《分离分析法导论PPT讲稿.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分离分析法导论PPT讲稿.ppt（41页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、分离分析法导论第1页，共41页，编辑于2022年，星期五一、色谱分析法及其基本概念一、色谱分析法及其基本概念1、色谱法的发展色谱法的发展1906年，俄植物学家年，俄植物学家M.Tswett分离植物色素分离植物色素植物叶的色素组成植物叶的色素组成叶绿素叶绿素a（蓝绿色）（蓝绿色）叶绿素叶绿素b（黄绿色）（黄绿色）胡萝卜素（橙色）胡萝卜素（橙色）叶黄素（黄色）叶黄素（黄色）第2页，共41页，编辑于2022年，星期五第3页，共41页，编辑于2022年，星期五Developing of Chromatographic Technique1948,8 days separation for 16 ami
2、no acids第4页，共41页，编辑于2022年，星期五Developing of Chromatographic Technique1958,22 hours separation for 19 of amino acids第5页，共41页，编辑于2022年，星期五Developing of Chromatographic Technique1982,less than 30 minutes separation for 18 of amino acids第6页，共41页，编辑于2022年，星期五2、色谱法分类色谱法分类（1）按流动相和固定相所处状态分）按流动相和固定相所处状态分n气相色谱
3、（气相色谱（GC）气液色谱（固定相为固定液，即固定相是附着在惰性载体上的一气液色谱（固定相为固定液，即固定相是附着在惰性载体上的一薄层有机化合物液体）薄层有机化合物液体）气固色谱（固定相是固体吸附剂）气固色谱（固定相是固体吸附剂）n液相色谱（液相色谱（LC）液液色谱液液色谱 液固色谱液固色谱（2）按固定相的固定方式分）按固定相的固定方式分n柱色谱柱色谱（固定相装于柱内的色谱法）（固定相装于柱内的色谱法）n纸色谱纸色谱（固定相是滤纸上的水分，呈平板状（固定相是滤纸上的水分，呈平板状）n薄层色谱薄层色谱（固定相是吸附剂粉末制成的薄层，呈平板状）（固定相是吸附剂粉末制成的薄层，呈平板状）第7页，共4
4、1页，编辑于2022年，星期五（3）按分离原理分）按分离原理分n吸附色谱吸附色谱（利用组分在固定相上的吸附能力强弱不同而得（利用组分在固定相上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法）以分离的方法）n分配色谱分配色谱（利用组分在（固定相）中溶解度不同而达到分离（利用组分在（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称为分配色谱法）的方法称为分配色谱法）n离子交换色谱离子交换色谱（利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲（利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法）和力大小不同而达到分离的方法）n排阻色谱排阻色谱（利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗（利用大小不同的分子在多孔固定相中的
