细菌学检验概论课件.ppt

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1、临床细菌学检验概述临床细菌学检验概述 Introduction on Clinic and Diagnostic BacteriologyIntroduction on Clinic and Diagnostic Bacteriology江苏大学医学院检验江苏大学医学院检验学系学系病原病原生物学教研室生物学教研室周周 天天 戟戟 教教 授授1/13/20231本章内容本章内容第一节第一节第一节第一节 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则第二节第二节第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查细菌的形态学检查细菌的形态学检查第三节第三节第三节第三节

2、细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定第四节第四节第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法1/13/20232第一节第一节 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则一、标本采集的一般原则一、标本采集的一般原则一、标本采集的一般原则一、标本采集的一般原则1 1早期采集早期采集早期采集早期采集 2 2无菌操作无菌操作无菌操作无菌操作 3 3根据目的菌的特性用不同的方法采集根据目的菌的特性用不同的方法采集根据目的菌的特性用不同的方法采集根据目的菌的特性用不同的方法采集4 4采集量适当采集量适当采集量适当采

3、集量适当 5 5注意生物安全注意生物安全注意生物安全注意生物安全 1/13/20233第一节第一节 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则二、标本的处理二、标本的处理二、标本的处理二、标本的处理1.1.对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检2.2.其他各种标本采集后最好在其他各种标本采集后最好在其他各种标本采集后最好在其他各种标本采集后最

4、好在2h2h之内送到实验室之内送到实验室之内送到实验室之内送到实验室3.3.若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存4.4.一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过超过超过超过24h24h1/13/20234.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全病人标本中可

5、能含有大量致病菌，必须注意安全防护防护防护防护.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出好，防止送检过程中倒翻或碰破流出好，防止送检过程中倒翻或碰破流出好，防止送检过程中倒翻或碰破流出.对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须按规定包装，由专人运送按规定包装，由专人运送按规定包装，由专人运送按规定包装，由专人运

6、送.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送有时可直接用抽取标本的注射器运送有时可直接用抽取标本的注射器运送有时可直接用抽取标本的注射器运送1/13/20235药物敏感试验药物敏感试验直接涂片镜检直接涂片镜检分离培养分离培养形态学形态学试验试验生化试验生化试验免疫学试验免疫学试验动物试验动物试验明确诊断明确诊断初步诊断初步诊断免疫学试验免疫学试验分子生物学技术分子生物学技术其他检测技术其他检测技术细菌感染的检验程序细菌感染的检验程序辅助

7、诊断辅助诊断1/13/20236第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查1.1.镜检可以了解有无细菌及大致的菌量镜检可以了解有无细菌及大致的菌量镜检可以了解有无细菌及大致的菌量镜检可以了解有无细菌及大致的菌量2.2.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊断和治疗疾病有一定的参考意义断和治疗疾病有一定的参考意义断和治疗疾病有一定的参考意义断和治疗疾病有一定的参考意义3.3.根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的根据细

8、菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的初步识别和分类，用于细菌鉴定初步识别和分类，用于细菌鉴定初步识别和分类，用于细菌鉴定初步识别和分类，用于细菌鉴定细菌形态学检查的意义细菌形态学检查的意义细菌形态学检查的意义细菌形态学检查的意义1/13/20237不染色标本的检查：初步观察、细菌动力不染色标本的检查：初步观察、细菌动力单染色法：细菌形态单染色法：细菌形态复染色法：细菌形态、结构与鉴别复染色法：细菌形态、结构与鉴别 革革兰兰染色法（染色法（Gram stain）抗酸染色法（抗酸染色法（acid-fast stain）特殊染色法：负染色、鞭毛染色特殊染色法

9、：负染色、鞭毛染色细菌的形态学检查法细菌的形态学检查法1/13/20238一、不染色标本一、不染色标本1.1.细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动力细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动力细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动力细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况及运动状况及运动状况及运动状况2.2.常用的方法有压滴法和悬滴法常用的方法有压滴法和悬滴法常用的方法有压滴法和悬滴法常用的方法有压滴法和悬滴法 有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显有动力：可看到细菌自一处移至另一处，

