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1、目录定义临床应用优势前景样本接收标准及冻存工艺案例分析什么是脐带间充质干细胞？脐带间充质干细胞（MesnchymalStemCells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞。间充质干细胞间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。脐带获取干取干细胞的另一来源胞的另一来源我国科学家2006年首次从新生婴儿废弃的脐带组织中得到了一种多能干细胞，称作脐带间充质干
2、细胞(UC-MSC)。UC-MSC具有胚胎干细胞类似的增殖能力和多向分化潜能，且来源丰富、取材方便、低病毒感染率、无伦理障碍，又没有胚胎干细胞产生畸胎瘤的问题，并且抗原性很低。不产生免疫排斥反应，异体使用无需HLA配型。间充质干细胞治疗疾病的原理替代和修复死亡和受损伤的细胞；激活休眠和处于抑制状态的细胞；旁分泌作用（分泌神经营养因子、抗凋亡因子等）涉及病症肝脏疾病神经系统疾病心血管疾病血液系统疾病骨关节疾病烧伤糖尿病MSCs可能用于治疗以下疾病间充质干细胞多向分化作为种子细胞，临床上主要用于治疗机体无法自然修复的组织细胞和器官损伤的多种难治性疾病 是关键鉴于间充质干细胞具有多向分化潜能、能支持
3、造血和促进造血干细胞植入、调节免疫以及分离培养操作简便等特点作为免疫调节细胞，治疗免疫排斥和自身免疫性疾病脐带间充质干细胞具有临床应用价值脐带间充质干细胞具有临床应用价值泌尿系统：肾实质的修复；消化系统：肝组织的修复；内分泌系统：胰岛细胞的修复；神经系统：脑、脊髓损伤的修复；血液系统：化疗、放疗后造血系统的修复；循环系统：心肌修复、血管修复；免疫系统：调节免疫，移植治疗时可降低免疫排斥反应；衰竭器官的结构和功能的修复和再生：最终替代组织和器官移植。间充质干细胞治疗途径腰穿途径静脉途径局部种植介入途径优势1、取材方便：采集过程简单、无痛苦，不影响母子健康；2、细胞数量丰富：增值能力强，可为组织器
4、官的修复和再生提供所需的大量细胞；3、免疫原性低：具有独特的免疫调节功能，自体使用不引起免疫排斥反应，异体移植还可降低免疫反应；4、不涉及社会、伦理及法律方面的更多争议。前景干细胞治疗是继药物治疗、手术治疗之后的又一场医疗革命。目前，发达国家已经开始将干细胞治疗技术用于临床治疗自身免疫性疾病、心肌梗死、脊髓损伤、心力衰竭等疾病。间充质干细胞前景干细胞的魅力在于：一旦身体需要，这些细胞可按照发育途径通过分裂而产生分化成熟的体细胞。也许在某一天，人们突然发现，人体器官可以在实验室按需要、按流程生产，血细胞、脑细胞、骨骼、心肌细胞、肝脏、神经等的更换都不成问题，即使患上白血病、帕金森氏症和癌症这些不
5、治之症也能绝处逢生。供者筛选供者筛选供者需要提供供者的既往病史、现病史、家族史等资料。样本采集运输要求脐带采集标准：1.脐带长度不得低于20cm2.脐带两端均在2-3cm处结扎3.脐带保存液在有效期内，并且无明显颜色变化4.脐带保存瓶无漏液现象，密封严实、无裂横5.采集套装内容完整，无缺失6.采集信息登记完整、字迹清楚易辨认7.脐带运输时间在规定范围内8.温度控制在适度范围内（0度-25度）样本接收标准脐带的接收标准：1.样本信息一致、无误，并能追溯至脐带所有人。2.母血采集量5ml脐血检测样本采集量5ml3.采集套装内容完整，无缺失；采集信息登记完整、字迹清楚易辨认。4.无可能造成供者基因型
6、异常的家族史。5.供者健康调查表登记信息无异常。间充质干细胞的制备方式间充质干细胞的制备原理：脐带华通氏胶内富含间充质干细胞，通过分离获得华通氏胶后，并进行体外培养，利用间充质干细胞贴壁生长和可体外扩增特性，可获得更多的间充质干细胞。组织块分组织块分离法离法免疫五项检测均为阴性工艺流程简介供者筛选供者筛选采集采集接收接收制备制备培养培养冻存冻存复苏复苏发放发放运输运输临床应用临床应用信息反馈信息反馈间充质干细胞的制备方式华通氏胶的提取与培养华通氏胶的提取与培养华通氏胶提取：1.消毒2.清洗3.分离出两条动脉和一条静脉4.剥取华通氏胶5.剪碎华通氏胶（大小1mm3）6.接种至培养皿培养（密度2-
7、3g/10cm皿）间充质干细胞原代培养细胞补液和换液（原代培养）细胞补液和换液（原代培养）1.制备五天补液（观察是否有细胞爬出）2.八天换液间充质干细胞的冻存细胞收集前须给检测送样做细菌检测和流式（CD90+、CD105+、CD166+）冷冻保护剂（胎牛血清+DMSO）配制：DMSO10%冷冻方式深低温冰箱梯度降温细胞治疗程序 1 1、治疗前咨询：治疗前咨询：明确诊断，明确疾病处于哪一期；明确诊断，明确疾病处于哪一期；2 2、治疗风险：、治疗风险：分析利弊；可能的副作用；获益分析利弊；可能的副作用；获益 3 3、知情同意：、知情同意：治疗前准备 1).1).安全检测安全检测:菌检；菌检；2).
