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1、多糖提取实验设计流程食用菌多糖的提取方法有水提法、碱提法和酶提法等,其中酶提法是利用酶对细胞结构的破坏作用,使存在于细胞内部的多糖释放出来,从而提高了多糖的得率.本次实验采用纤维素酶和果胶酶对紫蘑菇进行水解,研究香菇多糖的最佳提取工艺,并探讨蘑菇粒度、蘑菇溶解方法以及酶法提取中多糖提取效果的评价方法。可以同步做三组对比试验:采用水提,不加酶;采用酶法提取;采用酶空白(只加酶,不加蘑菇粉)。由于酶中也含有少量的糖类成分,其存在将会对蘑菇多糖的提取产生影响。因此,在计算酶法提取多糖的效果时,要减去酶本身所引入的糖。在确定最佳酶浓度时更要考虑。一、实验流程:蘑菇干燥粉碎过筛加水浸泡0。5h调PH加入
2、纤维素酶提取离心过滤测多糖提取率 式中: n一提取液稀释倍数; C一提取液中多糖的浓度(mg/mL);V一提取液体积(mL);m一蘑菇的质量(mg) 。测定时取三个平行样,结果数据为平行样的平均数值。二、具体实验步骤:1、多糖标准曲线的绘制精密称取105干燥恒重的葡萄糖标准品100mg,置于100 mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀.精密吸取0。4、0。8、1。2、1.6、2。0、2。4、2.8 mL分别置于50 mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。精密吸取上述各种溶液2.0 mL,分别加入5苯酚溶液1.0 mL,摇匀,迅速加入5。0 mL浓硫酸,振摇5min,置沸水浴上加热15 min,然后
3、置冷水浴中冷却30 min,随行空白,在490 nm波长处测定吸光度.以标准溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标绘制标准曲线,并计算其标准曲线回归方程。(1)精密度试验:精密吸取1。0 ml供试液按“标准曲线的制备”项下操作,分别测定吸光度,求得RSD。(2)重现性及多糖含量测定:精密称取巴西蘑菇多糖0。1000g,按“供试液的配制和“标准曲线的制备”项下操作,分别测定吸光度,求得多糖的平均含量,及RSD值。2、单因素实验(1)水提法称取蘑菇粉末2g,加入适量水(最佳固液比为1:20),在50水中浸泡1h。升温至100,提取2.5h。将混合物离心、浓缩、乙醇沉淀,计算多糖提取率和纯度。单因素选择
4、范围提取温度()固液比(W/V)提取时间(h)701:161h801:181。5h901:202h1001:222.5h1:243h(2)酶法提取称取蘑菇粉末2g,加入适量水(最佳固液比为1:20),在50水中浸泡1h。升温至90,提取0。5h。冷却至40,加入酶浓度1,提取液总体积为100ml,PH值5。0,酶解提取1h。然后升温至90提取1h灭酶。将混合物离心、浓缩、乙醇沉淀,计算多糖提取率和纯度。单因素选择范围酶浓度酶解温度PH值酶解时间h0.25303.50.50。5354。010。75404.521.0455.031.25505.541。5556.0实验所需药品:纤维素酶,果胶酶,葡萄糖,苯酚,浓硫酸,乙醇器材:100ml容量瓶,50ml容量瓶