10、有明显有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显 的方向性位移的方向性位移的方向性位移的方向性位移 无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无 位置的改变位置的改变位置的改变位置的改变3.3.有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定 如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似流星状运动的细菌，如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭

11、似流星状运动的细菌，如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似流星状运动的细菌，如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似流星状运动的细菌，制动试验阳性，可初步推断为制动试验阳性，可初步推断为制动试验阳性，可初步推断为制动试验阳性，可初步推断为“疑似疑似疑似疑似O1O1群霍乱弧菌群霍乱弧菌群霍乱弧菌群霍乱弧菌”。1/13/20239二、染色标本二、染色标本（一）常用染料（一）常用染料（一）常用染料（一）常用染料1 1碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等2 2酸性染料：有伊红、刚果红等酸性染料：有伊红、刚果红

12、等酸性染料：有伊红、刚果红等酸性染料：有伊红、刚果红等3 3复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料有荧光标记的抗体等；荧光染料有荧光标记的抗体等；荧光染料有荧光标记的抗体等；荧光染料有荧光标记的抗体 1/13/202310（二）常用的染色方法（二）常用的染色方法1 1革兰染色（革兰

13、染色（革兰染色（革兰染色（gram staingram stain）n n方法：方法：方法：方法：1 1、结晶紫初染、结晶紫初染、结晶紫初染、结晶紫初染 1 min 1 min 2 2、卢戈氏碘液媒染、卢戈氏碘液媒染、卢戈氏碘液媒染、卢戈氏碘液媒染 1 min 1 min 3 3、9595酒精脱色酒精脱色酒精脱色酒精脱色 30sec 30sec1 min 1 min 4 4、稀释石炭酸复红复染、稀释石炭酸复红复染、稀释石炭酸复红复染、稀释石炭酸复红复染 1 min 1 min原理：原理：原理：原理：n nG+G+等电点低，带正电荷的碱性燃料作色等电点低，带正电荷的碱性燃料作色等电点低，带正电荷

14、的碱性燃料作色等电点低，带正电荷的碱性燃料作色牢固牢固牢固牢固n nG+G+细胞壁肽聚糖层多，细胞壁肽聚糖层多，细胞壁肽聚糖层多，细胞壁肽聚糖层多，G-G-细胞壁脂质含细胞壁脂质含细胞壁脂质含细胞壁脂质含量高量高量高量高n nG+G+含有较多核糖核酸镁盐，与结晶紫、含有较多核糖核酸镁盐，与结晶紫、含有较多核糖核酸镁盐，与结晶紫、含有较多核糖核酸镁盐，与结晶紫、碘结合成大分子复合物碘结合成大分子复合物碘结合成大分子复合物碘结合成大分子复合物意义：意义：意义：意义：n n鉴定细菌鉴定细菌鉴定细菌鉴定细菌n n与致病性有关与致病性有关与致病性有关与致病性有关n n选择抗菌药物参考选择抗菌药物参考选择

15、抗菌药物参考选择抗菌药物参考革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌革兰阳性球菌革兰阳性球菌革兰阳性球菌革兰阳性球菌1/13/202311（二）常用的染色方法（二）常用的染色方法2 2抗酸染色（抗酸染色（抗酸染色（抗酸染色（acid-fast stainacid-fast stain）方法：方法：方法：方法：1 1、石炭酸复红初染加热、石炭酸复红初染加热、石炭酸复红初染加热、石炭酸复红初染加热35min35min，水洗，水洗，水洗，水洗2 2、3%5%3%5%盐酸酒精脱色盐酸酒精脱色盐酸酒精脱色盐酸酒精脱色30s30s，水洗，水洗，水洗，水洗3 3、碱性美蓝复染、碱性美蓝复染、碱性美蓝

