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1、性病实验室检查性病实验室检查班班后业务学习后业务学习地点：行政楼5楼会议室时间：2014年11月23日性传播疾病实验室性传播疾病实验室相关检查相关检查一一、梅梅毒毒、淋淋病病、非非淋淋菌菌性性尿尿道道炎炎、尖尖锐锐湿湿疣疣、生殖器疱疹、软下疳、细菌性阴道病；生殖器疱疹、软下疳、细菌性阴道病；二、各性病的实验室检测的检测二、各性病的实验室检测的检测方法及临床意义；方法及临床意义；概述概述历史上：（传统历史上：（传统）把通过性活动传染的疾病称为把通过性活动传染的疾病称为性病性病 （Venereal diseases,VDVenereal diseases,VD）主要指主要指:梅毒梅毒(syphil
2、is)(syphilis)淋病淋病(gonorrhea)(gonorrhea)性病肉芽肿性病肉芽肿 软性下疳四种软性下疳四种又称又称经典性病经典性病概念更新概念更新上世纪年代以来发现上世纪年代以来发现许多病原体也可以通过许多病原体也可以通过性生活性生活传播传播概念有了大幅度的更新概念有了大幅度的更新迄今为止大约已发现余种性病迄今为止大约已发现余种性病同时：同时：四种性病大都有了明确诊断手段及治疗方法，明显地得到了抑制四种性病大都有了明确诊断手段及治疗方法，明显地得到了抑制 性性病病的的发发病病“顺顺位位谱谱”，有有了了变变化化，鲜鲜为为人人知知的的性性病病提提前前，而而久久为为人人知知的性病占
3、到了后位的性病占到了后位 1970 1970年，世界卫生组织把旧名称年，世界卫生组织把旧名称“性病性病”改为改为“性传播疾病性传播疾病”。（Sexually transmitted diseases,STDSexually transmitted diseases,STD）性病（性病（VDVD）：）：是指通过性交传染的、具有明显生殖器损是指通过性交传染的、具有明显生殖器损 害症状的全身性疾病。害症状的全身性疾病。4 4种种性传播疾病（性传播疾病（STDSTD）：）：是指通过性接触可以传染的一组传染病是指通过性接触可以传染的一组传染病,在在 我国我国,人们简称为性病人们简称为性病 。包容。包容2
4、020余种余种病毒病毒生殖器疱疹生殖器疱疹 单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒(HSV)(HSV)(主要由主要由HSV-2HSV-2引起引起)生殖器生殖器CMVCMV感染感染巨细胞病毒巨细胞病毒(CMV(CMV)乙型肝炎乙型肝炎 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(HBV)(HBV)甲型肝炎甲型肝炎 甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒(HAV)(HAV)尖锐湿疣尖锐湿疣 人乳头瘤病毒人乳头瘤病毒(HPV)(HPV)生殖器传染性软疣生殖器传染性软疣 传染性软疣病毒传染性软疣病毒获得性免疫缺陷综合征获得性免疫缺陷综合征(AIDS)(AIDS)人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒(HIV(HIV)非细菌性微生物非细菌性微生物性病性淋
