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1、微生物学实验微生物学实验指导老师：指导老师：实实 验验 要要 求求坚持课前预习坚持课前预习不迟到，不早退，更不能无故缺课；不迟到，不早退，更不能无故缺课；严格按正确规范实验方法进行实验，作好记录；严格按正确规范实验方法进行实验，作好记录；保持实验室整洁保持实验室整洁注意安全注意安全事实求是地、独立地写好实验报告事实求是地、独立地写好实验报告实验报告实验报告姓名、班级和学号姓名、班级和学号实验题目实验题目实验原理（略写）实验原理（略写）实验操作（实验操作（略写）（略写）实验结果实验结果画图画图文字描述文字描述分析和讨论分析和讨论思考题思考题实验一、显微镜油镜的使用和细菌形态的观察、实验一、显微镜
2、油镜的使用和细菌形态的观察、细菌的革兰氏染色细菌的革兰氏染色 教学目标或要求：教学目标或要求：巩固和掌握显微镜油镜的正确使用；巩固和掌握显微镜油镜的正确使用；学习细菌制片和单染色技术；学习细菌制片和单染色技术；对对人人体体微微生生物物染染色色检检查查，初初步步建建立立无无菌菌操操作作的概念。的概念。学习细菌的革兰氏染色方法学习细菌的革兰氏染色方法 显微镜油镜的使用显微镜油镜的使用油镜头的识别和重要参数油镜头的识别和重要参数油镜物油镜物镜的工作原理镜的工作原理油镜的使用方法和注意事项油镜的使用方法和注意事项油镜头的识别和重要参数油镜头的识别和重要参数放大倍数放大倍数数值孔径数值孔径工作距离工作距
3、离油镜物油镜物镜的工作原理镜的工作原理使用油质作为玻片与接物使用油质作为玻片与接物镜镜之间的介质之间的介质油浸系油浸系可以增加显微镜的放大倍数可以增加显微镜的放大倍数可以增加视野的照明度可以增加视野的照明度可以增大显微镜的分辨率可以增大显微镜的分辨率油镜的使用方法和注意事项油镜的使用方法和注意事项1、用低倍镜对光。最大光圈、用低倍镜对光。最大光圈2、低倍镜观察（寻找观察目标）。适当缩小光圈、低倍镜观察（寻找观察目标）。适当缩小光圈3、高倍镜观察（选取理想的观察目标）。、高倍镜观察（选取理想的观察目标）。4、油镜观察：高倍镜观察后、油镜观察：高倍镜观察后-上升镜筒上升镜筒-油镜转至正下方，在油镜
4、转至正下方，在载玻片上加一小滴油载玻片上加一小滴油-小心地下降镜筒使镜头浸在油里小心地下降镜筒使镜头浸在油里-用粗用粗螺旋将镜筒缓慢上升，寻找目标（物象）用细螺旋调节，使螺旋将镜筒缓慢上升，寻找目标（物象）用细螺旋调节，使物象清晰物象清晰-观察记录。最大光圈观察记录。最大光圈5、观察完毕。上升镜筒，转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。、观察完毕。上升镜筒，转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，再取一张擦镜纸用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，再取一张擦镜纸醮上二甲醮上二甲苯擦去镜头上残留的香柏油苯擦去镜头上残留的香柏油，最后再用一张干净的擦镜纸擦，最后再用一张干净的擦镜纸擦去残留
5、在镜头上的二甲苯。去残留在镜头上的二甲苯。6、将显微镜各部分还原，放回箱中。、将显微镜各部分还原，放回箱中。细菌的制片与染色细菌的制片与染色1单单染色染色1复染色复染色染染 料料碱性染料（碱性染料（basic dye）带正电染料。其阳离子部带正电染料。其阳离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。如结晶紫分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。如结晶紫沙黄沙黄,甲基蓝甲基蓝,碱性复红等。碱性复红等。酸性染料（酸性染料（Acid dye）带负电染料。其阴离子部带负电染料。其阴离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。如刚果红、分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。如刚果红、酸性
6、复红酸性复红 等。等。脂溶性染料脂溶性染料如如Sudan black。多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同可分为多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同可分为以下类型：以下类型：涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色12min水洗、吸干镜检镜检细菌的单染色步骤：结果:阳性菌阳性菌紫色紫色 阴性菌阴性菌红色红色结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色番红复染涂片固定由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。革兰氏染色法（革兰氏染色法（Gram Stain）革兰氏染色法革兰氏染色法操作步骤操作步骤涂片涂片干燥干燥固定固定结晶紫结晶紫1min水洗水洗I-KI 1min水洗水洗95%乙醇脱色约乙醇
7、脱色约1020s水洗水洗沙黄或石炭酸复红沙黄或石炭酸复红 1min水洗水洗干燥干燥镜检镜检革兰氏染色注意事项革兰氏染色注意事项p45实验内容实验内容1 1、用用美美蓝蓝对对苏苏云云金金芽芽孢孢杆杆菌菌进进行行单单染染色色，在显微镜油镜下观察形态；在显微镜油镜下观察形态；2 2、用用混混合合涂涂片片的的方方法法对对大大肠肠杆杆菌菌、苏苏云云金金芽孢杆菌进行革兰氏染色芽孢杆菌进行革兰氏染色3 3、自选材料：用牙签挑取牙垢观察、自选材料：用牙签挑取牙垢观察实验报告绘出革兰氏染色后大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌绘出革兰氏染色后大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌的形态图并说明染色结果的形态图并说明染色结果思考题：思考题：你认为那些环节会影响革兰氏染色结果的正你认为那些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？如何使你的染色结确性？其中最关键的环节是什么？如何使你的染色结果可信？果可信？