16、复染、碱性美蓝复染30s30s，水洗。，水洗。，水洗。，水洗。原理：原理：原理：原理：分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，其中的分枝菌酸与石炭酸复红结合成其中的分枝菌酸与石炭酸复红结合成其中的分枝菌酸与石炭酸复红结合成其中的分枝菌酸与石炭酸复红结合成牢固的复合物，能抵抗脱色牢固的复合物，能抵抗脱色牢固的复合物，能抵抗脱色牢固的复合物，能抵抗脱色意义：意义：意义：意义：可将细菌分为两大类：可将细菌分为两大类：可将细菌分为两大类：可将细菌分为两大类：-抗酸性细菌抗酸性细菌抗酸性细菌抗酸性细菌 -非抗酸性细菌非抗酸性

17、细菌非抗酸性细菌非抗酸性细菌1/13/202312（二）常用的染色方法（二）常用的染色方法3 3荧光染色荧光染色荧光染色荧光染色 （1 1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。细菌鉴定中有很大的实用价值。细菌鉴定中有很大的实用价值。细菌鉴定中有很大的实用价值。（2 2）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及）主要用于结核分枝杆菌、麻风分

18、枝杆菌、白喉棒状杆菌及）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。痢疾志贺菌等的检测。痢疾志贺菌等的检测。痢疾志贺菌等的检测。4.4.鞭毛染色：可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，鞭毛染色：可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，鞭毛染色：可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，鞭毛染色：可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。5.5.异染颗粒染色：用于白喉棒状杆菌染色。异染颗粒染

19、色：用于白喉棒状杆菌染色。异染颗粒染色：用于白喉棒状杆菌染色。异染颗粒染色：用于白喉棒状杆菌染色。1/13/202313（二）常用的染色方法（二）常用的染色方法6.6.芽胞染色：芽胞染色：芽胞染色：芽胞染色：7.7.墨汁染色墨汁染色墨汁染色墨汁染色:一般用于新型隐一般用于新型隐一般用于新型隐一般用于新型隐球菌检查球菌检查球菌检查球菌检查1/13/202314第三节第三节第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定选择培养基选择培养基选择培养基选择培养基接种接种接种接种选择培养方法选择培养方法选择培养方法选择培养方法选择可疑菌落选择可疑菌落选择可

20、疑菌落选择可疑菌落选择鉴定方法选择鉴定方法选择鉴定方法选择鉴定方法1/13/202315细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定一、培养基的种类和选择一、培养基的种类和选择一、培养基的种类和选择一、培养基的种类和选择 培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择二、分离及培养二、分离及培养二、分离及培养二、分离及培养 细菌的分离、细菌培养方法细菌的分离、细菌培养方法细菌的分离、细菌培养方法细菌的分离、细菌培养方法三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定三、生

21、化反应和鉴定 碳水化合物的代谢试验碳水化合物的代谢试验碳水化合物的代谢试验碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验碳源和氮源利用试验碳源和氮源利用试验碳源和氮源利用试验1/13/202316一、培养基的种类和选择一、培养基的种类和选择培养基（培养基（culture medium）是由人工方法配制而是由人工方法配制而成的，专供微生物生长成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物繁殖使用的混合营养物制品。制品。1/13/202317(一一)培养基的组成成分培养基的组成成分1 1营养物质营养物质营养物质营

22、养物质 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子2 2凝固物质凝固物质凝固物质凝固物质 琼脂、明胶、卵白琼脂、明胶、卵白琼脂、明胶、卵白琼脂、明胶、卵白3 3抑制剂和指示剂抑制剂和指示剂抑制剂和指示剂抑制剂和指示剂1/13/202318（二）培养基种类（二）培养基种类-按成分和培养目的按成分和培养目的按成分和培养目的按成分和培养目的1 1基础

23、培养基（基础培养基（基础培养基（基础培养基（based mediumbased medium）2 2营养培养基（营养培养基（营养培养基（营养培养基（nutrient mediumnutrient medium）3 3鉴别培养基（鉴别培养基（鉴别培养基（鉴别培养基（differential mediumdifferential medium）4 4选择培养基（选择培养基（选择培养基（选择培养基（selective mediumselective medium）5 5特殊培养基（特殊培养基（特殊培养基（特殊培养基（special mediumspecial medium）1/13/2023191基