5、巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿 (CT(CTL L型引起型引起)非淋菌性尿道非淋菌性尿道(宫颈宫颈)炎炎 沙眼衣原体沙眼衣原体(CT(CTD DK K型引起型引起)解脲支原体（解脲支原体（UUUU）人型支原体人型支原体(MH)(MH)生殖道支原体生殖道支原体(GU)(GU)梅毒梅毒 梅毒梅毒(苍白苍白)螺旋体螺旋体(TP)(TP)细菌细菌淋病淋病 奈瑟淋病双球菌奈瑟淋病双球菌(NG)(NG)腹股沟肉芽肿腹股沟肉芽肿 肉芽肿荚膜杆菌肉芽肿荚膜杆菌(DG,CBG)(DG,CBG)软下疳软下疳 杜克雷嗜血杆菌（杜克雷嗜血杆菌（HD)HD)细菌性阴道炎细菌性阴道炎 加特纳嗜血杆菌加特纳嗜血杆菌(GV)(GV
6、)志贺氏菌属志贺氏菌属 痢疾志贺氏菌感染痢疾志贺氏菌感染弯曲杆菌病弯曲杆菌病 弯曲杆菌弯曲杆菌 B B群链球菌群链球菌 阴部感染及阴道病阴部感染及阴道病细菌性阴道病细菌性阴道病 某些阴道厌氧菌某些阴道厌氧菌真菌真菌由白色念珠菌由白色念珠菌/拟酵母菌：拟酵母菌：念珠菌性阴道炎念珠菌性阴道炎 念珠菌性龟头包皮炎念珠菌性龟头包皮炎 外阴阴道真菌感染外阴阴道真菌感染表浅部真菌：表浅部真菌：股癣股癣 原虫原虫 ：滴虫性阴道炎滴虫性阴道炎 尿道炎尿道炎（阴道毛滴虫）（阴道毛滴虫）阿米巴病阿米巴病（溶组织阿米巴原虫）（溶组织阿米巴原虫）蓝氏贾第鞭毛虫感染蓝氏贾第鞭毛虫感染体表寄生虫：体表寄生虫：阴虱病阴虱病
7、（阴虱）（阴虱）阴部疥阴部疥（疥螨）（疥螨）让患者能接受让患者能接受 社会性很强的疾病社会性很强的疾病我国重点防治的性病我国重点防治的性病艾滋病艾滋病(AIDS)(AIDS)梅毒梅毒(syphilis)(syphilis)尖锐湿疣尖锐湿疣(condyloma acuminatum)(condyloma acuminatum)淋病淋病(Gonorrhea)Gonorrhea)生殖器疱疹生殖器疱疹(genital herpes)genital herpes)非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎(NGUNGU)软下疳软下疳(chancroid)chancroid)性病性淋巴肉芽肿性病性淋巴肉芽肿(lymph
8、ogranuloma Venereum)lymphogranuloma Venereum)STDSTD的诊断：的诊断：病史病史接触史接触史 临床表现临床表现 实验室检查实验室检查STDSTD监测和疗效判断的重要依据监测和疗效判断的重要依据 实验室检查实验室检查性病实验室检查特点性病实验室检查特点诊断技术种类较多（诊断技术种类较多（形态学、微生物学、免疫学、分形态学、微生物学、免疫学、分 子子生生物物学学等等许许多多检检测方法）测方法）临床检验工作中不确定性临床检验工作中不确定性（需借助图谱病原体形态（需借助图谱病原体形态 典典型型和和不不典典型型，可可借借助助书书籍籍资料篇幅有限资料篇幅有限疾
9、病的社会性疾病的社会性（健康、精神、经济、家庭和声誉健康、精神、经济、家庭和声誉）性病实验室诊断原则性病实验室诊断原则慎重：慎重：不能盲目滥用各种非标准检测方法、注重社会效益不能盲目滥用各种非标准检测方法、注重社会效益 和客观条件，和客观条件，新技术：新技术：对待新技术一定要科学比对，慎重使用对待新技术一定要科学比对，慎重使用梅毒梅毒一、梅毒的临床分期一、梅毒的临床分期后天梅毒后天梅毒 ：一期梅毒一期梅毒 二期梅毒二期梅毒 三期梅毒三期梅毒(晚期梅毒晚期梅毒)先天梅毒（胎传梅毒）先天梅毒（胎传梅毒）梅毒一期皮损-硬下疳梅毒二期皮损梅毒晚期损害二、梅毒的实验室诊断二、梅毒的实验室诊断 1.1.检
