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1、色谱柱的维护及保养第1页，共27页，编辑于2022年，星期二 色谱填料的种类及参数色谱填料的种类及参数 色谱柱评价的注意事项色谱柱评价的注意事项 色谱柱在使用过程中容易出现的问色谱柱在使用过程中容易出现的问 题及解决办法题及解决办法 色谱柱的保存色谱柱的保存第2页，共27页，编辑于2022年，星期二色谱柱是液相色谱仪的色谱柱是液相色谱仪的 心脏心脏 现代高效液相色谱中现代高效液相色谱中,不要总是不要总是首先首先埋怨仪器埋怨仪器!分离效果好坏很大程度分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选上取决于色谱填料的选择择.但是色谱填料的选择但是色谱填料的选择范围很宽范围很宽,要做合适的选要做合适的选择择
2、,必须对此有一定的认必须对此有一定的认识和了解识和了解第3页，共27页，编辑于2022年，星期二一一.色谱填料的色谱填料的种类种类及及性能参数性能参数1.1.种类种类填料基质填料基质 第4页，共27页，编辑于2022年，星期二2.填料粒度填料粒度商品化的填料从商品化的填料从 1m 30m 目前常用于分析目前常用于分析 3m,5m,10m 用于半制备用于半制备 10m,15m 用于制备用于制备 15m 40m 3 m 填料填料第5页，共27页，编辑于2022年，星期二 3.性能参数性能参数 Hypersil SinoChrom 第6页，共27页，编辑于2022年，星期二 Hypersil BDS
3、第7页，共27页，编辑于2022年，星期二 Betasil Spherisorb第8页，共27页，编辑于2022年，星期二 Kromasil LiChrosorb第9页，共27页，编辑于2022年，星期二不同品牌填料性能参数比较不同品牌填料性能参数比较第10页，共27页，编辑于2022年，星期二注意事项注意事项:1.参数参数 品牌品牌 批号批号不同分离效果有差异不同分离效果有差异2.相同粒度相同粒度球形球形 无定形无定形压力不同压力不同3.国产国产 进口进口填料寿命不同填料寿命不同 如如:氟苯法分析氨基酸氟苯法分析氨基酸 酯溶性维生素酯溶性维生素D小结小结:1.换不同品牌色谱柱需要重新摸条件换
4、不同品牌色谱柱需要重新摸条件 2.能用短柱能用短柱 不用长柱不用长柱 3.能用进口柱能用进口柱 不用国产柱不用国产柱第11页，共27页，编辑于2022年，星期二二.色谱柱评价注意事项1.尽量减少死体积尽量减少死体积第12页，共27页，编辑于2022年，星期二2.色谱柱的评价色谱柱的评价流动相条件流动相条件 第13页，共27页，编辑于2022年，星期二 流速设定流速设定 柱效柱效 N=5.54(tr/tg)2第14页，共27页，编辑于2022年，星期二三三.色谱柱使用过程中易出现的问色谱柱使用过程中易出现的问题及解决办法题及解决办法1.谱图分叉谱图分叉首先判断柱头是否首先判断柱头是否 柱头塌陷柱
5、头塌陷?(按色谱柱评价报告按色谱柱评价报告 的条件评价色谱柱的条件评价色谱柱)第15页，共27页，编辑于2022年，星期二修补前后现象修补前后现象 第16页，共27页，编辑于2022年，星期二样品分解样品分解第17页，共27页，编辑于2022年，星期二现现 象象原原 因因解决办法解决办法柱头塌陷柱头塌陷流动相含盐时流动相含盐时,冲洗系统要用冲洗系统要用20%50%20%50%的甲醇水的甲醇水 不要不要用纯水冲柱用纯水冲柱,修补色谱柱修补色谱柱柱外死体积柱外死体积检查进样阀检查进样阀,色谱柱色谱柱,检测器的检测器的管路连接有无死体积管路连接有无死体积,更换密封环更换密封环(刃环刃环).柱头填料污