24、础培养基基础培养基 含有基础生长所需的基本含有基础生长所需的基本含有基础生长所需的基本含有基础生长所需的基本营养成分，最常用的是肉浸液，营养成分，最常用的是肉浸液，营养成分，最常用的是肉浸液，营养成分，最常用的是肉浸液，俗称肉汤（俗称肉汤（俗称肉汤（俗称肉汤（brothbroth），主要成），主要成），主要成），主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。分含牛肉浸液和蛋白胨。分含牛肉浸液和蛋白胨。分含牛肉浸液和蛋白胨。用于培养一般细菌用于培养一般细菌用于培养一般细菌用于培养一般细菌1/13/2023202营养培养基（营养培养基（nutrient medium）最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板等，最常用的是

25、血琼脂平板、巧克力血平板等，用于培养营养要求较高的病原性细菌用于培养营养要求较高的病原性细菌1/13/202321 3鉴别培养基（鉴别培养基（differential medium）在培养基中加入特定底在培养基中加入特定底物和指示剂，观察细菌不物和指示剂，观察细菌不同的代谢产物，以鉴别细同的代谢产物，以鉴别细菌。如糖发酵管、克氏双菌。如糖发酵管、克氏双糖铁琼脂（糖铁琼脂（KIA）、伊红）、伊红-镁蓝琼脂和动力镁蓝琼脂和动力-吲哚吲哚-尿尿素（素（MIU）培养基等。）培养基等。1/13/2023224选择培养基（选择培养基（selective medium）在培养基中加入抑制剂抑在培养基中加入抑

26、制剂抑在培养基中加入抑制剂抑在培养基中加入抑制剂抑制杂菌，以利目的细菌生制杂菌，以利目的细菌生制杂菌，以利目的细菌生制杂菌，以利目的细菌生长，如长，如长，如长，如SSSS琼脂使致病的沙琼脂使致病的沙琼脂使致病的沙琼脂使致病的沙门菌、志贺菌容易分离到门菌、志贺菌容易分离到门菌、志贺菌容易分离到门菌、志贺菌容易分离到1/13/2023235特殊培养基（特殊培养基（special medium）疱肉培养基用于培养厌疱肉培养基用于培养厌氧菌氧菌巯基乙醇酸纳培养基用巯基乙醇酸纳培养基用于培养细菌于培养细菌L型型1/13/202324（二）（二）培养基种类培养基种类-按物理性状按物理性状按物理性状按物理性

27、状l l液体培养基：增菌、制备产物、生化反应等液体培养基：增菌、制备产物、生化反应等液体培养基：增菌、制备产物、生化反应等液体培养基：增菌、制备产物、生化反应等l l固体培养基固体培养基固体培养基固体培养基:琼脂平板琼脂平板琼脂平板琼脂平板:分离培养分离培养分离培养分离培养 琼脂琼脂琼脂琼脂斜面斜面斜面斜面:菌种短期保存、菌种短期保存、菌种短期保存、菌种短期保存、生化反应等生化反应等生化反应等生化反应等l l半固体培养基半固体培养基半固体培养基半固体培养基:动力试验、动力试验、动力试验、动力试验、菌种长期保存、菌种长期保存、菌种长期保存、菌种长期保存、生化反应生化反应生化反应生化反应等等等等1

28、/13/202325（三）培养基的选择（三）培养基的选择目的病原菌：目的病原菌：伊红美蓝伊红美蓝伊红美蓝伊红美蓝/麦康凯用麦康凯用麦康凯用麦康凯用于筛选革兰阴性杆菌，血平板用于于筛选革兰阴性杆菌，血平板用于于筛选革兰阴性杆菌，血平板用于于筛选革兰阴性杆菌，血平板用于分离病原性球菌分离病原性球菌分离病原性球菌分离病原性球菌。标本来源：标本来源：从血液、骨髓中分离从血液、骨髓中分离从血液、骨髓中分离从血液、骨髓中分离病原菌先用血液肉汤增菌，粪便病原菌先用血液肉汤增菌，粪便病原菌先用血液肉汤增菌，粪便病原菌先用血液肉汤增菌，粪便标本分离培养肠道病原菌用标本分离培养肠道病原菌用标本分离培养肠道病原菌用