10、查病原体的试验检查病原体的试验 2.2.检测抗体检测抗体血清学检查血清学检查 检查病原体的试验检查病原体的试验1.1.暗视野显微镜检查法（暗视野显微镜检查法（WHOWHO推荐）推荐）2.Fontana-Tribondean2.Fontana-Tribondean镀银染色法镀银染色法（难、敏感性差）（难、敏感性差）3.3.单克隆免疫银光法（单克隆免疫银光法（DFIDFI）-PCR-PCR暗暗视视野野显显微微镜镜下下见见纤纤细细螺螺旋旋状状微微生生物物，长长约约4 414 14 m m，宽宽约约2 2 m m，8 81414个个规规则则的的螺螺旋旋，折折光光性性强强，运运动动缓缓慢慢，有规律。有规
11、律。螺螺旋旋有有三三种种活活动动方方式式，旋旋转转式式，蛇蛇形形式，伸缩式。式，伸缩式。暗视野显微镜检查临床意义暗视野显微镜检查临床意义1.1.可确证梅毒可确证梅毒-直接检查到梅毒螺旋体直接检查到梅毒螺旋体2.2.对对早早期期现现症症梅梅毒毒检检测测最最好好的的方方法法（一一期期、二二期期梅梅毒毒皮皮损损或或淋淋巴巴节节结结、孕妇羊膜穿刺）孕妇羊膜穿刺）需要仪器设备：暗视野显微镜需要仪器设备：暗视野显微镜选择试验注意事项选择试验注意事项1.1.清洁皮损表面清洁皮损表面用生理盐水清洁，用生理盐水清洁，不能用消毒液不能用消毒液2.2.取材取材-渗出液、尽量避免出血渗出液、尽量避免出血（降低阳性率）
12、（降低阳性率）3.3.口腔溃疡要谨慎口腔溃疡要谨慎4.4.阴阴性性结结果果不不能能排排除除梅梅毒毒可可能能性性-取取材材不不当当、皮皮损损致致数数量量不不足足、近近期使用抗生素、损害接近自然消退等期使用抗生素、损害接近自然消退等梅毒血清学检查梅毒血清学检查【原原理理】当当机机体体感感染染梅梅毒毒螺螺旋旋体体后后，经经过过一一定定潜潜伏伏期期，在在血血清清中中产产生生一一定定数数量量的的抗抗类类脂脂质质抗抗体体（非非特特异异性性的的反反应应素素）和和抗抗密密螺螺旋旋体体抗抗体体（特特异异性性免免疫疫球球蛋蛋白白），主主要要是是IgGIgG抗抗体体，因因此此，可可以以用用各各种种免免疫疫学学的的方
13、方法法来来检检测测反反应应素素或或抗抗体，协助梅毒的诊断。体，协助梅毒的诊断。两组试验：两组试验：1.1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验2.2.梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验两组试验的目的都是检测抗体两组试验的目的都是检测抗体非梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗非梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗-脂质抗体脂质抗体-非特异性非特异性）梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗-梅毒螺旋体抗体梅毒螺旋体抗体-特异性特异性）非特异性梅毒的血清学初筛试验非特异性梅毒的血清学初筛试验方法：方法：1.1.性病研究实验室试验性病研究实验室试验VDRLVDRL2.2
14、.不加热血清反应素试验不加热血清反应素试验USRUSR3.3.快速血浆反应素环状卡片试验快速血浆反应素环状卡片试验RPRRPR4.4.不加热甲苯胺红血清试验不加热甲苯胺红血清试验TRUSTTRUST 1.1.性性 病病 研研 究究 实实 验验 室室 试试 验验（venersal venersal disease disease research research laboratory laboratory testtest，VDRL)VDRL)：VDRLVDRL试试验验所所用用抗抗原原是是从从牛牛心心中中提提取取心心磷磷脂脂加加上上卵卵磷磷脂脂和和胆胆固固醇醇，梅梅毒毒螺螺旋旋体体在在破破坏坏
