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1、影响血液凝固的因素第1页，共22页，编辑于2022年，星期六【实验目的】【实验目的】观察某些因素对血液凝固的影响观察某些因素对血液凝固的影响 【实验原理】【实验原理】血液凝固过程中必须较多因子的参与，血液凝固过程中必须较多因子的参与，因此血液凝固受许多因素的影响，除凝血因此血液凝固受许多因素的影响，除凝血因子可直接影响血凝过程外，血凝还受接因子可直接影响血凝过程外，血凝还受接触面、温度等影响。触面、温度等影响。第2页，共22页，编辑于2022年，星期六血液凝固血液凝固(bloodcoagulation)概念：概念：血液从流动血液从流动的溶胶状态转变成不能的溶胶状态转变成不能流动的凝胶状态的过程
2、流动的凝胶状态的过程本质：本质：可溶的可溶的纤维纤维蛋白原蛋白原变为不溶的变为不溶的纤维纤维蛋白蛋白并交织成网，网罗并交织成网，网罗血细胞等成分形成凝血血细胞等成分形成凝血块。块。第3页，共22页，编辑于2022年，星期六血液的凝固是由一系列凝血因子参与的复杂的蛋白质酶血液的凝固是由一系列凝血因子参与的复杂的蛋白质酶解过程解过程凝血因子凝血因子(coagulation factor)(coagulation factor)凝血因子是无活性酶原，有限水解才具活性。凝血因子是无活性酶原，有限水解才具活性。除除因子因子(Ga2(Ga2)外其余多为蛋白质，在肝合成，其中外其余多为蛋白质，在肝合成，其中
3、、的合成必须有的合成必须有VitKVitK参与。参与。存在于组织中，其它因子均在血浆中。存在于组织中，其它因子均在血浆中。、都是丝氨酸蛋白酶，能对特定肽链有限水都是丝氨酸蛋白酶，能对特定肽链有限水解。解。、在反应中起辅因子的作用，可使相应丝氨酸蛋白酶凝血在反应中起辅因子的作用，可使相应丝氨酸蛋白酶凝血因子的催化速率增快上万倍。因子的催化速率增快上万倍。不能从肾小球滤过，降解和失活在肝脏完成。不能从肾小球滤过，降解和失活在肝脏完成。第4页，共22页，编辑于2022年，星期六内源性激活途径内源性激活途径（）外源性激活途径外源性激活途径（）凝血酶原激活物凝血酶原激活物凝血酶原凝血酶原凝血酶凝血酶纤维
4、蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白纤维蛋白血液凝固的过程血液凝固的过程第6页，共22页，编辑于2022年，星期六表面激活表面激活+第7页，共22页，编辑于2022年，星期六外源性凝血途径在凝血的外源性凝血途径在凝血的启动启动中起关键中起关键作用，组织因子是凝血反应过程的启动物。作用，组织因子是凝血反应过程的启动物。“截短的截短的”内源性凝血途径在放大阶段内源性凝血途径在放大阶段对凝血反应开始后的对凝血反应开始后的维持和巩固维持和巩固起重要作起重要作用。用。第8页，共22页，编辑于2022年，星期六血浆和血清：血浆和血清：血清中缺乏凝血因子和纤维蛋白原，但血清中缺乏凝血因子和纤维蛋白原，但增加了少量凝血过
5、程中血管内皮和血小板释增加了少量凝血过程中血管内皮和血小板释放的物质。放的物质。第9页，共22页，编辑于2022年，星期六血液凝固的控制血液凝固的控制2.血血液液的的稀稀释释、纤纤维维蛋蛋白白吸吸附附及及单单核核巨巨嗜嗜细细胞胞的的吞噬作用吞噬作用1.血管内皮抗凝作用血管内皮抗凝作用3.生理性抗凝物质生理性抗凝物质丝氨酸蛋白酶抑制物丝氨酸蛋白酶抑制物蛋白质蛋白质C系统系统组织因子途径抑制物（组织因子途径抑制物（TFPI）肝素肝素第10页，共22页，编辑于2022年，星期六纤维蛋白的溶解纤维蛋白的溶解 纤溶系统：纤溶系统：纤维蛋白纤维蛋白(原原)在纤维蛋白溶解酶在纤维蛋白溶解酶的作用下降解为纤维