29、标本分离培养肠道病原菌用SSSS琼琼琼琼脂，脂，脂，脂，1/13/202326二、分离及培养二、分离及培养1 1平板划线分离法平板划线分离法平板划线分离法平板划线分离法2 2斜面接种法斜面接种法斜面接种法斜面接种法3 3液体接种法液体接种法液体接种法液体接种法（一）细菌的接种（一）细菌的接种4 4穿刺接种法穿刺接种法穿刺接种法穿刺接种法5 5倾注平板法倾注平板法倾注平板法倾注平板法6 6涂布接种法涂布接种法涂布接种法涂布接种法1/13/202327（二）细菌培养方法（二）细菌培养方法 1 1一般（需氧）培养法：普通温一般（需氧）培养法：普通温一般（需氧）培养法：普通温一般（需氧）培养法：普通温

30、箱箱箱箱 2 2二氧化碳培养法二氧化碳培养法二氧化碳培养法二氧化碳培养法 ：烛缸法、二：烛缸法、二：烛缸法、二：烛缸法、二氧化碳培养箱氧化碳培养箱氧化碳培养箱氧化碳培养箱 3 3厌氧培养法：厌氧袋厌氧培养法：厌氧袋厌氧培养法：厌氧袋厌氧培养法：厌氧袋/罐（化学）罐（化学）罐（化学）罐（化学）法、厌氧培养箱（物理学法）、法、厌氧培养箱（物理学法）、法、厌氧培养箱（物理学法）、法、厌氧培养箱（物理学法）、疱肉培养基（生物学）法疱肉培养基（生物学）法疱肉培养基（生物学）法疱肉培养基（生物学）法1/13/202328固体培养基中固体培养基中菌落（菌落（S型）型）菌苔菌苔菌落（菌落（R型）型）细菌的生长

31、情况细菌的生长情况1/13/202329沉沉淀淀生生长长混混浊浊生生长长表表面面生生长长液体培养基中液体培养基中1/13/202330混浊生长沿穿刺线生长生长有鞭毛有鞭毛细菌细菌无鞭毛无鞭毛细菌细菌半半固固体体体体培培养养基基中中1/13/202331三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定（一）碳水化合物的代谢试验（一）碳水化合物的代谢试验（一）碳水化合物的代谢试验（一）碳水化合物的代谢试验 1.1.糖（醇、苷）类发酵试验糖（醇、苷）类发酵试验糖（醇、苷）类发酵试验糖（醇、苷）类发酵试验 是鉴定细菌最主要和最基是鉴定细菌最主要和最基是鉴定细菌最主要和最基是鉴定细菌最主要和最基本的试验，特别对肠杆

32、菌科本的试验，特别对肠杆菌科本的试验，特别对肠杆菌科本的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要细菌的鉴定尤为重要细菌的鉴定尤为重要细菌的鉴定尤为重要1/13/202332氧化型氧化型氧化型氧化型发酵型发酵型发酵型发酵型产碱型产碱型产碱型产碱型2氧化氧化发酵试验（发酵试验（O/F试验）试验）主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。均为发酵型，而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴别。1/13/2023333半乳糖苷酶试验（半乳糖苷酶试验（ONPG试试验）验）迅

33、速及迟缓分解乳糖的细菌迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验为阳试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。1/13/202334三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定4 4七叶苷水解试验七叶苷水解试验七叶苷水解试验七叶苷水解试验 主要用于主要用于主要用于主要用于D D群链球菌与其他链球菌的鉴别。群链球菌与其他链球菌的鉴别。群链球菌与其他链球菌的鉴别。群链球菌与其他链球菌的鉴别。5 5甲基红试验甲基红试验甲基红试验甲基红试验 主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌。主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠

34、杆菌。主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌。主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌。6 6VPVP试验试验试验试验 本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的 细菌，后者通常为阴性。细菌，后者通常为阴性。细菌，后者通常为阴性。细菌，后者通常为阴性。1/13/202335（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验2吲哚吲哚(靛基质靛基质)试验试验 主要用于肠杆菌科细菌主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。的鉴定。1.明胶液化试验主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。明胶液