5、选择渗透而达到分离的方法，又称凝胶色谱法）透而达到分离的方法，又称凝胶色谱法）第8页，共41页，编辑于2022年，星期五3、色谱图及常用术语色谱图及常用术语（1）色谱图：）色谱图：试样各组分经色谱分离后，从柱后流出进入检测器，检测器将试样各组分经色谱分离后，从柱后流出进入检测器，检测器将各组分浓度（或质量）的变化转换为电信号（电压或电流），再由记录仪记录下各组分浓度（或质量）的变化转换为电信号（电压或电流），再由记录仪记录下来，所得的电信号强度随时间变化的曲线，即为流出曲线，也称为色谱图，曲线来，所得的电信号强度随时间变化的曲线，即为流出曲线，也称为色谱图，曲线上突起部分就是色谱峰。上突起部分
6、就是色谱峰。第9页，共41页，编辑于2022年，星期五（2）常用术语）常用术语基线：基线：柱中只有流动相流过时，检测器的响应信号记录值，稳定的柱中只有流动相流过时，检测器的响应信号记录值，稳定的直线应是一条水平直线。直线应是一条水平直线。峰高峰高h：色谱峰顶点与基线的垂直距离色谱峰顶点与基线的垂直距离 峰宽：峰宽：峰底宽峰底宽Y 半峰宽：半峰宽：1/2h处的峰宽，处的峰宽，Y1/2 标准偏差：标准偏差：0.607h处的峰宽为处的峰宽为2 峰面积：峰面积：第10页，共41页，编辑于2022年，星期五保留值：保留值：表示试样中各组分在色谱柱内停留状况的指标，反映组分分子与固定相分子间表示试样中各组
7、分在色谱柱内停留状况的指标，反映组分分子与固定相分子间作用力的大小，通常用作用力的大小，通常用时间和流动相的体积时间和流动相的体积表示。表示。用体积表示的保留值（单位：用体积表示的保留值（单位：mL）n死体积（死体积（V0）：）：不被固定相保留的组分，通过色谱柱所消耗的流动相体积，不被固定相保留的组分，通过色谱柱所消耗的流动相体积，由死时间确定由死时间确定n保留体积（保留体积（VR）：）：试样从进样到出现最大峰所通过的流动相体积试样从进样到出现最大峰所通过的流动相体积n调整保留体积（调整保留体积（VR）：）：VR=VR-V0用时间表示的保留值（单位：用时间表示的保留值（单位：min，s等）等）
8、n死时间（死时间（t0）：）：不被固定相保留的组分，从进样到出现最大峰所需不被固定相保留的组分，从进样到出现最大峰所需的时间，也即流动相流经色谱柱所需的时间的时间，也即流动相流经色谱柱所需的时间n保留时间（保留时间（tR）：）：试样从进样到出现最大峰所需的时间试样从进样到出现最大峰所需的时间n调整保留时间（调整保留时间（tR）：）：tR=tR-t0相对保留值（相对保留值（2,1）：）：也称选择性因子，也称选择性因子，为两组分的调整保留值之比为两组分的调整保留值之比一般选择一般选择tR2大于大于tR1，所以，所以 值大于值大于1，越越大，分离效果越好。大，分离效果越好。第11页，共41页，编辑于
9、2022年，星期五n色谱峰的个数色谱峰的个数判断组分的个数判断组分的个数n色谱峰的保留值色谱峰的保留值定性分析定性分析n色谱峰的面积或峰高色谱峰的面积或峰高定量分析定量分析n相对保留值相对保留值 固定相与流动相的选择是否合适固定相与流动相的选择是否合适n保留值、区域宽度保留值、区域宽度评价色谱柱分离效能的好坏评价色谱柱分离效能的好坏色谱图色谱图 信息信息第12页，共41页，编辑于2022年，星期五（3）分配平衡）分配平衡样品组分在固定相与流样品组分在固定相与流动相之间进行动相之间进行多次分配多次分配使其得到分离。使其得到分离。第13页，共41页，编辑于2022年，星期五 样品在固定相与流动相之
