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1、分析化学经典第1页，共19页，编辑于2022年，星期五 18.1 概概 述述经典柱色谱法经典柱色谱法 平板色谱法平板色谱法 将普通规格的固定相装于管径较大的柱管内构成将普通规格的固定相装于管径较大的柱管内构成色谱柱，常压输送流动相，以重力和毛细管作用力色谱柱，常压输送流动相，以重力和毛细管作用力为驱动力，一般不具备在线检测器。为驱动力，一般不具备在线检测器。色谱过程在固定相构成的平面层内进行的色谱法。色谱过程在固定相构成的平面层内进行的色谱法。纸色谱法、薄层色谱法纸色谱法、薄层色谱法第2页，共19页，编辑于2022年，星期五 固定相：固体吸附剂固定相：固体吸附剂 吸附剂一般是多孔性微粒状物质，
2、具有较大的比表面积，吸附剂一般是多孔性微粒状物质，具有较大的比表面积，表面有许多吸附中心。表面有许多吸附中心。吸附是溶质在吸附剂表面的集中浓缩现象。吸附是溶质在吸附剂表面的集中浓缩现象。18.2 液固吸附柱色谱法液固吸附柱色谱法18.2.1 分离原理分离原理第3页，共19页，编辑于2022年，星期五18.2.2 吸附剂吸附剂 硅胶：硅胶：SiO2xH2O 具有硅氧交联结构、表面有许多硅醇基的多孔性微粒。具有硅氧交联结构、表面有许多硅醇基的多孔性微粒。吸附中心硅醇基，与极性化合物或不饱和化合物形吸附中心硅醇基，与极性化合物或不饱和化合物形成氢键而具有吸附性。成氢键而具有吸附性。第4页，共19页，
3、编辑于2022年，星期五硅胶的活化硅胶的活化 硅胶的活性与含水量有关，含水量高，活度级数高，吸附力弱。硅胶的活性与含水量有关，含水量高，活度级数高，吸附力弱。活化：将硅胶在活化：将硅胶在105110加热加热30分钟，除去水，使硅胶吸分钟，除去水，使硅胶吸附力增强的过程。附力增强的过程。硅胶具有弱酸性，适于分离酸性和中性物质，如硅胶具有弱酸性，适于分离酸性和中性物质，如有机酸、氨基酸、甾体。有机酸、氨基酸、甾体。第5页，共19页，编辑于2022年，星期五 洗脱作用洗脱作用 实质上是流动相分子与被分离的组分实质上是流动相分子与被分离的组分分子竞争占据吸附剂表面活性中心的过程。分子竞争占据吸附剂表面
4、活性中心的过程。18.2.3 色谱条件的选择色谱条件的选择优化实验条件，使各组分分离：优化实验条件，使各组分分离：（1）试样的结构和性质）试样的结构和性质（2）吸附剂的活性）吸附剂的活性（3）流动相的极性）流动相的极性洗脱作用洗脱作用第6页，共19页，编辑于2022年，星期五（1）被测物质的结构与性质）被测物质的结构与性质 18.2.3 色谱条件的选择色谱条件的选择物质极性物质极性a.基本母核相同，则分子中基团的极性越强，整个基本母核相同，则分子中基团的极性越强，整个分子的极性也越强分子的极性也越强b.分子中双键越多，吸附能力越强，共轭双键多，吸附力分子中双键越多，吸附能力越强，共轭双键多，吸
5、附力也增强也增强第7页，共19页，编辑于2022年，星期五第8页，共19页，编辑于2022年，星期五（3）流动相的选择）流动相的选择极性相似相溶极性相似相溶 分离极性大的组分，选用极性大的溶剂分离极性大的组分，选用极性大的溶剂作为流动相；分离极性小的组分，选用极性作为流动相；分离极性小的组分，选用极性小的溶剂作为流动相小的溶剂作为流动相第9页，共19页，编辑于2022年，星期五18.4 平面色谱参数平面色谱参数18.4.1 定性参数定性参数 2、相对比移值、相对比移值 定时展开（定时洗脱）：观测在同一展开时间内组分与定时展开（定时洗脱）：观测在同一展开时间内组分与展开剂迁移的距离。展开剂迁移的