6、蛋白降解物的作用下降解为纤维蛋白降解物(FDP)而分解液而分解液化的过程。化的过程。纤溶生理意义：纤溶生理意义：保持血流通畅，血液处于流动状态保持血流通畅，血液处于流动状态维持血管正常通透性维持血管正常通透性维持血液凝固与纤溶的动态平衡维持血液凝固与纤溶的动态平衡第11页，共22页，编辑于2022年，星期六纤溶的两个基本阶段：纤溶的两个基本阶段：纤溶酶原的激活；纤溶酶原的激活；纤维蛋白纤维蛋白(纤维蛋白原纤维蛋白原)的降解的降解纤溶酶原纤溶酶原纤溶酶纤溶酶纤维蛋白纤维蛋白(原原)纤维蛋白纤维蛋白(原原)降解产物降解产物纤溶酶原激活物纤溶酶原激活物纤溶酶原激活物抑制剂纤溶酶原激活物抑制剂纤溶酶抑
7、制剂纤溶酶抑制剂第12页，共22页，编辑于2022年，星期六纤溶酶原纤溶酶原激活物激活物组织型纤溶酶原激活物组织型纤溶酶原激活物(t-PA)：血：血管内皮合成，发挥局部溶栓作用，管内皮合成，发挥局部溶栓作用，保持血流通畅。保持血流通畅。尿激酶型纤溶酶原激活物：尿激酶型纤溶酶原激活物：肾小管、集合管产生，在组织修肾小管、集合管产生，在组织修复、伤口愈合过程中，血管外促复、伤口愈合过程中，血管外促进纤溶。进纤溶。纤溶酶原的激活：纤溶酶原的激活：第13页，共22页，编辑于2022年，星期六注意注意：（1 1）凝血是一个正反馈机制，一旦启动，必）凝血是一个正反馈机制，一旦启动，必迅速完成全过程。迅速完
8、成全过程。（2 2）CaCa2+2+在多个环节起作用，因此控制在多个环节起作用，因此控制CaCa2+2+就就能控制血凝。能控制血凝。（3 3）血凝过程是流水线，阻断其中一步，则）血凝过程是流水线，阻断其中一步，则凝血过程必终止。凝血过程必终止。第14页，共22页，编辑于2022年，星期六【实验对象】家兔家兔【实验器材与药品】【实验器材与药品】哺乳动物实验手术器械一套、哺乳动物实验手术器械一套、20ml20ml注射注射器器1 1副、副、小烧杯小烧杯2个、竹签、个、竹签、清洁小试管清洁小试管6 6支、支、水浴装置一套、冰块、棉花、石蜡油、滴水浴装置一套、冰块、棉花、石蜡油、滴管、肝素、草酸钾、管、
9、肝素、草酸钾、0.025mol/LCaCl2溶溶液、肺组织浸液、富血小板血浆、少血小液、肺组织浸液、富血小板血浆、少血小板血浆、板血浆、生理盐水生理盐水第15页，共22页，编辑于2022年，星期六【实验步骤和观察项目】【实验步骤和观察项目】1.1.麻醉：麻醉：1.5%1.5%戊巴比妥钠耳缘静脉注射戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，剂量麻醉，剂量2ml/kg2ml/kg体重体重 2.2.固定、备皮固定、备皮 气管插管气管插管 3.3.手术手术 颈总动脉插管颈总动脉插管。第16页，共22页，编辑于2022年，星期六4.做好准备工作：按下做好准备工作：按下2表做好各试管的准备、表做好各试管的准备、人员分工
10、、计时等。人员分工、计时等。表一表一 影响血凝的理化因素影响血凝的理化因素 实验条件实验条件 凝血凝血所需时间所需时间加棉花少许加棉花少许 用石蜡油润滑试管表面用石蜡油润滑试管表面保温于保温于3737水浴糟中水浴糟中 放置于冰浴糟中放置于冰浴糟中加肝素加肝素8 8单位单位(加血后摇匀加血后摇匀)加草酸钾加草酸钾1 12mg(2mg(加血后摇匀加血后摇匀)第17页，共22页，编辑于2022年，星期六 5.5.取血取血：打开动脉夹，经颈动脉插管放：打开动脉夹，经颈动脉插管放血入各试管，每支试管各采血约血入各试管，每支试管各采血约1.5ml(1.5ml(一一定要一次性采血完毕，多次放血可能会出定要一
