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1、第12章抗生素类药物的分析本讲稿第一页，共九十九页第一节第一节 概述概述一、一、抗生素药物的特点抗生素药物的特点抗生素的定义抗生素的定义在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称制作用的化学物质的总称.抗生素的来源抗生素的来源1.1.生物合成（发酵）生物合成（发酵）2.2.化学合成或半合成化学合成或半合成本讲稿第二页，共九十九页与化药相比与化药相比,其结构、组成更复杂表现其结构、组成更复杂表现为为:化学纯度较低化学纯度较低 (同系物多同系物多,异构体多异构体多,降解物多降解物多)活性组分易发生变异活性组分易发生变异稳定性差稳定
2、性差本讲稿第三页，共九十九页抗生素药物的质量分析抗生素药物的质量分析分析项目：鉴别，检查，含量测定分析项目：鉴别，检查，含量测定分析方法：理化方法，生物学方法分析方法：理化方法，生物学方法(一一)鉴别试验鉴别试验（主要为（主要为理化理化方法）方法）1.1.官能团的显色反应官能团的显色反应2.2.光谱法光谱法(IR,UV)(IR,UV)3.3.色谱法色谱法4.4.生物学法生物学法本讲稿第四页，共九十九页(二二)检查检查1.影响产品稳定性的指标影响产品稳定性的指标2.控制有机和无机杂质的指标控制有机和无机杂质的指标3.与临床安全性密切相关的指标与临床安全性密切相关的指标4.其他指标其他指标本讲稿第
3、五页，共九十九页(三三)含量测定或效价测定含量测定或效价测定 1.微生物检定法微生物检定法测定抗生素抑菌或杀菌的能力测定抗生素抑菌或杀菌的能力优点优点:（1 1）测定原理与临床应用一致，反映医疗价值。）测定原理与临床应用一致，反映医疗价值。（2 2）灵敏度高，检品甚微。）灵敏度高，检品甚微。（3 3）适用范围广，精制品、纯度差制品、）适用范围广，精制品、纯度差制品、新发现、已知的都适用。新发现、已知的都适用。（4 4）同一类抗生素不需分离，一次测定总效价。）同一类抗生素不需分离，一次测定总效价。缺点缺点1 1、操作繁琐、操作繁琐2 2、培养时间长（、培养时间长（161624h）2 2、测定误差
4、大（、测定误差大（10）本讲稿第六页，共九十九页（二）化学及物理化学方法（二）化学及物理化学方法以理化方法测定主药含量以理化方法测定主药含量优点优点1.准确度高准确度高2.简单、快速简单、快速1.不一定代表生物效价不一定代表生物效价缺点缺点2.易受杂质干扰易受杂质干扰本讲稿第七页，共九十九页 分类分类（按结构与性质）：（按结构与性质）：内酰胺类、氨基糖苷类、内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类、四环素类、大环内酯类、多烯大环类、多肽类、苯烃胺类多烯大环类、多肽类、苯烃胺类 蒽环类、其他抗生素类蒽环类、其他抗生素类本讲稿第八页，共九十九页 第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素包括包括
5、:青霉素族和头孢菌素族青霉素族和头孢菌素族,分子结构均含有分子结构均含有内酰胺环内酰胺环 1 1、结构、结构 青霉素类青霉素类头孢菌素类头孢菌素类青霉素族和头孢菌素族分子都有青霉素族和头孢菌素族分子都有一个游离羧基和酰一个游离羧基和酰胺侧链。氢化噻唑环或氢化噻嗪环与胺侧链。氢化噻唑环或氢化噻嗪环与内酰胺内酰胺环并合的杂环环并合的杂环,分别构成二者的母核分别构成二者的母核.6-APA7-ACA本讲稿第九页，共九十九页青霉素分子中含有青霉素分子中含有三个手性碳原子三个手性碳原子(C3,C5,C6),头孢菌素族分子头孢菌素族分子两个手性碳原子两个手性碳原子(C6,C7),青霉素分子中的母核称为青霉素
