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1、没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任上上课课前：前：vv每每组组清洗一个清洗一个50ml容量瓶容量瓶vv用用蒸蒸馏馏水水润润洗洗后后备备用用vv不用烘干不用烘干没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任两水相系统中蛋白质两水相系统中蛋白质分配系数的测定分配系数的测定指导教师：龚小雁指导教师：龚小雁指导教师：龚小雁指导教师：龚小雁 张秀萍张秀萍张秀萍张秀萍没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责
2、任v了解蛋白质在两水相系统中分配系数的测定方法。了解蛋白质在两水相系统中分配系数的测定方法。一、实验目的和要求一、实验目的和要求没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任本实验中：本实验中：二、实验原理二、实验原理两水相系统：两水相系统：PEG/(NH4)2SO4分配对象：分配对象：糖化糖化酶酶蛋白含量测定方法：蛋白含量测定方法：考考马马斯亮斯亮蓝蓝比色法比色法没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任两水相分配：两水相分配：p在两水相系统中，生物物质与成相组分之
3、间通过疏水键、氢键和离子在两水相系统中，生物物质与成相组分之间通过疏水键、氢键和离子键等相互作用而不同程度地分配在两相中。键等相互作用而不同程度地分配在两相中。p分配系数分配系数K：当萃取达到平衡时，蛋白质在上下两相中的浓度之比，对于固定的相当萃取达到平衡时，蛋白质在上下两相中的浓度之比，对于固定的相系统，系统，K为常数。为常数。K=C上上/C下下 p相比相比R：上下相体积比。上下相体积比。R=V上上/V下下二、实验原理二、实验原理没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任二、实验原理二、实验原理糖化酶：糖化酶：Z生物大分子蛋白
4、，生物大分子蛋白，-,-葡萄糖水解葡萄糖水解酶酶。Z黑曲霉黑曲霉经发经发酵制得酵制得。Z广泛用于酒、醋、味精等广泛用于酒、醋、味精等发发酵工酵工业业中起糖化作用，将淀粉中起糖化作用，将淀粉转转化化为为葡萄糖葡萄糖。没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任考考马马斯亮斯亮蓝蓝比色法：比色法：v常用的蛋白含量常用的蛋白含量检测检测方法。方法。v考考马马斯亮斯亮兰兰G-250是一种染料，酸性溶液中呈是一种染料，酸性溶液中呈棕棕红红色色，与蛋白，与蛋白质结质结合后合后转为转为蓝蓝色色，595nm波波长长下有最大吸收下有最大吸收值值。低
5、。低浓浓度范度范围围内（内（0.011.0mg/ml），与蛋白），与蛋白质浓质浓度的关系服从比度的关系服从比尔尔定定律。律。二、实验原理二、实验原理没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任v试剂试剂：PEG400、蒸、蒸馏馏水、水、(NH4)2SO4、糖化酶、考马糖化酶、考马斯亮蓝、牛血清蛋白等。斯亮蓝、牛血清蛋白等。v器材：器材：移液管、刻度离心管移液管、刻度离心管+盖子、台秤、离心机、盖子、台秤、离心机、试试管、管、50ml容量瓶、恒温水浴容量瓶、恒温水浴锅锅、分光光度、分光光度计计+比比色皿等。色皿等。三、实验器材与试剂
6、三、实验器材与试剂没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任（一）试剂配制（一）试剂配制（已配好）（已配好）1.考马斯亮蓝考马斯亮蓝G-250溶液：溶液：精确称取精确称取50mg考马斯亮蓝，溶于考马斯亮蓝，溶于10ml 95%乙醇中，并加入乙醇中，并加入50ml 85%浓磷酸，用浓磷酸，用H2O稀释定容至稀释定容至500ml。2.牛血清蛋白溶液牛血清蛋白溶液（BSA）：）：精确称取精确称取0.012g左右的牛血清蛋白，加左右的牛血清蛋白，加入入0.105gNaCl,溶于少量蒸馏水中，然后，稀释定容至溶于少量蒸馏水中，然后，稀释定
7、容至100ml，配成，配成 120 g/ml的牛血清蛋白原液。的牛血清蛋白原液。四、操作方法四、操作方法没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任（二）蛋白质在两相中的分配（二）蛋白质在两相中的分配10ml刻度刻度离心离心试试管管(NH4)2SO4固体固体1.30克克PEG4002.00克克糖化糖化酶酶2.00ml 水水台秤台秤总重总重8.00g振摇混和振摇混和(固体充分溶解固体充分溶解)离心离心 3000转转/分分5min求相比：求相比：R=V上上/V下下求分配系数求分配系数：K=C上上/C下下四、操作方法四、操作方法平衡平衡