15、组组织织的的过过程程中中，体体内内释释放放一一种种抗抗原原性性心心磷磷脂脂，它它刺刺激激机机体体产产生生反反应应素素，这这种种反反应应素素与与牛牛心心中中提提取取的的心心磷磷脂脂在在体体外外有有抗抗原原抗抗体体反反应应。实实验验步步骤骤：将将待待检检血血清清先先灭灭活活，吸吸取取0.5ml0.5ml血血清清滴滴入入玻玻片片的的圆圆圈圈中中，使使血血清清涂涂布布扩扩散散到到整整个个圆圆圈圈。用用1ml1ml注注射射器器装装上上专专用用针针头头取取一一滴滴抗抗原原试试剂剂加加入入圆圆圈圈内内。用用转转动动器器或或手手转转动动玻玻片片4min4min，每每分分钟钟约约180180次次左左右右，立立即
16、即判判断断结结果。果。*试验时应用已知阳性血清对照。试验时应用已知阳性血清对照。结结果果判判定定：“”阴性阴性:仅见微小颗粒，液体浑浊。仅见微小颗粒，液体浑浊。“+”“+”弱弱阳阳性性:肉肉眼眼见见小小的的块块状状物物或或者者用放大镜见到块状物，液体浑浊。用放大镜见到块状物，液体浑浊。+阳阳性性:肉肉眼眼见见大大的的或或中中等等大大的的块块状物。状物。VDRLVDRL玻玻片片定定量量试试验验：将将待待测测血血清清用用生生理理盐盐水水在在小小试试管管中中作作6 6个个稀稀释释度度，原原倍倍血血清清、1:21:2、1:41:4、1:81:8、1:161:16、1:321:32，每每个个稀稀释释度度
17、样样本本取取0.5ml0.5ml加加于于玻玻片片圆圆圈圈中中，按按定性的方法测定和判断结果。定性的方法测定和判断结果。2.2.不不加加热热血血清清反反应应素素试试验验（unheated unheated serum serum reagin reagin testtest，USRUSR）：该该试试验验用用改改良良的的VDRLVDRL抗抗原原，稀稀释释后后离离心心沉沉淀淀，于于沉沉淀淀中中加加入入EDTAEDTA（二二胺胺四四乙乙酸酸二二钠钠）氯氯化化胆胆碱碱可可起起化化学学 灭灭活活 作作用用，所所以以血血清清不不必必灭灭活，抗原不必每天配制，在活，抗原不必每天配制，在4 488冰箱中保存冰箱
18、中保存6 6个月。个月。(1)USR(1)USR玻片定性试验玻片定性试验方法：方法：吸吸取取5050l l血血清清放放入入反反应应板板圈圈内内，并并均均匀匀涂涂布布整整个个圈圈。将将USRUSR抗抗原原轻轻轻轻摇摇匀匀，用用标标准准针针头头吸吸取取抗抗原原，每每个个标标本本中中加加1 1滴滴抗抗原原液液。将将反反应应板板置置旋旋转转器器旋旋转转4min4min，(1805)r/min(1805)r/min。立即用肉眼或显微镜观察结果。立即用肉眼或显微镜观察结果。本实验应用已知阳性血清作阳性对照。本实验应用已知阳性血清作阳性对照。结果判定：结果判定：根据凝集反应絮状物大小判断阳性程度根据凝集反应
19、絮状物大小判断阳性程度强阳性强阳性(3(34+)4+)：大或中等大小的絮状物，溶液清亮。大或中等大小的絮状物，溶液清亮。阳阳 性性(2+)(2+)：絮絮 状状 物物 比比 较较 小小，悬悬 液液 较较 清清 亮亮。弱阳性弱阳性(1+)(1+)：絮状物比较小，均匀分布，液体混浊。絮状物比较小，均匀分布，液体混浊。可可疑疑()()：抗抗原原颗颗粒粒较较粗粗一一般般属属于于阴阴性性反反应应。阴阴 性性()：抗抗 原原 颗颗 粒粒 均均 匀匀，针针 状状 细细 小小。（2 2）USRUSR定定量量试试验验 正正反反应应板板圆圆圈圈内内加加入入5050l l等等渗渗盐盐水水(一一般般做做6 6个个滴滴