8、2).个体化治疗方案设计：每一位病个体化治疗方案设计：每一位病人的治疗方案，都根据其评价结果具人的治疗方案，都根据其评价结果具体制定体制定;3).3).需要的细胞数量；需要的细胞数量；4).4).细胞的使用方法；细胞的使用方法；5).5).可能出现的不良反应及应对措施。可能出现的不良反应及应对措施。间充质干细胞质量要求细菌检测细菌检测内毒素检测内毒素检测革兰氏检测革兰氏检测支原体检测支原体检测活性检测90%阴性阴性细胞发放1.细胞的保存(基质：生理盐水或者保存液）2.运输要求：时间、温度3.病人信息填写完整4.样本检测合格MSCMSC治疗禁忌证：治疗禁忌证：1.1.怀孕。怀孕。2.2.精神病。
9、精神病。3.3.严重的心、肝、肾、肺功能不全。严重的心、肝、肾、肺功能不全。3.3.不能控制的严重感染。不能控制的严重感染。4.4.合并其他有致命危险的疾病。合并其他有致命危险的疾病。5.5.一般受者年龄不超过一般受者年龄不超过6565岁岁 （个别患者个别患者6565岁岁）。）。6.6.自体免疫性疾病晚期。自体免疫性疾病晚期。7.7.恶性肿瘤恶性肿瘤。8.HIV 8.HIV 阳性阳性案例分析干细胞临床应用一、肝硬化一、肝硬化细胞移植有可能成为肝硬化治疗的最佳备选方案。越来越多的体内外实验表明MSC可以横向分化为功能性肝细胞，动物研究表明脐带MSC可以抑制诱导型的肝硬化发生，并促进肝硬化的消退。
10、临床资料本组男10例，女2例，年龄38-63岁。均为慢性乙型肝炎，肝硬化,Child-Pugh分级B级9例，C级3例。健康婴儿脐带提取间充质干细胞经实验室传代、扩增，取108制成40ml混悬液，第一次经肝动脉注入，第二次以后为静脉输注，每周一次，共4次。4周后复查生化指标。结果食欲改善、体力好转11例（91.66%）；腹胀减轻11例（91.66%）；腹水减少、下肢浮肿减轻10例（83.33%）。12例患者术中均未发生严重并发症，术后无不良反应。12例肝硬化患者脐带间充质干细胞移植前后实验室指标变化 ALB(g/L)ALT(U/L)TBIL(mol/L)PT(s)ALB(g/L)ALT(U/L)
11、TBIL(mol/L)PT(s)移移 植植 前前 30.694.32 122.7889.32 35.3221.61 17.894.4930.694.32 122.7889.32 35.3221.61 17.894.49移植后移植后 4 4周周 36.285.81 65.6720.63 33.7519.71 15.684.1436.285.81 65.6720.63 33.7519.71 15.684.14P P 值值 0.01 0.05 0.05 0.01 0.05 0.05 MSC治疗肝硬化的机制主要有以下几个方面：1)MSC分化形成正常肝细胞，补充肝细胞数量，改善肝功能；2)MSC分泌细胞
12、因子/生长因子、抑制炎症反应；3)MSC抑制肝星形细胞，活化、阻止细胞外基质的生成；4)MSC激活卵原细胞，促进肝细胞再生；5)MSC降解肝内过量的细胞外基质。二、脊髓损伤临床资料本组男11例，女4例。年龄11-48岁，平均37岁。病程4个月-5年，平均1.2年。治疗前均有损伤平面以下肌力、肌张力减退，其中尿失禁9例，大便失禁7例。临床资料脐带间充质干细胞108，第一次、第三次制成混悬液20ml，其中5ml通过腰穿作椎管内注射，另外15ml经静脉输注。第二次、第四次制成混悬液40ml，作静脉输注。每次间隔一周，共4次为一疗程。评价标准感觉平面恢复2个椎体节段以上，肌力恢复2级及以上，肌张力恢复2级及以上，大小便能控制，达到上述之一者，为显效。有改善但达不到上述标准，为有效。结果15例患者，显效5例，有效9例，无效1例。三、肌萎缩侧索硬化症肌萎缩侧索硬化症(amyotrphic lateral sclerosis，ALS)是一种累及锥体束上、下运动神经元(脊髓、大脑、脑干)的进行性变性疾病，发病后25年内死亡，主要死因为呼吸衰竭，目前临床无有效治疗方法。结果4名患者经MSC治疗后用力肺活量和ALS功能评分的线性衰减趋势明显变缓。有效率达44.4%。研究结论为MSC治疗ALS安全、耐受性好、无明显急性或长期毒性，且疗效颇具前景。