10、间进行样品在固定相与流动相之间进行分配分配，很快达到平衡，很快达到平衡，即分配平衡。即分配平衡。当流当流动相流过时，样品将在流动相和新的固定相中又达到分配平衡，同时原来仍在固定相中动相流过时，样品将在流动相和新的固定相中又达到分配平衡，同时原来仍在固定相中的样品与新的流动相之间也会形成新的分配平衡，随着流动相的不断流过，它们携带发的样品与新的流动相之间也会形成新的分配平衡，随着流动相的不断流过，它们携带发生分配平衡后仍存在于流动相中的样品沿着柱子向前流动，从而达到不同组分分离的目生分配平衡后仍存在于流动相中的样品沿着柱子向前流动，从而达到不同组分分离的目的。的。色谱分离原理及分离参数色谱分离原
11、理及分离参数分配系数分配系数（组分在固定相中的浓度）（组分在固定相中的浓度）（组分在流动相中的浓度）（组分在流动相中的浓度）分配比分配比（组分在固定相中物质的量）（组分在固定相中物质的量）（组分在流动相中物质的量）（组分在流动相中物质的量）第14页，共41页，编辑于2022年，星期五分配比影响因素：分配比影响因素：组分、流动相和固定相的热力学性质；温度和压组分、流动相和固定相的热力学性质；温度和压力等因素；流动相及固定相的体积。力等因素；流动相及固定相的体积。分配系数影响因素：分配系数影响因素：组分、流动相和固定相的热力学性质；温度组分、流动相和固定相的热力学性质；温度和压力等因素。和压力等因
12、素。（组分在固定相中的量越多，相当于柱的容量大，因此分配比又称分（组分在固定相中的量越多，相当于柱的容量大，因此分配比又称分配容量或容量因子）配容量或容量因子）第15页，共41页，编辑于2022年，星期五A,B组分未分离组分未分离A,B组分分离不完全组分分离不完全A,B组分分离完全组分分离完全二、色谱分析法基本理论二、色谱分析法基本理论n两组分的分配系数有差异两组分的分配系数有差异n区域扩散速率小于区域分离速率区域扩散速率小于区域分离速率受哪些因素影响？受哪些因素影响？n 塔板理论塔板理论n 速率理论速率理论第16页，共41页，编辑于2022年，星期五1、塔板理论、塔板理论结论：结论：nn与半
13、峰宽及峰底宽的关系与半峰宽及峰底宽的关系nn大于大于50，可得到峰形基本对称的曲线，可得到峰形基本对称的曲线n只要被分离组分只要被分离组分K有差异，只要有差异，只要n足够大，经过反足够大，经过反复多次的分配后均可进行分离复多次的分配后均可进行分离假设：假设：（1）色谱由一系列连续的，相等的水平塔板组成，）色谱由一系列连续的，相等的水平塔板组成，每一塔板高度为每一塔板高度为H，理论塔板数，理论塔板数n=L/H（2）在每一塔板内，组分可在两相间迅速达到平衡）在每一塔板内，组分可在两相间迅速达到平衡（3）流动相进入是间歇的，而非连续，每次进入为一个塔板体积）流动相进入是间歇的，而非连续，每次进入为一
14、个塔板体积（4）所有组分开始存在于）所有组分开始存在于0号塔板上，而且试样沿纵向扩散不计号塔板上，而且试样沿纵向扩散不计（5）分配系数）分配系数K恒定不变恒定不变第17页，共41页，编辑于2022年，星期五n理论优点：理论优点：解释了流出曲线的形状，提出了计算和评价柱效能高解释了流出曲线的形状，提出了计算和评价柱效能高低的因素（低的因素（n）如果若如果若tR一定，那么一定，那么n越大，越大，H越小，则色谱峰越窄，柱效能越高。越小，则色谱峰越窄，柱效能越高。n理论缺点：理论缺点：（1）色谱过纵向扩散等不能忽略，）色谱过纵向扩散等不能忽略，（2）塔板理论只能定性地给出板高的概念，）塔板理论只能定性
