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1、认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目我们毕业啦其实是答辩的标题地方电泳的介绍认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目 带带电电颗颗粒粒在在电电场场作作用用下下，向向着着与与其其电电性性相相反反的的电电极极移移动动，称称为为电电泳泳(electrophoresis,(electrophoresis,EP)EP)。许许多多重重要要的的生生物物分分子子，如如氨氨基基酸酸、多多肽肽、蛋蛋白白质质、核核苷苷酸酸、核核酸酸等等都都具具有有可可电电离
2、离基基团团，它它们们在在某某个个特特定定的的pHpH值值下下可可以以带带正正电电或或负负电电，在在电电场场的的作作用用下下，这这些些带带电电分分子子会会向向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电电泳泳技技术术就就是是利利用用在在电电场场的的作作用用下下，由由于于待待分分离离样样品品中中各各种种分分子子带带电电性性质质以以及及分分子子本本身身大大小小、形形状状等等性性质质的的差差异异，使使带带电电分分子子产产生生不不同同的的迁迁移移速速度度，从从而而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。“”基本原理”“认识到了贫困户贫困的根本
3、原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目电泳装置主要包括两个部分：电源和电泳槽。电源提供直流电，在电泳槽中产生电场，驱动带电分子的迁移。电泳槽可以分为水平式和垂直式两类。垂直板式电泳是较为常见的一种，常用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质的分离。电源电泳槽认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目样品处理制胶跑胶固定染色电泳的流程脱色WB 8%、10%、12.5%、15%的胶16.5%的Tricine胶4-20%的梯度胶ECL反应曝光认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始
4、对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目123SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，变性条件下电泳，根据蛋白质亚基分子量的不同来分开蛋白质。SDS-PAGE等电聚焦电泳利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同，在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋白质的分离和分析。IEF毛细管电泳CE分类电泳认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目在蛋白质染色方法中，目前以考马斯亮蓝染色最为常用，考马斯亮蓝灵敏度每条带0.1-1ug；还有灵敏度较高的银染。染色蛋白质印迹法（免疫印迹试验）通过特异性
5、抗体对凝胶电泳处理过的蛋白质分子样品进行着色。WB处理方式认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用 聚丙烯酰胺的作用:丙烯酰胺为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关;制胶缓冲液:选择Tris-HCl系统，浓缩胶选择pH6.8，分离胶选择pH8.8，TEMED与AP:AP 催化剂，催化单丙和双丙聚合成聚丙烯酰胺。TEMED四甲基乙二胺，催凝剂，加速AP催化作用;十二烷基磺酸钠(SDS):阴离子去污剂，作用有四:去蛋白质电荷、解离蛋白质之
6、间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去除多肽折叠。SDS-PAGE制胶工具预制胶认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目 根据样品分离目的不同，主要有两种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS处理。SDS-PAGE12还原SDS处理:在上样buffer中加入-巯基乙醇（-巯基乙醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂），蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子。非还原SDS处理:未加还原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为测定分子量来使用。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国
7、家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目分子量范围与凝胶浓度的关系 分子量范围 适用的分离胶浓度(%)1545kDa 15 1560 kDa 12.5 1875 kDa 10 30120kDa 8 预制胶4-20%分子量范围 10250kDaSDS-PAGE认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目 聚丙烯酰胺凝胶有下列特性：(1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好；(2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶；(3)对pH和温度变化较稳定；(4)几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，
8、操作条件一致，则样品分 离重复性好；(5)样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达10-6g；(6)凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度，通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径；(7)分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。SDS-PAGE认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目IEF 等电聚焦就是在电泳凝胶中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，当蛋白质放进此体系时，不同的蛋白
9、质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目IEF 等电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开。一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时间和所走的距离加长，区带越走越宽，而电聚焦能抵消扩散作用，使区带越走越窄。由于这种电聚焦作用，不管样品加在什么部位，都可聚焦到其电点，很稀的样品也可进行分离，可直接测出蛋白质的等电点，其精确度可达0.01pH单位。等电聚焦的缺点是：一是电聚焦要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀；二是样品中的
10、成分必需停留于其等电点，不适用在等电点不溶或发生变性的蛋白质。.认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目 免疫印迹法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，探针是抗体，显色用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋
11、白成分。Western Blot法WB认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目 发光液A和B分别是鲁米诺和过氧化氢，在辣根过氧化物酶（HRP）的催化作用下,鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物，过氧化物不稳定随即分解，形成一种能发光的电子激发中间体,当后者由激发态返回至基态，就会产生荧光。在发光过程中不需要消耗HRP,HRP只是起催化作用，所以只要HRP没降解失活,是可以重复加发光液的。发光液A、BECL反应认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目 目标蛋白ECL反应 二抗 一抗认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目THANKS