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1、大肠菌群计数检验第1页，共14页，编辑于2022年，星期六旧国家标准旧国家标准第2页，共14页，编辑于2022年，星期六第一法第一法 大肠菌群大肠菌群MPN 计数法计数法第3页，共14页，编辑于2022年，星期六第二法第二法 大肠菌群平板计数法大肠菌群平板计数法第4页，共14页，编辑于2022年，星期六第一天第第1、3、5、7小组：小组：使用第一法（附带做第二法中，两个使用第一法（附带做第二法中，两个平板接种），以自来水为样品。平板接种），以自来水为样品。第第2、4、6小组：小组：使用第二法（附带做第一法中，使用第二法（附带做第一法中，3个试管初发酵试验），以污水为样品。个试管初发酵试验），以
2、污水为样品。第5页，共14页，编辑于2022年，星期六第一法：检样稀释与初发酵试验第一法：检样稀释与初发酵试验vMPN：表示食品中大肠菌群数是以每：表示食品中大肠菌群数是以每100ML或克检样内大肠菌群最大可能或克检样内大肠菌群最大可能数。一般采用数。一般采用9管法管法.v一般样品一般样品25ML（克）（克）+225ML生理盐水生理盐水=1：10，从，从10-1取取样样1ML，接种到，接种到3管管LST（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤）中。（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤）中。v从从10-1取样取样1ML+9 ML生理盐水生理盐水=1：100，从，从10-2取样取样1ML，接种到接种到3管管LST中。中。
3、v从从10-2取样取样1ML+9 ML生理盐水生理盐水=1：1000，从，从10-3取样取样1ML，接种到，接种到3管管LST中。中。第6页，共14页，编辑于2022年，星期六第二法：检样稀释与平板计数第二法：检样稀释与平板计数检样稀释：同上。检样稀释：同上。平板计数：平板计数：1、每个稀释度接种、每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿个无菌平皿，每皿1mL稀稀释样品，另外一个平皿加释样品，另外一个平皿加1mL生理盐水作空生理盐水作空白对照。白对照。2、及时将、及时将1520mLVRBA（结晶紫中性红胆（结晶紫中性红胆盐琼脂）倾注每个平皿中。盐琼脂）倾注每个平皿中。3、待琼脂凝固后，再加、待琼脂凝固
4、后，再加34mLVRBA覆盖表覆盖表层。翻转平板培养。层。翻转平板培养。第7页，共14页，编辑于2022年，星期六第二天第二天v第一法第一法 复发酵试验复发酵试验 用接种环从产气的用接种环从产气的LSTLST肉汤管中分别取肉汤管中分别取培养物培养物1 1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLBBGLB）管中，）管中，361361培养培养48h2h48h2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。性管。第8页，共14页，编辑于2022年，星期六v第二法第二法 平板菌落数的选择与证实试验平板菌落数的选择与证实试验平板菌落数的选择平板菌落
5、数的选择v选取菌落数在选取菌落数在15CFU15CFU150CFU 150CFU 之间的平板，分别计数平板之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm 0.5mm 或更大。或更大。证实试验证实试验v从从VRBA VRBA 平板上挑取平板上挑取1010个不同类型的典型和可疑菌落，个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于分别移种于BGLB BGLB 肉汤管内，肉汤管内，36 1 36 1 培养培养24 h24 h48 48 h h，观察
6、产气情况。凡，观察产气情况。凡BGLB BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性肠菌群阳性。第9页，共14页，编辑于2022年，星期六（2）原理）原理v溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖色，说明可能出现能分解乳糖产酸产酸的大肠菌群。的大肠菌群。v胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。v分解乳糖产酸分解乳糖产酸产气产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。的大肠菌群
7、，看小倒管中的气体。第10页，共14页，编辑于2022年，星期六1产气 2不产气杜氏发酵管产气情况杜氏发酵管产气情况第11页，共14页，编辑于2022年，星期六第12页，共14页，编辑于2022年，星期六第四天：大肠菌群计数报告第一法：第一法：确证大肠菌群确证大肠菌群LST阳性管数，检索阳性管数，检索MPN表（见附录），报告每表（见附录），报告每g（mL）样）样品中大肠菌群的品中大肠菌群的MPN值。值。第13页，共14页，编辑于2022年，星期六第二法：第二法：经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶紫中性经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶紫中性红胆盐琼脂（红胆盐琼脂（VRBAVRB
8、A）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每即为每g g（mLmL）样品中大肠菌群数。例：）样品中大肠菌群数。例：1010-4-4样品稀释液样品稀释液1mL1mL，在，在VRBAVRBA平板上有平板上有100100个典型和可疑菌落，挑取其中个典型和可疑菌落，挑取其中1010个个接种接种BGLBBGLB肉汤管，证实有肉汤管，证实有6 6个阳性管，则该样品的大肠菌个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：群数为：1006/10101006/10104 4/g/g（mLmL）=6.010=6.0105 5CFU/gCFU/g（mLmL）。）。第14页，共14页，编辑于2022年，星期六