15、地给出板高的概念，不能解释板高受哪些因不能解释板高受哪些因素影响，无法提出降低塔板高度的方法素影响，无法提出降低塔板高度的方法 （3）不能说明为什么在不同的流速下，可以测得不同的理论塔板数）不能说明为什么在不同的流速下，可以测得不同的理论塔板数 （4）分配系数与浓度无关只能在有限的浓度范围内成立）分配系数与浓度无关只能在有限的浓度范围内成立 （5）色谱柱中没有真正的平衡体系）色谱柱中没有真正的平衡体系第18页，共41页，编辑于2022年，星期五2、速率理论、速率理论1956年，荷兰，范弟姆特，速率理论年，荷兰，范弟姆特，速率理论A：涡流扩散项系数，：涡流扩散项系数，B：分子扩散项系数，：分子扩
16、散项系数，C：传质项系数，：传质项系数，u：平均流速：平均流速A，B，C越小，越小，H越小，越小，n越大，柱效高越大，柱效高A，B，C越大，越大，H越大，越大，n越小，柱效低越小，柱效低第19页，共41页，编辑于2022年，星期五A-涡流扩散项涡流扩散项 由于流动相流经填充物的不规则空隙时，其流动方向改变，形成紊乱的类似由于流动相流经填充物的不规则空隙时，其流动方向改变，形成紊乱的类似“涡流涡流”的流动而引起的流动而引起涡流扩散过程示意图涡流扩散过程示意图n 影响因素：影响因素：填充不规则因子；：填充不规则因子；dp：填充物平均直径：填充物平均直径n 结论结论 dp越小（采用小颗粒填充物），越
17、小（采用小颗粒填充物），越小（颗粒均匀），越小（颗粒均匀），A就越小，空心就越小，空心毛细管柱毛细管柱A0第20页，共41页，编辑于2022年，星期五第21页，共41页，编辑于2022年，星期五B/u-分子扩散项（纵向扩散项）分子扩散项（纵向扩散项）样品在纵向上的浓度梯度而造成的扩散样品在纵向上的浓度梯度而造成的扩散（a a）柱内组分扩散）柱内组分扩散（b b）相应的响应信号）相应的响应信号n影响因素：影响因素：弯曲因子弯曲因子。填充柱中由于固定相颗粒的存在，使分子自由扩散受到阻碍，扩散填充柱中由于固定相颗粒的存在，使分子自由扩散受到阻碍，扩散程度降低，程度降低，1；空心毛细管柱；空心毛细管柱
18、=1。Dg：组分分子在其气相中的组分分子在其气相中的扩散系数扩散系数。组分分子量大，柱温高，。组分分子量大，柱温高，柱压大，柱压大，载气载气分子量大，分子量大，Dg小；反之则大。小；反之则大。u：流动相平均线速：流动相平均线速，纵向扩散与组分在色谱柱内停留时间有关，流动相流速小，纵向扩散与组分在色谱柱内停留时间有关，流动相流速小，组分停留时间长，纵向扩散就大。组分停留时间长，纵向扩散就大。n结论：结论：采用分子量较大的载气，较高的载气流速，控制较低的温度，可使分子采用分子量较大的载气，较高的载气流速，控制较低的温度，可使分子扩散项系数减小扩散项系数减小第22页，共41页，编辑于2022年，星期
19、五第23页，共41页，编辑于2022年，星期五C-传质阻力项传质阻力项物质迁移过程中存在的阻力物质迁移过程中存在的阻力第24页，共41页，编辑于2022年，星期五Cm：流动相传质阻力项系数，即为待测试样组分从流动相移动到固定相表面流动相传质阻力项系数，即为待测试样组分从流动相移动到固定相表面的进行分配时所受到的阻力的进行分配时所受到的阻力n 影响因素：影响因素：容量因子容量因子k，填充物平均直径，填充物平均直径dp，组分在气相中的扩散系数，组分在气相中的扩散系数Dgn 结论：结论：采用颗粒小的填充物，及分子量小的载气采用颗粒小的填充物，及分子量小的载气Cs：固定相传质阻力项系数，组分分子由流动
