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1、淋球菌培养及鉴定淋球菌培养及鉴定第1页，此课件共22页哦什么是淋球菌？什么是淋球菌？共同点：革兰阴性球菌、单个或成双排列、共同点：革兰阴性球菌、单个或成双排列、无芽孢、无鞭毛、有菌毛无芽孢、无鞭毛、有菌毛 触酶试验（触酶试验（+）氧化酶试验（氧化酶试验（+）不同点：对糖分解能力、硝酸盐还原能力和不同点：对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶合成酶 淋球菌即淋病奈瑟菌，属于奈瑟菌属。淋球菌即淋病奈瑟菌，属于奈瑟菌属。第2页，此课件共22页哦淋球菌形态淋球菌形态淋球菌，是一种革兰阴性双球菌，呈卵圆形淋球菌，是一种革兰阴性双球菌，呈卵圆形或肾形，成对排列，直径约或肾形，成对排列，直径约0608m
2、，常位于多形核白细胞的胞浆内，慢性期则，常位于多形核白细胞的胞浆内，慢性期则在细胞外。在细胞外。生长适宜温度为生长适宜温度为3738，淋菌不耐热，淋菌不耐热，干燥环境存活干燥环境存活12小时，小时，555分钟立即死亡，分钟立即死亡，附着在衣裤和卧具上的淋菌最多只能生存附着在衣裤和卧具上的淋菌最多只能生存24小小时，一般消毒剂易将其杀死。时，一般消毒剂易将其杀死。第3页，此课件共22页哦淋球菌形态淋球菌形态第4页，此课件共22页哦致病性致病性传染方式：成人传染方式：成人 性接触性接触 初生婴儿初生婴儿 患病母亲产道感染患病母亲产道感染 致病物质：菌毛致病物质：菌毛 外膜蛋白外膜蛋白PI：中性粒细
3、胞受损中性粒细胞受损 外膜蛋白外膜蛋白PII：黏附黏附 外膜蛋白外膜蛋白PIII：阻抑抗体活性阻抑抗体活性 IgA1酶酶:破坏粘膜局部抗体破坏粘膜局部抗体第5页，此课件共22页哦所致疾病所致疾病男性男性急性淋菌性前尿道炎急性淋菌性前尿道炎 女性女性淋菌性宫颈炎、尿道炎淋菌性宫颈炎、尿道炎 初生婴儿初生婴儿脓漏眼脓漏眼 发展：发展：男性男性后尿道炎、前列腺炎、精囊炎、后尿道炎、前列腺炎、精囊炎、附睾炎等附睾炎等 女性女性子宫内膜炎、输卵管炎等子宫内膜炎、输卵管炎等 后遗症：不育、不孕、异位妊娠后遗症：不育、不孕、异位妊娠第6页，此课件共22页哦淋球菌感染淋球菌感染淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖
4、系统感淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系统感染。染。不仅可引起男性尿道炎、女性宫颈或尿道炎，不仅可引起男性尿道炎、女性宫颈或尿道炎，还可经血行播散引起菌血症。还可经血行播散引起菌血症。临床表现因感染的人群不同，部位不同而有临床表现因感染的人群不同，部位不同而有差别差别第7页，此课件共22页哦实验室鉴别淋球菌实验室鉴别淋球菌直接涂片直接涂片：取尿道或宫颈脓性分泌物涂片，取尿道或宫颈脓性分泌物涂片，作革兰染色，镜下可见大量多形核白细胞，细作革兰染色，镜下可见大量多形核白细胞，细胞内可见数量不等的革兰阴性双球菌。涂片对胞内可见数量不等的革兰阴性双球菌。涂片对女性检出率低，有假阴性，必要时应作培养。女
5、性检出率低，有假阴性，必要时应作培养。细菌培养细菌培养：标本在选择性培养基上培养，可标本在选择性培养基上培养，可出现典型菌落，氧化酶试验阳性，镜检可见出现典型菌落，氧化酶试验阳性，镜检可见到革兰阴性双球菌，到革兰阴性双球菌，还还可用检测淋球菌可用检测淋球菌DNA，直接免疫荧光试，直接免疫荧光试验协助确诊。验协助确诊。第8页，此课件共22页哦淋球菌培养淋球菌培养淋球菌是淋病的病原菌，为实验室确诊淋球菌是淋病的病原菌，为实验室确诊淋病提供依据。（培养法为确诊淋病的淋病提供依据。（培养法为确诊淋病的金标准）金标准）淋球菌药敏试验，测定药物抑菌或杀菌淋球菌药敏试验，测定药物抑菌或杀菌能力，以便准确有效
6、利用药敏进行治疗。能力，以便准确有效利用药敏进行治疗。第9页，此课件共22页哦淋球菌培养条件淋球菌培养条件淋球菌的营养要求较复杂，所用的培养基淋球菌的营养要求较复杂，所用的培养基中应含有动物蛋白及细菌生长所需的各种中应含有动物蛋白及细菌生长所需的各种因子。目前国内常用的是血液琼脂或巧克因子。目前国内常用的是血液琼脂或巧克力琼脂。力琼脂。国外常用的培养基有国外常用的培养基有Thayer-Martin(T-M)培养培养基、基、NewYork City(NYC)培养基和培养基和Martin-Lewis(ML)培养基等培养基等。第10页，此课件共22页哦T-M培养基培养基T-M培养基是在培养基是在GC