20、度度，有有 必必 要要 者者 应应 继继 续续 稀稀 释释)。吸吸取取5050l l血血清清加加到到第第一一孔孔混混匀匀后后，再再吸吸取取5050l l至至第第二二孔孔稀稀释释，依依此此作作倍倍比比稀稀释释(1:2(1:21:64)1:64)，最最后后 所所 稀稀 释释 的的 圆圆 圈圈 内内 应应 弃弃 去去 5050l l 每每个个圆圆圈圈加加1 1滴滴抗抗原原混混匀匀，将将反反应应板板置置旋旋转转器器旋旋转转4min4min，(1805)(1805)转转/min/min。观观察察结结果果同同定定性性试试验验。记记录录出出现现1+1+阳阳性性反反应应的的最最高高血血清清稀稀释释倍倍数数，即
21、即抗抗体效价。体效价。3.3.快快速速血血浆浆反反应应环环状状卡卡片片试试验验（rapio rapio plasma plasma reagin reagin card card testtest，RPR)RPR)原原理理与与USRUSR试试验验基基本本相相同同，其其优优点点是是RPRRPR抗抗原原中中加加入入了了活活性性碳碳颗颗粒粒，试试验验在在特特制制的的白白色色纸纸卡卡上上进进行行，因因此此，容容易易判判断断结结果果，肉肉眼眼即即可可观观察察，不需显微镜，血浆也可进行检测。不需显微镜，血浆也可进行检测。(1)RPR(1)RPR定性试验定性试验吸吸取取5050l l血血清清或或血血浆浆放放
22、在在白白色色卡卡片片圈圈内内，并并均均匀匀涂涂布布整整个个圈圈内内(每每张张卡卡片片有有1010个个或或1212个个反反应应圈圈)。将将RPRRPR抗抗原原轻轻轻轻摇摇匀匀，用用标标准准针针头头吸吸取取抗抗原原，每每个个标标本本中中加加1 1滴滴抗抗原原。将将卡卡片片置置旋旋转转器器旋旋转转8min8min，(1005)(1005)转转/min/min。立即在明亮光线下观察结果。立即在明亮光线下观察结果。结结果果判判定定：阳阳性性：圆圆圈圈内内出出现现小小至至大大的的黑黑色色絮絮状状物物为为阳阳性性，不不分分其其阳阳性性的的程程度度。必必 要要 时时 可可 以以 依依 絮絮 状状 物物 的的
23、大大 小小 和和 多多 少少，用用“+”“+”号号 表表 示示。阴性：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散为阴性。阴性：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一点或均匀分散为阴性。(2)(2)RPRRPR定定量量试试验验在在纸纸卡卡圆圆圈圈内内加加入入5050l l等等渗渗盐盐水水(一一般般做做6 6个个滴滴度度，超超过过者者应应继继续续稀稀释释)。吸吸5050l l血血清清或或血血浆浆系系列列稀稀释释(1:2(1:21:64)1:64)，最最后后所所稀稀释释的的圆圆圈圈内内应应弃弃去去5050l l。滴滴加加1 1滴滴抗抗原原混混匀匀，旋旋转转时时间间、速速度度、观观察察结结果果同同定定性性试试验验。记