20、相进入固定相内部，达到分配固定相传质阻力项系数，组分分子由流动相进入固定相内部，达到分配平衡，又回到界面，再溢出界面，被流动相带走这一过程受到的阻力平衡，又回到界面，再溢出界面，被流动相带走这一过程受到的阻力n 影响因素：影响因素：容量因子容量因子k，固定液液膜厚度固定液液膜厚度df，组分在固定相中的扩散系数组分在固定相中的扩散系数Dsn 结论：结论：降低液膜厚度降低液膜厚度第25页，共41页，编辑于2022年，星期五范氏方程范氏方程总的影响因素：总的影响因素：填充物的均匀程度，填充物粒度的大小，流动相的种类和线速，固填充物的均匀程度，填充物粒度的大小，流动相的种类和线速，固定相的液膜厚度定相
21、的液膜厚度第26页，共41页，编辑于2022年，星期五n柱效：柱效：色谱分离的动力学因素，由理论塔板数来衡量。如果若色谱分离的动力学因素，由理论塔板数来衡量。如果若tR一定，一定，那么那么n越大，越大，H越小，则色谱峰越窄，柱效能越高。越小，则色谱峰越窄，柱效能越高。n选择性：选择性：两峰间的距离衡量色谱的选择性，距离越大选择性越好，一般以两峰间的距离衡量色谱的选择性，距离越大选择性越好，一般以 表示表示3、色谱分离效能的衡量、色谱分离效能的衡量(a)两组分没有完全分离两组分没有完全分离(b)两组分完全分离，但柱效不高两组分完全分离，但柱效不高(c)两组分分离不完全，但柱效较好两组分分离不完全
22、，但柱效较好(d)两组分分离完全，且柱效很好两组分分离完全，且柱效很好第27页，共41页，编辑于2022年，星期五分离度分离度分离度概念：分离度概念：又叫分辨率或分辨度，色谱峰中相邻两峰分离程度的量度，是相邻又叫分辨率或分辨度，色谱峰中相邻两峰分离程度的量度，是相邻两峰保留值之差与两峰峰底宽的平均值之比。两峰保留值之差与两峰峰底宽的平均值之比。R值越大，表明相邻两组分分离越好值越大，表明相邻两组分分离越好Rs1.5，两峰完全分离，两峰完全分离(分离程度可达分离程度可达99.7%)分离度基本方程式：分离度基本方程式：第28页，共41页，编辑于2022年，星期五n n越大，越大，R越大越大n=L/
23、H，(R1/R2)2=n1/n2=L1/L2 n 增加柱长的色谱柱可以提高分离度，但延长了分析时间。增加柱长的色谱柱可以提高分离度，但延长了分析时间。n 制备一根性能优良的柱子，通过降低板高，以提高分离度。制备一根性能优良的柱子，通过降低板高，以提高分离度。（1）分离度与柱效的关系）分离度与柱效的关系（3）分离度与相对保留值的关系）分离度与相对保留值的关系n r2,1=1时，时，R=0，不能使两组分分离。，不能使两组分分离。r2,11才可进行分离。才可进行分离。r2,1大，选大，选择性好。择性好。r2,1的微小变化，就能引起分离度的显著变化。的微小变化，就能引起分离度的显著变化。n 改变固定相
24、和流动相的性质、组成或降低柱温，可有效增大改变固定相和流动相的性质、组成或降低柱温，可有效增大r2,1值。值。n k增大可使增大可使R增大，增大，当当k 10时，时，k/k1改变不大，改变不大，R增长是不大，增长是不大，一般取一般取k为为110最宜。最宜。n 改变柱温和相比，可以改变改变柱温和相比，可以改变k。（2）分离度与分配比的关系）分离度与分配比的关系第29页，共41页，编辑于2022年，星期五已知物质已知物质A和和B在一根在一根30.00 cm长的柱上的保留时间分别为长的柱上的保留时间分别为16.40 min和和17.63 min。不被保留组分通过该柱的时间为。不被保留组分通过该柱的时
