、0.6ml0.6ml0.6ml0.6ml次次次次方法步骤脑立体定位技术脑立体定位技术某些颅外标记与颅内结构具有相对固定的某些颅外标记与颅内结构具有相对固定的某些颅外标记与颅内结构具有相对固定的某些颅外标记与颅内结构具有相对固定的位置关系，确定脑内功能核团的位置位置关系，确定脑内功能核团的位置位置关系，确定脑内功能核团的位置位置关系，确定脑内功能核团的位置核团微量注射核团微量注射核团微量注射核团微量注射电位引导电位引导电位引导电位引导核团的刺激或损毁核团的刺激或损毁核团的刺激或损毁核团的刺激或损毁脑立体定位仪脑立体定位仪脑立体定位仪的调试脑立体定位仪的调试:摆稳定位仪，用水平仪测水平。检验电极移
41、动架上各个轴向滑尺是否保持互相垂直，微量注射器针尖是否光滑垂直。检查定位仪各衔接部位的螺丝有无松动。检查头部固定装置两侧是否对称。检查耳杆使两耳杆尖端相对,以此判定耳杆固定的准确程度。鼠颅的固定鼠颅的固定:将麻醉大鼠置于脑立体定位仪上，鼠颅依靠两耳杆及切牙钩三点固定。脑立体定位仪坐标脑立体定位仪坐标“0”点的测得点的测得:按照Paxinos大鼠脑立体定位图谱，以颅骨前囟即冠矢点作为前后方向的“0”参照点，当微量注射器的针尖对准冠矢点时,读取立体定位仪三维坐标上标尺的数值，此数值即是“0”点坐标。生物信号在体检测遥控系统生物信号在体检测遥控系统Illustration of the high f
42、idelity recording provided by the C10 telemeter,which allows for the accurate measurement of pulse pressures in mice despite their high heart rate(10 per second!).Bursts of renal sympathetic nerve activity made in a conscious,freely behaving rat 64 days following telemeter implantationPowerLab 系统Far
43、aday cageVibration Isolation TableMicroscopeMicro-Manipulators Remote ControllerAmplifiersCCD Camera膜片钳系统膜片钳系统Micro-ManipulatorsDAD-VC systemCCDCamera活体生物发光和荧光成像技术活体生物发光和荧光成像技术理想的光源：萤火虫荧光素酶（luciferase）基因、细胞、活体都可被荧光素酶基因标记。活体生物发光成像系统原理活体生物发光成像系统原理遗传学标记实时、原位多波长检测标记癌细胞标记细菌标记转基因鼠荧光素酶的表达荧光素酶的表达 将荧光素酶基因连接于
44、启动子下游，稳定整合到细胞染色体内，使荧光素酶得到持续表达。启动子染色体体内表达外源注入底物活跃细胞体内发光活体成像技术的主要应用活体成像技术的主要应用 标记细胞标记细胞 癌症及药物研究癌症及药物研究 标记病毒标记病毒,DNA,RNADNA,RNA 病毒学及基因治疗病毒学及基因治疗 转基因动物模型转基因动物模型蛋白质相互作用、代谢、发育、内分泌学，蛋白质相互作用、代谢、发育、内分泌学，等等等等 标记基因标记基因 siRNAsiRNA研究的应用研究的应用 干细胞干细胞,免疫免疫 其它其它 细胞凋亡细胞凋亡 组织特异性基因表达组织特异性基因表达 标记细菌标记细菌体内药物分析的生物发光检测1x106
45、 ，PC-3M-Luc肿瘤细胞，皮下注射14天21天28天35天雄性SCID小鼠处理方式 细胞数无治疗对照 2.2x1095-FU治疗 2.8x108丝裂酶素 3.6x106治疗 小鼠#6 n=7 小鼠#40 n=8(从第11天开始给药)小鼠#31 n=8(从第11天开始给药)乳腺癌原位接种乳腺癌原位接种PNAS2010,10U87 U87 脑胶质瘤成像脑胶质瘤成像 cancer research 2011,8cancer research 2011,8cancer research 2011,8cancer research 2011,8PTAofU87humangliomasinmousebrains.A,representativebioluminescenceimagesofnudemicebearingU87-TGLtumorswithdifferenttreatments(seeMaterialsandMethods).肿瘤转移肿瘤转移基因治疗载体的构建基因治疗载体的构建AdTSTA-FL的表达活性比AdCMV-FL高100倍以上AdTSTA-FL（107）AdCMV-FL（107）Days 5 7 10 13800600400200500400300200100103105