6、分子中的母核称为6-氨基青霉烷酸氨基青霉烷酸(6-APA),头孢菌素族分子中的母核称为头孢菌素族分子中的母核称为7-氨基头孢菌烷酸氨基头孢菌烷酸(7-ACA)本讲稿第十页，共九十九页（青霉素，青霉素（青霉素，青霉素G、苄青霉素）、苄青霉素）通常以钾盐，钠盐形式存在通常以钾盐，钠盐形式存在普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素本讲稿第十一页，共九十九页氨苄西林（氨苄青霉素）氨苄西林（氨苄青霉素）或以钠盐形式存在或以钠盐形式存在本讲稿第十二页，共九十九页阿莫西林阿莫西林（羟氨苄青霉素）（羟氨苄青霉素）本讲稿第十三页，共九十九页头孢氨苄头孢氨苄本讲稿第十四页，共九十九页头孢拉啶头孢拉啶（注意取代基非苯环）（注
7、意取代基非苯环）本讲稿第十五页，共九十九页头孢羟氨苄头孢羟氨苄本讲稿第十六页，共九十九页头孢噻吩钠头孢噻吩钠本讲稿第十七页，共九十九页酸性酸性2、性质性质与碱金属与碱金属(Na+、K+)成盐易溶于水成盐易溶于水,遇酸则析出游离基的白色沉淀遇酸则析出游离基的白色沉淀（1 1）羧基）羧基Na本讲稿第十八页，共九十九页与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐，难溶于成盐，难溶于水，易溶于甲醇等有机溶剂水，易溶于甲醇等有机溶剂 普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素本讲稿第十九页，共九十九页（2）手性）手性C 头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性根据此性质，可用于鉴别
8、和含量测定根据此性质，可用于鉴别和含量测定本讲稿第二十页，共九十九页 （3）共轭体系）共轭体系 头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 O=C-N-C=C 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 UV本讲稿第二十一页，共九十九页（四）（四）内酰胺环的不稳定性内酰胺环的不稳定性 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 室温密封可以保存室温密封可以保存3 3年以上年以上 水溶液水溶液 不稳定不稳定随随PH和温度有很大变化。和温度有很大变化。青霉素水溶液在青霉素水溶液在PH6-6.8时较稳定时较稳定本类药物在本类药物在酸，碱，青霉素酶，羟胺，及某些金酸，碱，青霉
9、素酶，羟胺，及某些金属离子（铜，铅，汞，银）或氧化剂属离子（铜，铅，汞，银）或氧化剂等作用下，等作用下，易发生易发生水解和分子重排水解和分子重排原因：原因：四元环张力大四元环张力大酰胺键易水解酰胺键易水解含水量和纯度含水量和纯度本讲稿第二十二页，共九十九页青霉素的降解反应青霉素的降解反应1.1.青霉素在青霉素在pH2 pH2 酸性条件下生成青霉酸，青霉酸在酸性条酸性条件下生成青霉酸，青霉酸在酸性条件下，件下，100100降解成降解成青霉醛，青霉胺和青霉醛，青霉胺和COCO2 22.2.青霉素在青霉素在pH4 pH4 酸性条件下生成酸性条件下生成青霉烯酸青霉烯酸3.3.青霉素在青霉素在碱性条件碱
10、性条件下或下或青霉素酶青霉素酶作用生成作用生成青霉噻唑酸青霉噻唑酸（内酰胺环的酰胺键发生断裂），青霉噻唑酸在氯化内酰胺环的酰胺键发生断裂），青霉噻唑酸在氯化汞作用生成汞作用生成青霉醛，青霉胺和青霉醛，青霉胺和COCO2 24.4.青霉素与青霉素与NHNH2 2OHOH生成生成青霉噻唑酰基羟胺酸青霉噻唑酰基羟胺酸本讲稿第二十三页，共九十九页本讲稿第二十四页，共九十九页二二.鉴别试验鉴别试验（一）呈色反应（一）呈色反应1.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应-内酰胺类内酰胺类NaOH呈色呈色Fe3+H+开环开环本讲稿第二十五页，共九十九页H+Fe3+/3 呈色呈色本讲稿第二十六页，共九十九页例：例：ChP(2