25、间为1.30 min。峰底宽。峰底宽度分别为度分别为1.11 min和和1.21 min，计算：（，计算：（1）柱的分离度；（）柱的分离度；（2）柱的）柱的平均塔板数；（平均塔板数；（3）达到）达到1.5分离度所需的柱长度。分离度所需的柱长度。解解：（：（1）柱的分离度柱的分离度 R=2（17.63-16.40）/（1.11+1.21）=1.06 （2）柱的平均塔板数柱的平均塔板数 n=16(16.40/1.11)2=3493 n=16(17.63/1.21)2=3397 n平均平均=（3493+3397）/2=3445 （3）达到达到1.5分离度所需的柱长度分离度所需的柱长度 R1/R2=(
26、n1/n2)1/2 n2=3445(1.5/1.06)2=6898 L=nH=6898(300/3445)=60 cm第30页，共41页，编辑于2022年，星期五三、色谱的定性分析和定量分析三、色谱的定性分析和定量分析n与标样对照的方法与标样对照的方法 保留值法（单柱法和双柱法）保留值法（单柱法和双柱法）相对保留值法相对保留值法 已知物的峰高加入法已知物的峰高加入法1、色谱定性方法、色谱定性方法n利用保留指数法定性利用保留指数法定性n 方法：方法：分别测出待测物质分别测出待测物质i与基准与基准物质物质s的调整保留值，求出相对保留值的调整保留值，求出相对保留值ris，将，将ris与文献值比较后定
27、性。与文献值比较后定性。基准基准物质通常选容易得到纯品的，且物质通常选容易得到纯品的，且与被分析组分相近的物质，如正与被分析组分相近的物质，如正丁（戊）烷、环己烷（醇、酮）、丁（戊）烷、环己烷（醇、酮）、苯、对二甲苯等。苯、对二甲苯等。n 优点：优点：ris仅随固定液及柱温变化，与仅随固定液及柱温变化，与其它操作条件无关。其它操作条件无关。方法：方法：首先作出未知物样品的色谱图，首先作出未知物样品的色谱图，然后在未知物样品中加入某已知物，然后在未知物样品中加入某已知物，又得一色谱图，峰高增加的组分即又得一色谱图，峰高增加的组分即可能为这种组分。可能为这种组分。优点：优点：当未知样品中组分较多，
28、所得色当未知样品中组分较多，所得色谱峰过密，用上述方法不易辨认时，或谱峰过密，用上述方法不易辨认时，或仅作未知样品指定项目分析时均可用此仅作未知样品指定项目分析时均可用此法。法。第31页，共41页，编辑于2022年，星期五n 例：确定物质例：确定物质i在某固定液在某固定液X上的保留指数上的保留指数IiX 的数值。的数值。tR(Z+1)内插法求内插法求IiX示意图示意图信信号号 tR(Z)tR(i)t进样进样保留指数定性法（柯瓦指数）保留指数定性法（柯瓦指数）方法步骤：方法步骤：（1）规定正构烷烃的保留指数为其碳原子数乘以规定正构烷烃的保留指数为其碳原子数乘以100，如正戊烷，正己烷、正，如正戊
29、烷，正己烷、正庚烷的保留值分别为庚烷的保留值分别为500，600和和700（2）z，z+1为正构烷烃的碳数，测得碳数为为正构烷烃的碳数，测得碳数为z，z+1以及样品以及样品i的调整保留时间的调整保留时间分别为分别为tR(z)，tR(z+1)，tR(i)，且且tR(z)tR(i)tR(z+1)，求求Ix。（3）由求出的由求出的Ix 值查阅文献，推测未知物。值查阅文献，推测未知物。优点：优点：保留指数计算准确，准确度高，值仅与柱温和固定相有关保留指数计算准确，准确度高，值仅与柱温和固定相有关第32页，共41页，编辑于2022年，星期五n利用质谱定性利用质谱定性试样试样试样试样 589058901.