7、基础培养基中，加入血红基础培养基中，加入血红蛋白蛋白(1%)、抗生素、抗生素(万古霉素万古霉素3g/ml、粘菌素、粘菌素7.5g/ml和制霉菌素和制霉菌素12.5g/ml)和淋球菌增菌剂，和淋球菌增菌剂，使绝大多数杂菌被抑制而淋球菌菌落长得较使绝大多数杂菌被抑制而淋球菌菌落长得较大，在乎皿中几乎呈纯培养，从而大大提高大，在乎皿中几乎呈纯培养，从而大大提高了由子宫颈、尿道，尤其是咽和直肠部位分了由子宫颈、尿道，尤其是咽和直肠部位分离出淋菌的阳性率。离出淋菌的阳性率。第11页，此课件共22页哦淋球菌培养条件淋球菌培养条件淋球菌对外环境变化颇为敏感，对寒冷和干燥抵淋球菌对外环境变化颇为敏感，对寒冷和
8、干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有足够的成功率，抗力很弱。因此，为了保证培养有足够的成功率，取材后应立即接种，标本离体时间越短越好。取材后应立即接种，标本离体时间越短越好。培养的最适温度为培养的最适温度为3537，超过，超过38.5或低或低于于30便生长不良。因此，孵育的温度要恒定。便生长不良。因此，孵育的温度要恒定。淋球菌为需氧菌，但最初从人体分离时，为促进淋球菌为需氧菌，但最初从人体分离时，为促进生长，需用生长，需用5%二氧化碳环境培养。二氧化碳环境培养。第12页，此课件共22页哦淋球菌培养关键淋球菌培养关键取材部位准确取材部位准确女性病人标本：取宫颈内膜分泌物女性病人标本：取宫颈内膜分
9、泌物 男性病人标本：取尿道口脓性分泌物男性病人标本：取尿道口脓性分泌物培养基预温培养基预温立即接种立即接种最好床边接种最好床边接种合适的培养基合适的培养基CO2培养培养第13页，此课件共22页哦淋球菌鉴定淋球菌鉴定分泌物分泌物直接涂片染色直接涂片染色 分离培养分离培养可疑菌落可疑菌落 涂片染色涂片染色生化反应生化反应初步报告初步报告生长特性生长特性第14页，此课件共22页哦平板生长特性平板生长特性经经24h48h的培养后，可形成圆形、凸起、湿润、的培养后，可形成圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色菌落，似露水珠，易乳化光滑、半透明或灰白色菌落，似露水珠，易乳化，直径为，直径为0.5mm 1.
10、0mm。第15页，此课件共22页哦平板生长形态平板生长形态第16页，此课件共22页哦镜检形态镜检形态从菌落上取材作涂片，革兰染色后可见到菌的从菌落上取材作涂片，革兰染色后可见到菌的大小及染色的深度有差异，排列也不一致，呈大小及染色的深度有差异，排列也不一致，呈典型革兰阴性双球菌。典型革兰阴性双球菌。第17页，此课件共22页哦镜检形态镜检形态第18页，此课件共22页哦镜检形态镜检形态来自泌尿生殖道符合初步鉴定标准的分离株，来自泌尿生殖道符合初步鉴定标准的分离株，一般可诊断为淋球菌，准确率达一般可诊断为淋球菌，准确率达98%。对于菌落形态不典型的分离株，来自咽部、对于菌落形态不典型的分离株，来自咽
11、部、眼睛或其他泌尿生殖道外部位的分离株，应眼睛或其他泌尿生殖道外部位的分离株，应作确诊试验。作确诊试验。第19页，此课件共22页哦鉴定试验鉴定试验氧化酶试验氧化酶试验糖分解试验（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖）糖分解试验（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖）30过氧化氢试验过氧化氢试验第20页，此课件共22页哦鉴定依据鉴定依据形态染色典型：革兰阴性球菌形态染色典型：革兰阴性球菌培养特性：光滑、湿润、易乳化菌落培养特性：光滑、湿润、易乳化菌落生化反应：氧化酶阳性、仅分解葡萄糖生化反应：氧化酶阳性、仅分解葡萄糖（麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖均不分解）（麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖均不分解）第21页，此课件共22页哦奈瑟菌属鉴定奈瑟菌属鉴定菌名生长产酸硝酸盐还原DNA酶巧克力平皿上特点巧克力或血琼脂(22)营养琼脂(35)葡萄糖麦芽糖乳糖蔗糖果糖淋病奈瑟菌-+-光滑,灰白色,透明脑膜炎奈瑟菌-+-光滑,灰,无色,透明,个别淡黄粘膜奈瑟菌+-+-黄绿,光滑卡他布兰汉d+-+灰白棕色、易乳化奈瑟菌属与布兰汉菌属的鉴别奈瑟菌属与布兰汉菌属的鉴别注意：注意：d:表示不定表示不定第22页，此课件共22页哦