35、化试验主要用于肠杆菌科细菌的鉴别。3硫化氢试验硫化氢试验培养基：醋酸铅培养基培养基：醋酸铅培养基 应用：主要用于肠杆菌科应用：主要用于肠杆菌科中属及种鉴别中属及种鉴别1/13/202336三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定4 4尿素分解试验尿素分解试验尿素分解试验尿素分解试验 主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。主要用于肠杆菌科中变形杆菌属细菌的鉴定。5 5苯丙氨酸脱氨酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验苯丙氨酸脱氨酶试验 主主主主要要要要用用用用于于于于肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌科科科科细细细细菌菌菌菌

36、的的的的鉴鉴鉴鉴定定定定。变变变变形形形形杆杆杆杆菌菌菌菌属属属属、普普普普罗罗罗罗菲菲菲菲登登登登斯斯斯斯菌菌菌菌属属属属和和和和摩摩摩摩根根根根菌菌菌菌属属属属细细细细菌菌菌菌均均均均为为为为阳阳阳阳性性性性，肠肠肠肠杆菌科中其他细菌均为阴性。杆菌科中其他细菌均为阴性。杆菌科中其他细菌均为阴性。杆菌科中其他细菌均为阴性。6 6氨基酸脱羧酶试验氨基酸脱羧酶试验氨基酸脱羧酶试验氨基酸脱羧酶试验 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。1/13/202337（三）碳源和氮源利用试验（三）碳源和氮源利用试验1 1枸橼酸盐利用试

37、验枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验 用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。2 2丙二酸盐利用试验丙二酸盐利用试验丙二酸盐利用试验丙二酸盐利用试验 肠杆菌科中属间及种的鉴别。肠杆菌科中属间及种的鉴别。肠杆菌科中属间及种的鉴别。肠杆菌科中属间及种的鉴别。1/13/202338（四）各种酶类试验（四）各种酶类试验1 1氧氧氧氧化化化化酶酶酶酶试试试试验验验验主主主主要要要要用用用用于于于于肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌科科科科细细细细菌菌菌菌与与与与假假假假单单单单胞菌的鉴别。胞菌的鉴别。胞菌的鉴别。胞菌的鉴别。2

38、2过氧化氢酶试验（触过氧化氢酶试验（触过氧化氢酶试验（触过氧化氢酶试验（触酶试验）用于革兰阳酶试验）用于革兰阳酶试验）用于革兰阳酶试验）用于革兰阳性球菌的初步分群。性球菌的初步分群。性球菌的初步分群。性球菌的初步分群。1/13/202339 3硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些嗜麦芽假单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。1/13/202340

39、三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定4 4脂酶试验脂酶试验脂酶试验脂酶试验 主要用于厌氧菌的鉴别。主要用于厌氧菌的鉴别。主要用于厌氧菌的鉴别。主要用于厌氧菌的鉴别。5 5卵磷脂酶试验卵磷脂酶试验卵磷脂酶试验卵磷脂酶试验 主要用于厌氧菌的鉴定。主要用于厌氧菌的鉴定。主要用于厌氧菌的鉴定。主要用于厌氧菌的鉴定。6 6 DNADNA酶试验酶试验酶试验酶试验 在在在在革革革革兰兰兰兰阳阳阳阳性性性性球球球球菌菌菌菌中中中中只只只只有有有有金金金金黄黄黄黄色色色色葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌产产产产生生生生DNADNA酶酶酶酶，在在在在肠杆菌科中沙雷氏菌和变形杆菌产生此酶。肠杆菌科中沙雷氏菌和变形杆

40、菌产生此酶。肠杆菌科中沙雷氏菌和变形杆菌产生此酶。肠杆菌科中沙雷氏菌和变形杆菌产生此酶。1/13/202341三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定8 8 CAMPCAMP试验试验试验试验 在在在在链链链链球球球球菌菌菌菌中中中中，只只只只有有有有B B群群群群链链链链球球球球菌菌菌菌CAMPCAMP试试试试验验验验阳阳阳阳性性性性，故故故故可可可可作为特异性鉴定。作为特异性鉴定。作为特异性鉴定。作为特异性鉴定。7 7 凝凝凝凝固固固固酶酶酶酶试试试试验验验验作作作作为为为为鉴鉴鉴鉴定定定定葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌致致致致病病病病性性性性的的的的重重重重要要要要指指指指标标标标，也是葡萄