6、距离。1、比移值、比移值0.20.8第10页，共19页，编辑于2022年，星期五18.4.2 相平衡参数相平衡参数1、分配系数与比移值的关系、分配系数与比移值的关系第11页，共19页，编辑于2022年，星期五3、影响比移值的因素、影响比移值的因素 a.被分离物质的结构和性质被分离物质的结构和性质 b.薄层板的性质薄层板的性质 c.展开剂的性质展开剂的性质 d.温度（分配色谱）温度（分配色谱）e.展开室内的展开剂蒸气饱和度展开室内的展开剂蒸气饱和度在硅胶吸附薄层色谱法中，在硅胶吸附薄层色谱法中，极性强的组分，极性强的组分，K大，大，Rf小小在硅胶吸附薄层色谱法中，在硅胶吸附薄层色谱法中，增加展开
7、剂的极性，极性增加展开剂的极性，极性大的组分，大的组分，Rf增大增大第12页，共19页，编辑于2022年，星期五18.4.3 分离参数分离参数1、分离度（、分离度（resolution，R）2、分离数、分离数 在在Rf0和和Rf1之间可能分离之间可能分离的组分的最大数目。的组分的最大数目。第13页，共19页，编辑于2022年，星期五18.5 薄层色谱法（薄层色谱法（TLC）将固定相均匀地涂铺在具有光洁表面的玻璃、塑将固定相均匀地涂铺在具有光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离料或金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法。的方法。吸附薄层色谱法吸附薄层色谱法固定相固
8、定相吸附剂（硅胶）吸附剂（硅胶）第14页，共19页，编辑于2022年，星期五18.5.4 操作方法操作方法薄层板的制备薄层板的制备点样点样展开展开第15页，共19页，编辑于2022年，星期五18.5.5 定性和定量分析定性和定量分析定定 位位（1）日光）日光（2）紫外光）紫外光（3）荧光薄层板）荧光薄层板（4）显色剂：碘、硫酸溶液、荧光黄）显色剂：碘、硫酸溶液、荧光黄第16页，共19页，编辑于2022年，星期五18.5.5 定性和定量分析定性和定量分析薄层扫描法（薄层扫描法（P472）：以一定波长的光照射展开：以一定波长的光照射展开后的薄层色谱板上被分离组分的斑点，测定其后的薄层色谱板上被分离
9、组分的斑点，测定其对光的吸收强度或所发出的荧光强度，进行定对光的吸收强度或所发出的荧光强度，进行定量分析的方法。量分析的方法。2.定量分析：定量分析：外标一点法（对照法）外标一点法（对照法）第17页，共19页，编辑于2022年，星期五示示 例例尿中雌三醇含量的测定尿中雌三醇含量的测定取尿液取尿液5mL，加，加3.0g硫酸铵，硫酸铵，离心后取沉淀，然后在离心后取沉淀，然后在pH9.5条件下用乙醚萃取；条件下用乙醚萃取；在碱性条件下，萃取液的在碱性条件下，萃取液的雌三醇与丹酰氯作用，生雌三醇与丹酰氯作用，生成丹酰雌三醇。用薄层展成丹酰雌三醇。用薄层展开荧光扫描法检测开荧光扫描法检测.第18页，共19页，编辑于2022年，星期五18.6 纸色谱法纸色谱法纸色谱法：以纸作为载体的色谱法纸色谱法：以纸作为载体的色谱法固定相：滤纸纤维上吸附的水分固定相：滤纸纤维上吸附的水分流动相（展开剂）：不与水混溶的有机溶剂流动相（展开剂）：不与水混溶的有机溶剂分配色谱法分配色谱法分离机理：根据溶解度的不同实现分离分离机理：根据溶解度的不同实现分离相似相溶相似相溶第19页，共19页，编辑于2022年，星期五