11、次性采血完毕，多次放血可能会出现血液凝固于插管内而不能再放血现血液凝固于插管内而不能再放血)，注意，注意及时计时并将各试管尽快置于其实验条件及时计时并将各试管尽快置于其实验条件下，如摇匀、放入温浴槽、冰浴槽内等。下，如摇匀、放入温浴槽、冰浴槽内等。第18页，共22页，编辑于2022年，星期六 6.6.实验观察实验观察 每隔每隔30s30s将各试管轻轻倾斜一次，观察将各试管轻轻倾斜一次，观察其中的血液是否已凝固，发现其中的血液其中的血液是否已凝固，发现其中的血液已呈凝胶状而不再流动时记录其时间，最已呈凝胶状而不再流动时记录其时间，最后计算出各试管血液凝固所需的时间后计算出各试管血液凝固所需的时间
12、(在本在本实验条件下，如超过实验条件下，如超过3030分钟血液仍未凝则分钟血液仍未凝则视为视为“不凝不凝”)”)。第19页，共22页，编辑于2022年，星期六 观察内源性凝血、外源性凝血过程以及血小板对血液凝固的影观察内源性凝血、外源性凝血过程以及血小板对血液凝固的影响，取干洁小试管响，取干洁小试管3 3支，按表支，按表1-1 1-1 加入各种成分，摇匀，最后再加加入各种成分，摇匀，最后再加入入0.025mol/CaCl20.025mol/CaCl2溶液并同时开始计时，静置，第一管、第二管溶液并同时开始计时，静置，第一管、第二管每每15s15s倾斜一次，倾斜一次，第三管每隔第三管每隔5s5s倾
13、斜一次，观察器中的血浆已不倾斜一次，观察器中的血浆已不能流动即已完全凝固，并分别记录三个试管的血浆凝固时间能流动即已完全凝固，并分别记录三个试管的血浆凝固时间。表二表二 内源性和外源性凝血的观察内源性和外源性凝血的观察 试剂试剂 试管号试管号 1 2 3 1 2 3 富血小板血浆富血小板血浆(ml)0.2(ml)0.2 少血小板血浆少血小板血浆ml)0.2 0.2ml)0.2 0.2 生理盐水生理盐水(ml)0.2 0.2(ml)0.2 0.2 肺组织浸液肺组织浸液(ml)0.2(ml)0.2 0.025mol/LCaCl2 0.025mol/LCaCl2溶液溶液 0.2 0.2 0.2 0.
14、2 0.2 0.2 血浆凝固时间血浆凝固时间 第20页，共22页，编辑于2022年，星期六【分析讨论】【分析讨论】1.1.表一：表一：(1)(1)比较第一管（放棉花管）与第二管比较第一管（放棉花管）与第二管（石蜡油润滑管）内血液凝固的速度，并（石蜡油润滑管）内血液凝固的速度，并分析产生区别的原因。分析产生区别的原因。(2)(2)比较第三管（比较第三管（3737管）与第四管管）与第四管（冰浴管）内血液凝固的速度，并分析产（冰浴管）内血液凝固的速度，并分析产生区别的原因。生区别的原因。(3)(3)分析第五管与第六管内血凝方面发分析第五管与第六管内血凝方面发生变化的原因。生变化的原因。第21页，共22页，编辑于2022年，星期六 表二表二：1.1.纤维蛋白原在凝血过程中有何作用？纤维蛋白原在凝血过程中有何作用？2.2.血小板在凝血过程中有何作用？血小板在凝血过程中有何作用？3.3.内源性凝血和外源性凝血的主要区别内源性凝血和外源性凝血的主要区别在哪里？在哪里？第22页，共22页，编辑于2022年，星期六