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1、紫外可见分光光度计的使用第1页，共42页，编辑于2022年，星期二主要内容主要内容1、工作原理及仪器组成2、分光光度计的使用波长扫描定量测定3、注意事项第2页，共42页，编辑于2022年，星期二第3页，共42页，编辑于2022年，星期二物质的颜色与吸收光的关系：当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种颜色的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示出一定的颜色。物质所显示的颜色是吸收光的互补色。一、工作原理及仪器组成一、工作原理及仪器组成第4页，共42页，编辑于2022年，星期二互互补补色色原原理理植物叶子呈现绿色是因植物叶子呈现绿色是因为植物中存在一种吸收为植物中存在一种吸收蓝紫光和红光的载体蓝
2、紫光和红光的载体叶绿素叶绿素颜颜色色的的产产生生第5页，共42页，编辑于2022年，星期二完全吸收完全吸收完全透过完全透过吸收黄色光吸收黄色光光谱示意光谱示意表观现象示意表观现象示意复合光复合光第6页，共42页，编辑于2022年，星期二 利用一定频率的紫外-可见光照射分析物，它将有选择地被吸收。吸收光谱可以反映出物质的特征。溶液对光的作用示意图物质对光的选择性吸收溶液对光的作用物质对光的选择性吸收溶液对光的作用 第7页，共42页，编辑于2022年，星期二I0入射光辐射强度I透射光辐射强度T透射比a吸光系数摩尔吸光系数光吸收遵循朗伯-比尔定律：溶液对光吸收过程第8页，共42页，编辑于2022年，
3、星期二0.575光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示仪器组成-单光束分光光度计单光束分光光度计第9页，共42页，编辑于2022年，星期二双光束分光光度计双光束分光光度计比比值值光源光源单色单色器器吸收池吸收池检测器检测器显示显示光束分裂器光束分裂器第10页，共42页，编辑于2022年，星期二组成：光源、单色器、样品池、检测器光源、单色器、样品池、检测器1光源：能提供连续的辐射；光强度足够大；在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；光谱范围宽；使用寿命长，价格低。钨灯可见光区3202500nm氢灯或氘灯紫外光区195375nmU3010（碘钨灯、氘灯）波长范围（碘钨灯、氘灯）波
4、长范围190-900nm第11页，共42页，编辑于2022年，星期二2 2单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源的混合光分解为单色光并能随意改变波长。它的主要组成部件和作用是：入射狭缝限制杂散光进入。色散元件即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光分解为单色光。准直镜把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上。出射狭缝只让特定波长的光射出单色器。第12页，共42页，编辑于2022年，星期二3.3.吸收池吸收池 玻璃由于吸收紫外UV光，仅适用于可见光区；石英适用于紫外和可见光区4 4检测器
5、：将光信号转变为电信号的装置检测器：将光信号转变为电信号的装置光电管光电倍增管二极管阵列检测器5 5记录装置：讯号处理和显示系统记录装置：讯号处理和显示系统第13页，共42页，编辑于2022年，星期二第14页，共42页，编辑于2022年，星期二Slit1不存在，Mirror取代了光栅grating1Grating2variable-pitchaberration-correcteddiffractiongrating旋转镜将光分成两束，分别通过参比池和样品池，然后聚集在PMT第15页，共42页，编辑于2022年，星期二第16页，共42页，编辑于2022年，星期二开始方法设定样品名输入将空白样品
6、分别放入参比池和样品池进行用户基线校正将样品放入样品池开始测量开始测量打印数据二 分光光度计的使用-波长扫描第17页，共42页，编辑于2022年，星期二启动启动UV Solution软件软件1.打开仪器主机电源。用鼠标点击Windows开始菜单中的HitachiApplications选项中的UVSolutions2.0选项。或者直接在桌面上双击UVSolution图标。第18页，共42页，编辑于2022年，星期二2运行UVSolution软件。软件将自动配置计算机的串行口（RS232Port）见图第19页，共42页，编辑于2022年，星期二仪器在初始化过程中进行如下自检工作：仪器在初始化过程
7、中进行如下自检工作：ROM检测RAM检测波长步进电机运转检测氘灯点亮检测钨灯点亮检测仪器波长校正第20页，共42页，编辑于2022年，星期二3 仪器主机开始初始化。见图第21页，共42页，编辑于2022年，星期二4 仪器主机初始化完毕，进入工作状态。第22页，共42页，编辑于2022年，星期二5 测量参数设置1在Edit菜单中选择Method选项，或按按钮。出现下列窗口。第23页，共42页，编辑于2022年，星期二General:总体设置页面总体设置页面Measurement测量:Wavelengthscan波长扫描Timescan时间扫描Photometry定波长测量Operator操作者:
8、输入操作者的姓名Instrument仪器:仪器型号由软件自动从仪器主机获得。UseSampleTable使用样品表:选择是否使用样品表。Comments备注:填写一些备注信息。Load按钮:用于装载原来保存的方法文件。Save按钮:保存当前的设置参数。SaveAs按钮:将当前设置参数另存为一个方法文件。第24页，共42页，编辑于2022年，星期二Instrument仪器参数设置页面仪器参数设置页面第25页，共42页，编辑于2022年，星期二Datamode读数显示方式，选择Abs吸光度，波长扫描的起止范围一般为190-800，狭缝值一般为2Light一般选择“Auto”第26页，共42页，编辑
9、于2022年，星期二Monitor显示页面显示页面第27页，共42页，编辑于2022年，星期二Processing数据处理页面数据处理页面第28页，共42页，编辑于2022年，星期二Report报告结果页面报告结果页面第29页，共42页，编辑于2022年，星期二样品名设置，备注信息及文件名输入样品名设置，备注信息及文件名输入第30页，共42页，编辑于2022年，星期二基线校正基线校正用户基线校正方法：可将scanspeed设小一些；进行样品扫描时，可设大一些。将空白样品分别放入样品室的参比光路和样品光路。按按钮系统基线校正方法。使用空气作为参比和样品。按按钮出对话框见图，选择System后按O
10、K按钮，进行系统基线校正。第31页，共42页，编辑于2022年，星期二测量测量有两种方法可以开始测量：使用菜单方式选择Spectrophotometer菜单下Start选项开始测量使用按钮方式：按按钮开始测量如果要终止扫描按按钮。第32页，共42页，编辑于2022年，星期二开始方法设定样品名输入将空白样品分别放入参比池和样品池将样品放入样品池开始测量开始测量打印数据进行用户基线校正二 分光光度计的使用-光度法第33页，共42页，编辑于2022年，星期二测量参数设置测量参数设置在Edit菜单中选择Method选项。出现下列设置窗口.第34页，共42页，编辑于2022年，星期二具体操作程序Meth
11、od:1.general:Measurement测量方式选择Photometry（光度计测量）2.Quantitation定量参数设置页面：第35页，共42页，编辑于2022年，星期二在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择“1storder”，“2storder”，“3storder”，也可以不校准。在concertration中键入标准浓度单位。3.Instrument第36页，共42页，编辑于2022年，星期二4standards标准参数设置键入标系的样品浓度及名称第37页，共42页，编辑于2022年，星期二5 吸光度自动校零吸光度自动校零 在开始测
12、试前，需要进行吸光度校零。在样品室参比和样品光路中分别放入空白样品。按按钮 进行吸光度校零。6 在wavelength中设定扫描的最大吸收波长，7 放入标样，选中第一个标样，点measure依次测定完成 后自动给出标准曲线。8 选择SAMPLE进行样品测定，全部测定完后点击END，此 时自动生成一个文件，打开此文件，另存为所需的文件名。9 关机时，先退出UVsolution，再关电脑，最后关光度计上的power。第38页，共42页，编辑于2022年，星期二三三 注意事项注意事项1.1.开机预热开机预热1515分钟左右。分钟左右。2.2.测定时应注意：测定时应注意：参照池和吸收池应是一对经校正好
13、的匹配的吸收池，材料和规格一致。使用前后应将洗手池洗净，测量时不能用手接触窗口。已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能加热，以免引起光程长度上的改变。第39页，共42页，编辑于2022年，星期二3.测量条件的选择：测量条件的选择：选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收,为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波长的入射光。控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.20.7读数范围内时,测量的准确度较高.选择参比溶液：参比溶液是用来调节仪器工作零点的。若样品溶液，试剂，显色剂无色可用蒸馏水作参比溶液；反之应采用不加显色剂的样品液作参比溶液。
14、4.用完后先关程序，再关仪器开关，关电源，关闭计算机。用完后先关程序，再关仪器开关，关电源，关闭计算机。5.正确登记，将仪器及实验台擦干净。正确登记，将仪器及实验台擦干净。第40页，共42页，编辑于2022年，星期二思考题思考题1.分光光度计由哪几部分组成？设计其光路图。2.紫外可见分光光度计对光源的要求是什么？一般采用哪几种光源，各光源的波长范围是什么？3.比色皿一般由什么材料制成？有哪几种规格？做实验时，你是如何选择比色杯的规格及材料的？4.为什么测定时使用参比池？参比溶液怎么选择？5.在进行波长扫描与光度测定时需要设置哪些参数？第41页，共42页，编辑于2022年，星期二第42页，共42页，编辑于2022年，星期二