11、005)头孢哌酮头孢哌酮鉴别鉴别 取本品取本品10mg，加水，加水2ml与与盐盐 酸羟胺溶液酸羟胺溶液取取34.8%盐酸羟胺溶盐酸羟胺溶 液液1份份，醋醋酸酸钠钠-氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液1份份，乙乙醇醇4份份3ml，振振摇摇溶溶解解后后，放放置置5min，加加酸酸性性硫硫酸酸铁铁铵铵试试液液1ml，摇匀，显摇匀，显红棕色红棕色。本讲稿第二十七页，共九十九页2.2.类似肽键的反应类似肽键的反应 A.A.茚三酮反应茚三酮反应-氨基氨基本讲稿第二十八页，共九十九页-氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮缩合缩合蓝紫色蓝紫色本讲稿第二十九页，共九十九
12、页（开环分解）（开环分解）似肽键似肽键B.双缩脲反应双缩脲反应 -内酰胺类内酰胺类本讲稿第三十页，共九十九页蓝紫色蓝紫色本讲稿第三十一页，共九十九页3.3.其他显色反应其他显色反应 (1).(1).与变色酸与变色酸-硫酸反应硫酸反应青霉素青霉素 阿莫西林阿莫西林 氨苄西林氨苄西林活泼活泼“-CH2-”（分解）（分解）变色酸变色酸显色显色本讲稿第三十二页，共九十九页150（缩合）（缩合）本讲稿第三十三页，共九十九页（缩合）（缩合）本讲稿第三十四页，共九十九页(2).与与H2SO4-HNO3反应反应头孢菌素类头孢菌素类本讲稿第三十五页，共九十九页(3).(3).与重氮苯磺酸反应与重氮苯磺酸反应 头
13、孢哌酮头孢哌酮（偶合）（偶合）酚羟基酚羟基本讲稿第三十六页，共九十九页（偶合）（偶合）本讲稿第三十七页，共九十九页本讲稿第三十八页，共九十九页(4).(4).与铜盐反应与铜盐反应橄榄绿色橄榄绿色NaOH专属反应专属反应本讲稿第三十九页，共九十九页（二）（二）K+、Na+反应反应 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 +醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+焰色焰色紫色紫色 +0.1%四苯硼钠四苯硼钠+HAc白白 K+本讲稿第四十页，共九十九页（三）沉淀反应（三）沉淀反应1.遇酸遇酸在过量在过量HCl或或有机溶剂中溶解有机溶剂中溶解青霉素钾或钠盐，加水溶解后，加稀盐酸，青霉素钾或钠盐，加水溶解后，加稀盐酸，即析出难溶
14、于水的游离基白色沉淀，此沉淀即析出难溶于水的游离基白色沉淀，此沉淀能在有机溶剂或过量盐酸（与酰胺基成盐）能在有机溶剂或过量盐酸（与酰胺基成盐）中溶解中溶解本讲稿第四十一页，共九十九页2.2.有机胺盐反应有机胺盐反应 重氮化重氮化-偶合反应偶合反应 重氮化重氮化-偶合反应偶合反应芳伯氨基芳伯氨基本讲稿第四十二页，共九十九页普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素本讲稿第四十三页，共九十九页本讲稿第四十四页，共九十九页（2 2）与三硝基苯酚反应）与三硝基苯酚反应 二苄基乙二胺二苄基乙二胺二苄基乙二胺苦味酸盐二苄基乙二胺苦味酸盐本讲稿第四十五页，共九十九页mp三硝基苯酚三硝基苯酚酚酚本讲稿第四十
15、六页，共九十九页四四.光谱法光谱法 1.UV1.UV法法 利用最大吸收波长法利用最大吸收波长法 根据吸收光谱的最大吸收波长进行鉴别。根据吸收光谱的最大吸收波长进行鉴别。本讲稿第四十七页，共九十九页2.IR法法 反应分子的结构特征，各国药典均采用反应分子的结构特征，各国药典均采用IR对抗生素类药物进行鉴别对抗生素类药物进行鉴别本讲稿第四十八页，共九十九页色谱法色谱法（五）（五）1、TLC法法2、HPLC法法本讲稿第四十九页，共九十九页三三 特殊杂质检查特殊杂质检查特殊杂质：特殊杂质：高分子聚合物，有关物质，异构体高分子聚合物，有关物质，异构体采用方法：采用方法：HPLCHPLC法控制限量法控制限
