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1、分光光度计的校正和检验分光光度计的校正和检验第1页，此课件共10页哦721可见分光光度计可见分光光度计第2页，此课件共10页哦使用方法使用方法n721型分光光度计其波长范围360800nm，色散元件为三角棱形.n1.检查仪器各调节钮的起始位置是否正确，接通电源开关，打开样品室暗箱盖，使电表指针处于“0”位，预热20min后，再选择须用的单色光波长和相应的放大灵敏度档，用调“0”电位器调整电表为T=0%。n2.盖上样品室盖使光电管受光，推动试样架拉手，使参比溶液池（溶液装入4/5高度，置第一格）置于光路上，调节100%透射比调节器，使电表指针指T=100%。n3.重复进行打开样品室盖，调0，盖上
2、样品室盖，调透射比为100%的操作至仪器稳定。第3页，此课件共10页哦n4.盖上样品室盖，推动试样架拉手，使样品溶液池置于光路上，读出吸光度值。读数后应立即打开样品室盖。n5.测量完毕，取出比色皿，洗净后倒置于滤纸上晾干。各旋钮置于原来位置，电源开关置于“关”，拔下电源插头。n6.放大器各档的灵敏度为：“l”1倍；“2”10倍；“3”20倍，灵敏度依次增大。由于单色光波长不同时，光能量不同，需选不同的灵敏度档。选择原则是在能使参比溶液调到T=100%处时，尽量使用灵敏度较低的档，以提高仪器的稳定性。改变灵敏度档后，应重新调“0”和“100”。第4页，此课件共10页哦n4.盖上样品室盖，推动试样
3、架拉手，使样品溶液池置于光路上，读出吸光度值。读数后应立即打开样品室盖。n5.测量完毕，取出比色皿，洗净后倒置于滤纸上晾干。各旋钮置于原来位置，电源开关置于“关”，拔下电源插头。n6.放大器各档的灵敏度为：“l”1倍；“2”10倍；“3”20倍，灵敏度依次增大。由于单色光波长不同时，光能量不同，需选不同的灵敏度档。选择原则是在能使参比溶液调到T=100%处时，尽量使用灵敏度较低的档，以提高仪器的稳定性。改变灵敏度档后，应重新调“0”和“100”。第5页，此课件共10页哦1.波长校正波长校正n分光光度计常需要波长校正，检查仪器的波长刻度与实际波长是否能较好的保持一致，以减小误差。n稀土玻璃（镨钕
4、玻璃，钬玻璃）在相当宽的波长范围内特征吸收峰，如通常采用镨钕玻璃在573nm和586nm的双峰以及741nm和808nm等处的吸收峰来对分光光度计的波长刻度进行校正。一般情况下，可见分光光度计的波长误差允许在3nm范围内。利用某些本身有较强特征谱线的光源也可对波长进行校正，如氘灯和汞灯广泛用于紫外线分光光度计的校正。此外，苯蒸汽在紫外区有很强的特征吸收峰，用它来校正波长也很方便。第6页，此课件共10页哦2.吸光度校正吸光度校正n在实际工作中，有时需要对仪器的吸光度标准进行检查和校正。校正的方法是将0.0303g干燥衡重的K2Cr2O7 溶于1L0.05mol.L-1 的H2SO4溶液中，用1c
5、m吸收池，在25C测定不同波长下的吸光度。第7页，此课件共10页哦波长波长/nm吸光度吸光度投射比投射比/(%)波长波长/nm吸光度吸光度投射比投射比/(%)2200.44635.83400.31648.32300.17167.43500.55927.62400.29550.73600.83014.82500.49631.93700.98710.32600.66323.33800.93211.72700.74518.03900.69520.22800.71219.44000.39640.22900.42837.34200.12475.13000.14970.94400.05488.23100.
6、04889.54600.01896.03200.06386.44800.00499.13300.14971.05000.000100表3-6 重铬酸钾溶液吸光度第8页，此课件共10页哦3.散杂光的检验散杂光的检验n由于仪器光源表面对光的反射和散射，单色光中有一定的杂散光。杂散光可影响摩尔吸光系数与吸光度之间的直线关系。在仪器的光路系统中，往往采用一定的措施避免杂散光的影响。如在721型分光光度计中就装有保护玻璃片，以减少杂散光的影响。杂散光的检验是在较短波长下，测定某选定溶液的透射比。药典规定用一定浓度的NaI或NaNO3溶液检查，其投射比应小于规定值。第9页，此课件共10页哦4.稳定性的检验稳定性的检验n稳定性通常检验如下：将仪器预热后，精确调节投射比为0%，在规定时间内观察其变化量是否符合要求。0%T稳定性是与暗电流有关的指标。在0%T检验合格后，再检验100%T稳定性。紫外-可见分光光度计应在紫外区和可见光各测一次。第10页，此课件共10页哦