41、球菌鉴别时常用的一个试验。也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。1/13/202342（五）抑菌试验（五）抑菌试验1 O/129抑菌试验抑菌试验 用用于于弧弧菌菌科科的的属属间间鉴鉴别别，弧弧菌菌属属、邻邻单单胞胞菌菌属对属对O/129敏感，而气单胞菌属耐药。敏感，而气单胞菌属耐药。2杆菌肽试验用于杆菌肽试验用于A群链球菌与非群链球菌与非A群链球群链球群的鉴别。群的鉴别。3奥奥普普托托欣欣（Optochin）试试验验主主要要用用于于肺肺炎炎链球菌与其他链球菌的鉴别。链球菌与其他链球菌的鉴别。1/13/202343第四节第四节 细菌

42、的非培养检测方法细菌的非培养检测方法一、免疫学技术一、免疫学技术一、免疫学技术一、免疫学技术 抗原检测、抗体检测抗原检测、抗体检测抗原检测、抗体检测抗原检测、抗体检测二、分子生物学技术二、分子生物学技术二、分子生物学技术二、分子生物学技术 核酸杂交、聚合酶链反应、生物芯片技术核酸杂交、聚合酶链反应、生物芯片技术核酸杂交、聚合酶链反应、生物芯片技术核酸杂交、聚合酶链反应、生物芯片技术三、细菌毒素的检测三、细菌毒素的检测三、细菌毒素的检测三、细菌毒素的检测 内毒素、外毒素内毒素、外毒素内毒素、外毒素内毒素、外毒素四、动物实验四、动物实验四、动物实验四、动物实验 1/13/202344一、免疫学技术

43、一、免疫学技术概念辨析概念辨析n n免疫学检测免疫学检测n n免疫学诊断免疫学诊断n n免疫学反应免疫学反应n n免疫学技术免疫学技术n n血清学检测血清学检测n n血清学反应血清学反应n n血清学技术血清学技术n n血清学诊断血清学诊断抗原抗原 不区分不区分 抗体抗体1/13/202345（一）（一）细细菌菌Ag检测检测n n菌体菌体Ag：IFA、荧光菌球法、荧光菌球法、荧光菌球法、荧光菌球法、凝集试验凝集试验n n游离游离Ag：ELISA 免疫荧光技术是利用免疫学特异性反应与荧光示免疫荧光技术是利用免疫学特异性反应与荧光示免疫荧光技术是利用免疫学特异性反应与荧光示免疫荧光技术是利用免疫学特

44、异性反应与荧光示踪技术相结合的显微镜检查手段。既保持了血清学踪技术相结合的显微镜检查手段。既保持了血清学踪技术相结合的显微镜检查手段。既保持了血清学踪技术相结合的显微镜检查手段。既保持了血清学的高特异性，又极大地提高了检测的敏感性，在细的高特异性，又极大地提高了检测的敏感性，在细的高特异性，又极大地提高了检测的敏感性，在细的高特异性，又极大地提高了检测的敏感性，在细菌鉴定方面占有重要地位。常用的方法有直接法、菌鉴定方面占有重要地位。常用的方法有直接法、菌鉴定方面占有重要地位。常用的方法有直接法、菌鉴定方面占有重要地位。常用的方法有直接法、间接法和免疫荧光菌球法。间接法和免疫荧光菌球法。间接法和

45、免疫荧光菌球法。间接法和免疫荧光菌球法。血清学试验的对照设计+/0？1/13/202346（二）抗体检测（二）抗体检测-血清学诊断血清学诊断 抗抗体体的的量量常常随随感感染染过过程程而而增增多多，表表现现为为效效价价的的升升高高。因因此此用用已已知知的的细细菌菌或或其其特特异异性性抗抗原原检检测测病病人人血血清清中中有有无无相相应应抗抗体体及及其其效效价价的的动动态态变变化化，可可作作为为某某些些传传染染病病的的辅辅助助诊诊断断。主主要要适适用用于于抗抗原原性性较较强强的的致致病病菌菌和和病病程程较较长长的感染性疾病。的感染性疾病。1/13/202347标本：标本：双份血清标本，恢复期比急性期