16、量也有测定杂质的吸收度控制杂质的量也有测定杂质的吸收度控制杂质的量本讲稿第五十页，共九十九页HPLC法法（四）含量测定方法（四）含量测定方法ChP特点特点 快速、高效、灵敏快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）一法多用（鉴别、检查、含测）本讲稿第五十一页，共九十九页第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素链霉素链霉素 庆大霉素庆大霉素卡那霉素卡那霉素 新霉素新霉素 巴巴龙霉素龙霉素（碱性环己多元醇）（碱性环己多元醇）本讲稿第五十二页，共九十九页链霉胍链霉胍+链霉糖链霉糖+N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺 一
17、一.化学结构与性质化学结构与性质1.化学结构化学结构 链霉素链霉素本讲稿第五十三页，共九十九页链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺Pka 11.5Pka 7.7本讲稿第五十四页，共九十九页庆大霉素庆大霉素 糖糖 苷元苷元绛红糖胺绛红糖胺 +脱氧链霉胺脱氧链霉胺 +加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 紫素胺紫素胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺本讲稿第五十五页，共九十九页绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺Pka 8本讲稿第五十六页，共九十九页庆大霉素庆大霉素C复合物复合物 庆大霉素
18、庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素庆大霉素C2a R=CH3 R1=R2=H 本讲稿第五十七页，共九十九页2、性质性质多与硫酸成盐多与硫酸成盐链霉素链霉素 3个个庆大霉素庆大霉素 5个个碱性中心碱性中心碱性与溶解性碱性与溶解性（一）（一）硫酸盐易溶于水，不溶于有机硫酸盐易溶于水，不溶于有机 溶剂溶剂(二二)旋光性旋光性(分子结构含有多个氨基糖分子结构含有多个氨基糖)本讲稿第五十八页，共九十九页（三）苷的水解与稳定性（三）苷的水解与稳定性链霉素链霉素的硫酸盐水溶液，一般以的硫酸盐水溶液，
19、一般以pH5-7.5最为稳定，最为稳定，过酸或过碱条件下过酸或过碱条件下易水解失效；易水解失效；在酸性条件下，在酸性条件下，链霉素水解为链霉胍和链霉双糖链霉素水解为链霉胍和链霉双糖胺，进一步水解生成胺，进一步水解生成N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺在碱性条件下，在碱性条件下，链霉素水解为链霉胍和链霉双糖胺，链霉素水解为链霉胍和链霉双糖胺，并使链霉糖部分发生分子重排，生成麦芽酚，为链并使链霉糖部分发生分子重排，生成麦芽酚，为链霉素所特有，可以用于鉴别和含量测定霉素所特有，可以用于鉴别和含量测定本讲稿第五十九页，共九十九页氧化还原性：氧化还原性：链霉素分子结构中具有醛基，链霉素分子结构中具有醛基
20、，遇氧化剂如：高锰酸钾、氯酸钾、过氧化遇氧化剂如：高锰酸钾、氯酸钾、过氧化氢等易被氧化成链霉酸而失效；遇还原剂氢等易被氧化成链霉酸而失效；遇还原剂如：如：Vc、葡萄糖、半光氨酸等被还原为双、葡萄糖、半光氨酸等被还原为双氢链霉素，毒性增加氢链霉素，毒性增加 硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素:对光，热，空气均较稳定，对光，热，空气均较稳定，水溶液亦稳定，水溶液亦稳定，PH2-12时，时，100加热加热30min活性无明显变化活性无明显变化（四）紫外吸收光谱（四）紫外吸收光谱链霉素在链霉素在230nm有紫外吸收，庆大霉素没有紫有紫外吸收，庆大霉素没有紫外吸收。外吸收。本讲稿第六十页，共九十九页坂口反应坂口反
