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1、实验四细菌的单染色及革兰氏染色第1页，共12页，编辑于2022年，星期五（一）简单染色法（一）简单染色法l目的要求目的要求学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法；色法；巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。l基本原理基本原理借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛细现借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等）和化学因素（如：正负离子象、渗透、吸附作用等）和化学因素（如：正负离子之间的相互吸引等）的作用而进行的。之间的相互吸引等）的作用而进行的。第2页，共1
2、2页，编辑于2022年，星期五l实实验器材验器材菌种菌种土壤样品分离纯化后得到的细菌、八叠球菌土壤样品分离纯化后得到的细菌、八叠球菌染色剂染色剂草酸铵结晶紫染液草酸铵结晶紫染液番红染液番红染液仪器或其他用具仪器或其他用具显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。第3页，共12页，编辑于2022年，星期五操操作作步步骤骤涂涂 片片干干 燥燥固固 定定 染染 色色 镜镜 检检 水水 洗洗 干干 燥燥第4页，共12页，编辑于2022年，星期五l实验结果实验结果根据观察结果，绘出细菌形态图。根据观察结果，绘出细菌形态图。l思考题思考题（P76P76五、五、2.
3、2.（）（）（2 2）（）（3 3）在进行细菌涂片时应注意哪些环节？在进行细菌涂片时应注意哪些环节？细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固定时细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固定时应注意什么？应注意什么？为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？第5页，共12页，编辑于2022年，星期五（二）革兰氏染色法（二）革兰氏染色法l目的要求目的要求学习并初步掌握革兰氏染色法；学习并初步掌握革兰氏染色法；了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。要性。l实验器材实验器材菌种菌种枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌1
4、2-18h12-18h营养琼脂斜面培养物营养琼脂斜面培养物大肠杆菌约大肠杆菌约24h24h营养琼脂斜面培养物营养琼脂斜面培养物土壤样品分离纯化后得到的细菌土壤样品分离纯化后得到的细菌第6页，共12页，编辑于2022年，星期五染色剂染色剂草酸铵结晶紫染液草酸铵结晶紫染液卢戈氏碘液卢戈氏碘液95%95%乙醇乙醇番红染色液番红染色液仪器或其他用具仪器或其他用具显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。第7页，共12页，编辑于2022年，星期五操操作作步步骤骤第8页，共12页，编辑于2022年，星期五第9页，共12页，编辑于2022年，星期五大肠杆菌与枯草芽孢
5、杆菌混合涂片油镜下形态（革兰氏染色）大肠杆菌萌发芽孢的枯草芽孢杆菌第10页，共12页，编辑于2022年，星期五l实验结果实验结果列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革兰氏列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革兰氏染色反应。染色反应。菌 种 形 态(绘图)颜 色 结果（、）第11页，共12页，编辑于2022年，星期五l思考题思考题你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？其中最关键的环节是什么？在革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，在革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题？用老龄细菌染色会出现什么问题？你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响最终结果？在什么情况下可以采用？影响最终结果？在什么情况下可以采用？第12页，共12页，编辑于2022年，星期五