46、血清标本抗体双份血清标本，恢复期比急性期血清标本抗体效价升高效价升高4倍方有意义倍方有意义方法方法原理：原理：用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些中相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。传染病的辅助诊断。凝集试验：凝集试验：沉淀试验：沉淀试验：补体结合试验：补体结合试验：中和试验：中和试验：肥达试验、外斐试验肥达试验、外斐试验梅毒梅毒VDRL、RPR试验等试验等抗链抗链“O”试验等试验等Q热柯克斯体抗体检测等热柯克斯体抗体检测等细菌的血清学诊断细菌的血清学诊断1/13/202348二、

47、分子生物学技术二、分子生物学技术（一）核酸杂交（一）核酸杂交 DNA可可进进行行变变性性、复复性性、杂杂交交。利利用用这这一一特特性性，制制备备特特定定序序列列DNA片片段段，进进行行标标记记后后用用作作探探针针，在在一一定定条条件件下下，按按照照碱碱基基互互补补配配对对原原则则与与标标本本中中已已变变性性的的细细菌菌DNA进进行行杂杂交交，通通过过检检测测杂杂交交信信号号确确定定是是否否发发生生杂杂交交反反应应，从从而而鉴鉴定定标本中有无相应的病原菌基因。标本中有无相应的病原菌基因。探针的种类：探针的种类：探针的种类：探针的种类：克隆片段克隆片段克隆片段克隆片段DNADNA探针、寡核苷酸针、

48、探针、寡核苷酸针、探针、寡核苷酸针、探针、寡核苷酸针、质粒质粒质粒质粒DNADNA探针、探针、探针、探针、rRNArRNA探针、探针、探针、探针、1/13/202349（一）核酸杂交（一）核酸杂交 2 2核酸杂交在临床细菌检测中的应用核酸杂交在临床细菌检测中的应用核酸杂交在临床细菌检测中的应用核酸杂交在临床细菌检测中的应用（1 1）细菌分类鉴定）细菌分类鉴定）细菌分类鉴定）细菌分类鉴定（2 2）细菌快速鉴定）细菌快速鉴定）细菌快速鉴定）细菌快速鉴定（3 3）细菌耐药性的检测）细菌耐药性的检测）细菌耐药性的检测）细菌耐药性的检测（4 4）细菌毒素的检测）细菌毒素的检测）细菌毒素的检测）细菌毒素的

49、检测（5 5）细菌流行病学调查）细菌流行病学调查）细菌流行病学调查）细菌流行病学调查1/13/202350（二）聚合酶链反应（二）聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）1.1.特异性特异性特异性特异性DNADNA体外扩增技术体外扩增技术体外扩增技术体外扩增技术2.2.特异、灵敏、快速、操作简便特异、灵敏、快速、操作简便特异、灵敏、快速、操作简便特异、灵敏、快速、操作简便3.3.广泛应用于细菌的鉴定广泛应用于细菌的鉴定广泛应用于细菌的鉴定广泛应用于细菌的鉴定PCRPCR在临床细菌检测中的应用在临床细菌检测中的应用在临床细菌检测中的应用在临床细菌检测中的应用1.

50、1.细菌的快速检测细菌的快速检测细菌的快速检测细菌的快速检测 2.2.细菌毒素的检测细菌毒素的检测细菌毒素的检测细菌毒素的检测 3.3.细菌耐药性的检测细菌耐药性的检测细菌耐药性的检测细菌耐药性的检测 4.4.细菌流行病学调查细菌流行病学调查细菌流行病学调查细菌流行病学调查 1/13/202351（三）生物芯片技术（三）生物芯片技术 1.1.通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表面构建微型生物化学分析系统。面构建微型生物化学分析系统。面构建微型生物化学分析系统。面构建微型生物化学分