21、应N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反应糖胺反应麦芽酚反应麦芽酚反应（五）链霉素水解产物反应（五）链霉素水解产物反应本讲稿第六十一页，共九十九页 茚三酮反应茚三酮反应（一）（一）本类抗生素具有氨基糖苷结构，具有本类抗生素具有氨基糖苷结构，具有羟羟基胺类或者氨基酸基胺类或者氨基酸的性质，可以与茚三的性质，可以与茚三酮缩合成酮缩合成蓝紫色蓝紫色化合物化合物二二 鉴别试验鉴别试验（共有反应）（共有反应）本讲稿第六十二页，共九十九页N-N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应（二）（二）乙酰丙酮乙酰丙酮OH-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+樱红色缩合物樱红色缩合物（Elson-Morgan反
22、应）反应）庆大霉素庆大霉素（共有的反应）（共有的反应）本讲稿第六十三页，共九十九页(缩合缩合)本讲稿第六十四页，共九十九页樱红色樱红色对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+本讲稿第六十五页，共九十九页 麦芽酚反应麦芽酚反应（三）（三）（链霉素特有反应）链霉素特有反应）H+分子重排分子重排本讲稿第六十六页，共九十九页紫红紫红麦芽酚麦芽酚本讲稿第六十七页，共九十九页链霉胍特有反应链霉胍特有反应8-8-羟基喹啉羟基喹啉坂口反应坂口反应（四）（四）-萘酚萘酚链霉素加氢氧化钠水解生成链霉素加氢氧化钠水解生成链霉胍，链链霉胍，链霉胍和霉胍和8-8-羟基喹啉（或羟基喹啉（或萘酚萘酚）分别与分别与次溴酸钠次溴酸
23、钠反应，各自产物相互作用生成反应，各自产物相互作用生成橙红色化合物橙红色化合物本讲稿第六十八页，共九十九页H+IR法法（七）（七）庆大霉素无庆大霉素无UV吸收吸收TLC、HPLC法法（八）（八）(五五)硫酸盐反应硫酸盐反应(六六)UV本讲稿第六十九页，共九十九页链霉素杂质链霉素杂质（一）（一）链霉素链霉素B（甘露糖链霉素）（甘露糖链霉素）链霉素分子中的链霉素分子中的N-甲基甲基-L-葡萄糖胺的葡萄糖胺的C4位位上羟基连接上羟基连接1个个D-甘露糖甘露糖2.方法方法 TLC中的对照品法中的对照品法 （BP）1.来源来源 反应中间体反应中间体三、特殊杂质检查及组分分析三、特殊杂质检查及组分分析本讲
24、稿第七十页，共九十九页对微生物的活性无明显差异对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同毒副作用和耐药性不同导致各组分的多少影响产品的效价导致各组分的多少影响产品的效价和临床疗效和临床疗效发酵菌种不同发酵菌种不同工艺差别工艺差别C组分比例组分比例不一致不一致规定控制各组分的相对百分含量规定控制各组分的相对百分含量ChPUSPBPJP庆大霉素庆大霉素C组分的测定组分的测定（二）（二）本讲稿第七十一页，共九十九页max=330nm庆大霉素无庆大霉素无UVUV吸收吸收,当采用紫外检测当采用紫外检测器时，需进行衍生化处理。器时，需进行衍生化处理。USP(29)USP(29)1.衍生化原理衍生化原理
25、硼酸盐缓冲液硼酸盐缓冲液本讲稿第七十二页，共九十九页Ch.P（2005）采用蒸发光散射检测器）采用蒸发光散射检测器BP（2005）采用电化学检测器）采用电化学检测器本讲稿第七十三页，共九十九页四、四、含量测定含量测定链霉素、庆大霉素链霉素、庆大霉素抗生素微生物检定法抗生素微生物检定法本讲稿第七十四页，共九十九页892CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R11234567101112ABCD第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素(4个环个环)本讲稿第七十五页，共九十九页四环素四环素（TC）tetracycline本讲稿第七十六页，共九十九页金霉素金霉素(CTC)chlortet