30、0 1.0 DEG/MIDEG/MIN NHEWLETTHEWLETTPACKARDPACKARDHEWLETHEWLETT T PACKARPACKARD D5972A5972AMass Mass SelectivSelective e DetectoDetector rD DC CB BA A A AB BC CD D气相色谱气相色谱质谱质谱分离分离鉴定鉴定B BA AC CD D第33页，共41页，编辑于2022年，星期五基本原理基本原理：质谱分析是将：质谱分析是将样品样品转化为运动的带转化为运动的带电电气态离子碎片气态离子碎片，于磁场中按，于磁场中按质荷比质荷比(m/z)大小分大小分离
31、离并记录的分析方法。并记录的分析方法。分子离子分子离子碎片离子碎片离子重排裂解重排裂解碰撞裂解碰撞裂解第34页，共41页，编辑于2022年，星期五第35页，共41页，编辑于2022年，星期五2、色谱定量分析、色谱定量分析定量分析基础：定量分析基础：待测组分的质量或浓度与色谱峰的峰面积或峰高成正比待测组分的质量或浓度与色谱峰的峰面积或峰高成正比定量分析步骤：定量分析步骤：n准确测量检测器的响应信号准确测量检测器的响应信号 峰面积或峰高；峰面积或峰高；峰高乘以半峰宽法峰高乘以半峰宽法 A=1.065hY1/2 峰高乘以平均峰宽法峰高乘以平均峰宽法 A=1/2h(Y0.15+Y0.85)剪纸称重法剪
32、纸称重法 自动积分法自动积分法n准确求得比例常数准确求得比例常数 校正因子；校正因子；n正确选择合适的定量计算方法，将测得的峰面积或峰高换算为组分的百正确选择合适的定量计算方法，将测得的峰面积或峰高换算为组分的百分含量。分含量。第36页，共41页，编辑于2022年，星期五（1）校正因子）校正因子n绝对校正因子绝对校正因子n相对校正因子：组分相对校正因子：组分i与标准物质与标准物质s的绝对校正因子之比。的绝对校正因子之比。fi 值由文献中得，也可以自己测定。常用的标准物质是苯和正庚烷。值由文献中得，也可以自己测定。常用的标准物质是苯和正庚烷。面积校正因子面积校正因子峰高校正因子峰高校正因子第37
33、页，共41页，编辑于2022年，星期五（2）定量方法）定量方法归一化法；内标法；外标法归一化法；内标法；外标法优点：优点：简单、准确、受操作条件影响小简单、准确、受操作条件影响小缺点：缺点：样品中组分必须全部都有可测量的色谱峰；测量低含量或微量物样品中组分必须全部都有可测量的色谱峰；测量低含量或微量物质时误差较大质时误差较大m为待测物质质量，为待测物质质量，wi为组分为组分i在试样总量中所占的比例在试样总量中所占的比例归一化法：归一化法：所有出峰组分的含量之和按所有出峰组分的含量之和按100%计的定量方法。计的定量方法。i第38页，共41页，编辑于2022年，星期五内标法：内标法：将一定量的纯
34、物质作为内标物加入到准确称量的试样将一定量的纯物质作为内标物加入到准确称量的试样中，根据试样和内标物的质量以及被测组分和内标物的峰面积中，根据试样和内标物的质量以及被测组分和内标物的峰面积或峰高求出组分的含量或峰高求出组分的含量样品样品内标内标sim为待测物质质量，为待测物质质量，wi为组分为组分i在试样总量中所占的比例在试样总量中所占的比例第39页，共41页，编辑于2022年，星期五内标物要求：内标物要求：n试样中不存在试样中不存在n性质与被测物相近，能完全溶于样品中，但不与样品反应性质与被测物相近，能完全溶于样品中，但不与样品反应n内标物的峰与试样各组分的峰完全分开，且尽可能与待测组分峰接
35、近内标物的峰与试样各组分的峰完全分开，且尽可能与待测组分峰接近n内标物质量与被测物质量相近内标物质量与被测物质量相近内标法优缺点：内标法优缺点：n 优点：优点：当样品各组分不能全部流出色谱柱，或有些组分在检测器上无当样品各组分不能全部流出色谱柱，或有些组分在检测器上无信号，或只需对样品中某几个出现色谱峰的组分进行定量时可采用内标信号，或只需对样品中某几个出现色谱峰的组分进行定量时可采用内标法。消除外界条件不一致所引起的误差，适合于低含量组分的测定，法。消除外界条件不一致所引起的误差，适合于低含量组分的测定，ms/mi比值恒定，所以进样量不必准确比值恒定，所以进样量不必准确n 缺点：缺点：增加了内标物，对分离度的要求更高增加了内标物，对分离度的要求更高第40页，共41页，编辑于2022年，星期五外标法（标准曲线法）外标法（标准曲线法）n优点：优点：操作简单，计算方便，不需校正因子，适合于定量分析操作简单，计算方便，不需校正因子，适合于定量分析n缺点：缺点：对操作的一致性和进样的准确性要求很高对操作的一致性和进样的准确性要求很高1 2 3 4 5 6 SampleAmmiAi第41页，共41页，编辑于2022年，星期五