8、没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任（三）考马斯亮蓝比色法测定蛋白质含量（三）考马斯亮蓝比色法测定蛋白质含量1.制作标准曲线：制作标准曲线：在试管中，按下表在试管中，按下表精确加样精确加样，反应检测。，反应检测。2.两相中取样及蛋白测定：两相中取样及蛋白测定：上相液：上相液：吸取吸取0.5ml，蒸馏水定容至，蒸馏水定容至50ml，取，取1ml稀释液于试管中，按下稀释液于试管中，按下表反应检测。表反应检测。下相液：下相液：吸取吸取0.1ml于试管中，加入于试管中，加入0.9ml水，按下表反应检测。水，按下表反应检测。标标准曲
9、准曲线线样样品品检测检测BSA/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 上相稀上相稀释释液液1.0ml下相稀下相稀释释液液1.0ml H2O/ml1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0加考加考马马斯亮斯亮兰兰5.00ml，混匀，混匀，251保温保温10分分钟钟，冷却，冷却 OD/595nm蛋白量蛋白量 g 空白对照空白对照没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任v绘制标准曲线：绘制标准曲线：v标准曲线方程（线性回归）：标准曲线方程（线性回归）：蛋白量：蛋白量：y=ax+b上相：上相：C上上=(ax1+b)*100
10、 ug/ml下相：下相：C下下=(ax2+b)*10 ug/ml 分配系数的计算：分配系数的计算：OD蛋蛋白白含含量量/g分配系数分配系数 K=C上上/C下下没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任操作注意点操作注意点p蛋白质分配：蛋白质分配：1.称重时，按顺序加入物料，称重时，按顺序加入物料，中间不要再去皮中间不要再去皮，最终控制，最终控制累积总重累积总重8.00g。2.橡皮塞不干净，用保鲜膜包裹下。橡皮塞不干净，用保鲜膜包裹下。3.离心前试管必须要两两称重离心前试管必须要两两称重平衡。平衡。p取样：取样：3.不要取相界面附
11、近的样品。不要取相界面附近的样品。4.取下相样品液时，先用滴管将上相完全吸掉，并吸掉部分下相后，再取样。取下相样品液时，先用滴管将上相完全吸掉，并吸掉部分下相后，再取样。5.避免将上相混入下相。避免将上相混入下相。p检测：检测：6.试管中加完物料后，要混和均匀。试管中加完物料后，要混和均匀。7.保温结束后，立即放入冷水中，待测。保温结束后，立即放入冷水中，待测。3.分光光度计空白参比管分光光度计空白参比管T模式调模式调100%，A 模式调模式调0。没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任（一）（一）预习预习1.配制两水相萃取系
12、配制两水相萃取系统时统时，PEG400液体的加量能否改液体的加量能否改为为量取相量取相应应的体的体积积？说说明理明理由。由。2.试试述使用台式离心机的操作述使用台式离心机的操作顺顺序。序。3.用比色法分析上下相蛋白用比色法分析上下相蛋白质浓质浓度度时时，如何精确吸出在同一离心，如何精确吸出在同一离心试试管中的上下两相管中的上下两相？写出操作步？写出操作步骤骤。（二）（二）实验结实验结果和果和讨论讨论1.将比色分析的操作将比色分析的操作过过程及程及结结果列成表格，作出果列成表格，作出标标准曲准曲线线，线线性回性回归归。2.计计算上下相蛋白算上下相蛋白质浓质浓度、分配系数度、分配系数K、相比、相比
13、R，计计算两相中算两相中PEG和和(NH4)2SO4的含的含量。量。3.在配制两水相系在配制两水相系统时统时，为为什么必什么必须须充分混合？混合不充分会充分混合？混合不充分会带带来什么影响？来什么影响？五、思考题五、思考题没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任pM：系系统组统组成成pT：平衡平衡时时上相上相组组成成pB：平衡平衡时时下相下相组组成成pTMB：系系线线同一条系同一条系线线上各点上各点系系统统组组成不同成不同，但平衡后分成，但平衡后分成的的两相两相组组成相同成相同，体，体积积比比不同，上下相体不同，上下相体积积比：比：VT/VB =BM/MT=RQ/%P/%没有明确的价值取向和人生目标，实现自我人生价值就无从谈起。人生价值就是人生目标，就是人生责任。每承担一次责任值日生值日生v第九第九组组 v第十第十组组v第十一第十一组组v第十二第十二组组擦干净实验桌面擦干净实验桌面整理好试剂药品整理好试剂药品扫地、拖地扫地、拖地