26、racycline氯四环素氯四环素本讲稿第七十七页，共九十九页土霉素土霉素(OTC)oxytetracycline氧四环素氧四环素本讲稿第七十八页，共九十九页多西环素多西环素(DOTC)doxycycline脱氧土霉素脱氧土霉素本讲稿第七十九页，共九十九页美他环素美他环素（METC）metacycline本讲稿第八十页，共九十九页本讲稿第八十一页，共九十九页一、一、结构与性质结构与性质两性两性（一）（一）酚羟基、烯醇型羟基酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性1.与酸，碱均能成盐，一般情况下与酸，碱均能成盐，一般情况下以盐酸盐形式存在以盐酸盐形式存在2.强酸，强碱中溶解
27、度增大强酸，强碱中溶解度增大本讲稿第八十二页，共九十九页（二）（二）旋光性：具有不对称旋光性：具有不对称C 原子原子（三）（三）紫外吸收和荧光性质紫外吸收和荧光性质共轭双键，在共轭双键，在UV区有吸收；区有吸收；在紫外光的照射下产生荧光，降解产物亦有在紫外光的照射下产生荧光，降解产物亦有荧光荧光四环素经碱降解后产生黄色荧光四环素经碱降解后产生黄色荧光金霉素经碱降解后产生蓝色荧光金霉素经碱降解后产生蓝色荧光土霉素经酸降解后产生绿色荧光；经碱降解后土霉素经酸降解后产生绿色荧光；经碱降解后产生绿色荧光，加热，荧光转为蓝色产生绿色荧光，加热，荧光转为蓝色本讲稿第八十三页，共九十九页（四）与金属离子络合
28、，生成有（四）与金属离子络合，生成有色配位化合物色配位化合物具有酚羟基，烯醇基能与金属离子成具有酚羟基，烯醇基能与金属离子成不溶性盐类或配位化合物不溶性盐类或配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+本讲稿第八十四页，共九十九页稳定性稳定性（五）（五）1.差向异构化差向异构化淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光本讲稿第八十五页，共九十九页差向四环素差向四环素本讲稿第八十六页，共九十九页（土霉素、多西环素不易差向异构化）（土霉素、多西环素不易差向异构化）本讲稿第八十七页，共九十九页2.降解反应降解反应（1）酸性下降解）酸性下降解本讲稿第八十八页，共九十九页脱水四环素脱水四环素111211a655a本讲稿
29、第八十九页，共九十九页max=445nmmax=435nm橙黄色橙黄色本讲稿第九十页，共九十九页TCETCATCEATC脱水四环素脱水四环素本讲稿第九十一页，共九十九页（2）碱性下降解）碱性下降解（荧光）（荧光）本讲稿第九十二页，共九十九页二、二、鉴别试验鉴别试验H2SO4反应反应（一）（一）本讲稿第九十三页，共九十九页FeCl3反应反应（二）（二）本讲稿第九十四页，共九十九页Cl-反应反应（三）（三）1mol/L盐酸盐酸-甲醇（甲醇（1100）0.01mg/mlUV法法（四）（四）本讲稿第九十五页，共九十九页TLC法法（五）（五）正相分配薄层色谱正相分配薄层色谱EDTA 克服痕量金属离子造成的克服痕量金属离子造成的 拖尾现象拖尾现象（六）（六）HPLC本讲稿第九十六页，共九十九页三、三、检查检查有关物质有关物质（一）（一）HPLC法（法（2005版）版）盐酸四环素盐酸四环素本讲稿第九十七页，共九十九页（二）吸收度（二）吸收度杂质吸收度杂质吸收度本讲稿第九十八页，共九十九页四、四、含量测定含量测定ChP、USPHPLC法（外标法）法（外标法）本讲稿第九十九页，共九十九页