6、染柱头填料污染严格过滤流动相和样品严格过滤流动相和样品,修补色谱柱修补色谱柱进样阀密封问题进样阀密封问题 检修进样阀检修进样阀样品分解样品分解光分解光分解,氧化分解氧化分解,溶剂分解溶剂分解采取相应措施采取相应措施色谱柱填充不实色谱柱填充不实色谱柱填充色谱柱填充重新装填重新装填色谱柱受到强烈振动色谱柱受到强烈振动重新装填重新装填第18页，共27页，编辑于2022年，星期二色谱柱的修复色谱柱的修复第19页，共27页，编辑于2022年，星期二柱头塌陷修复办法柱头塌陷修复办法拧下柱头螺帽拧下柱头螺帽(最好在台虎钳上最好在台虎钳上)用尖针轻轻除掉柱头表面的污染填料用尖针轻轻除掉柱头表面的污染填料取少量
7、与色谱柱相同的新填料取少量与色谱柱相同的新填料,调成浆糊调成浆糊状状(正相用正己烷正相用正己烷,反相用甲醇反相用甲醇)填实柱头填实柱头(轻轻下压轻轻下压)更换柱头过滤板更换柱头过滤板,将柱头螺帽拧紧将柱头螺帽拧紧(柱头填料下陷柱头填料下陷3mm修复后效果也不会修复后效果也不会理想理想第20页，共27页，编辑于2022年，星期二2.泵压力升高泵压力升高不要认为压力高就是色谱柱的问题不要认为压力高就是色谱柱的问题 首先判断是否是色谱系统管路阻塞首先判断是否是色谱系统管路阻塞?方法方法:(分段检查分段检查在线过滤器在线过滤器进样阀进样阀色谱柱色谱柱 检测器检测器排液管排液管)第21页，共27页，编辑
8、于2022年，星期二现象原因及解决办法现象原因及解决办法现现 象象 原原 因因解决办法解决办法在线过滤器阻塞在线过滤器阻塞溶剂过滤不好或密封圈溶剂过滤不好或密封圈磨损磨损,用用30%30%硝酸超声在线过滤硝酸超声在线过滤器器,再用水超声再用水超声.进样阀定量管阻塞进样阀定量管阻塞样品过滤不好样品过滤不好,更换定量管更换定量管管路阻塞管路阻塞缓冲液中的盐遇到甲醇缓冲液中的盐遇到甲醇结晶结晶,高压反冲高压反冲,加热或更换加热或更换管路管路色谱柱阻塞色谱柱阻塞柱头滤板阻塞柱头滤板阻塞,缓冲液中的盐遇到甲醇缓冲液中的盐遇到甲醇结晶结晶,反冲或更换柱头滤板反冲或更换柱头滤板系统用系统用20%20%甲醇水
9、甲醇水,彻彻底置换后底置换后,接上色谱柱小接上色谱柱小流量反冲流量反冲第22页，共27页，编辑于2022年，星期二四.色谱柱的保存色谱柱的保存系统及填料系统及填料储存溶剂储存溶剂正相系统正相系统(CN,NH2,SiO2)(CN,NH2,SiO2)正己烷正己烷反相系统反相系统(C18,C8,C4,CN,NH2(C18,C8,C4,CN,NH2)纯甲醇或纯乙腈纯甲醇或纯乙腈特殊填料特殊填料(手性手性,专用专用柱柱)按说明书要求第23页，共27页，编辑于2022年，星期二 短期不用必须冲洗干净后保存短期不用必须冲洗干净后保存.长期不用每隔长期不用每隔23个月冲洗一次个月冲洗一次 防止强烈振动防止强烈
10、振动第24页，共27页，编辑于2022年，星期二正相系统换反相系统注意事项正相系统换反相系统注意事项 1.首先用正己烷(硅胶柱)将色谱系统包括正相柱平衡好(保证20分钟内基线平直,无峰出现)2.卸掉硅胶柱,封好保存,3.将进样阀与检测器短路,用异丙醇冲洗色谱系统 10分钟(流速1ml/min).在这期间空拨进样阀三次.4.换 甲 醇(或 已 睛)冲 洗 系 统20分 钟(流 速2ml/min).此期间空拨进样阀三次.5.安上反相色谱柱,流速调到1ml/min,用甲醇(或已睛)冲洗系统,直到系统平衡.6.进三针标准品,检验面积 保留时间是否重复,若不重复,继续冲洗直到重复.第25页，共27页，编
11、辑于2022年，星期二反相系统换正相系统注意事项反相系统换正相系统注意事项1.首先用甲醇(或已睛)将色谱系统包括反相柱平衡 好(保证20分钟内基线平直,无峰出现)2.卸掉反相柱,封好保存,3.将进样阀与检测器短路,用异丙醇冲洗色谱系统 10分钟(流速1ml/min).在这期间空拨进样阀三次.4.换正己烷(硅胶柱)冲洗系统20分钟(流速2ml/min).此间 空拨进样阀三次.5.安上硅胶色谱柱,流速调到1ml/min,用正己烷冲洗系统,直到系统平衡.6.进三针标准品检验面积 保留时间是否重复,若不重复,继续冲洗直到重复.第26页，共27页，编辑于2022年，星期二谢谢大家谢谢大家联系电话联系电话:0411-84732442:0411-84732442 传真传真:84732384 :84732384 第27页，共27页，编辑于2022年，星期二