24、录出现记录出现1+1+阳性反应的最高血清稀释倍数，即抗体效价。阳性反应的最高血清稀释倍数，即抗体效价。4.4.甲苯胺红不加热血清试验（甲苯胺红不加热血清试验（TRUSTTRUST）【原原理理】TRUSTTRUST试试验验原原理理与与RPRRPR试试验验原原理理相相同同，差差别别在在于于TRUSTTRUST抗抗原原中中加加入入甲甲苯苯胺胺红红染染料料颗颗粒粒代代替替碳碳颗颗粒粒作作为为指指示示物物，使使阳阳性性结结果果出出现现红红色色絮絮状状凝集现象，阴性结果甲苯胺红颗粒聚集于中央一点或均匀分散。凝集现象，阴性结果甲苯胺红颗粒聚集于中央一点或均匀分散。【方方法法】TRUSTTRUST试试验验方方
25、法法同同RPRRPR试试验验。【结结果果】TRUSTTRUST试验结果判断同试验结果判断同RPRRPR试验。试验。【注注意意事事项项】1 1实实验验环环境境适适宜宜温温度度为为23232929；抗抗原原应应保保存存在在44冰冰箱箱；应应防防止止冻冻结结，以以免免破破坏坏；实实验验前前抗抗原原恢恢复复到到室室温温。2 2校校准准针针头头，RPRRPR、TRUSTTRUST等等抗抗原原(用用9 9号号针针头头)为为601601滴滴/ml/ml，USRUSR抗抗原原(用用1212号号针针头头)为为451451滴滴/m1/m1。一一 般般 试试 剂剂 盒盒 内内 已已 有有 配配 套套 专专 用用 针
26、针 头头。3 3 用用 旋旋 转转 式式 摇摇 床床，不不 用用 平平 衡衡 式式 振振 荡荡 仪仪。4 4 试试 验验 完完 毕毕，立立 即即 观观 察察 结结 果果。5 5为为防防假假阴阴性性，试试验验最最好好用用纯纯血血清清。6 6初初筛筛试试验验阳阳性性特特别别是是初初诊诊患患者者，应应做做确确证证试试验验以以排排除除生生物物学学假假阳阳性性。7 7避避免免出出现现“前前带带”现现象象，对对可可疑疑者者应应将将血血清清稀稀释释后后测测定定。8 8定定性性试试验验阳阳性性都都必必须须做做定定量量试试验验，阳阳性性者者需需了了解解抗抗体体效效价价的的高高低低，以便监视疾病活动情况和观察疗效
27、。定量试验还可排除以便监视疾病活动情况和观察疗效。定量试验还可排除 前带现象前带现象。四种初试验筛方法的比较VDRLVDRLUSRUSRRPRRPRTRUSTTRUST抗原成分抗原成分心心磷磷脂脂、卵卵磷磷脂、脂、胆固醇胆固醇同同 前前+EDTA+EDTA+氯氯化胆碱化胆碱同同 前前+EDTA+EDTA+氯氯化胆碱化胆碱+活性炭活性炭同同前前+EDTA+EDTA+氯氯化化胆碱胆碱+甲苯胺红甲苯胺红抗原稳定性抗原稳定性不稳定不稳定,1,1天天稳定稳定4 4 8 8 保存保存1212个月个月稳定稳定4 4 8 8 保存保存1212个月个月稳定稳定4 4 8 8 保存保存1212个月个月血清试验前处
28、理血清试验前处理需灭活需灭活不需灭活不需灭活不需灭活不需灭活不需灭活不需灭活反应板及结果反应板及结果判断判断玻玻片片，肉肉眼眼或或显微镜显微镜玻玻片片，肉肉眼眼或或显微镜显微镜纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼纸卡片，肉眼注释注释唯唯一一用用于于检检查查脑脑脊脊液液的的试试验验，诊诊断神经梅毒断神经梅毒结果容易判断结果容易判断结果容易判断结果容易判断一期敏感性一期敏感性（未经治疗）（未经治疗）74%-87%74%-87%77%-88%77%-88%77%-99%77%-99%77%-99%77%-99%二期敏感性二期敏感性（未经治疗）（未经治疗）100%100%100%100%100%100
29、%100%100%晚期晚期敏感性敏感性（未经治疗）（未经治疗）98%98%99%99%98%98%99%99%四种初筛方法四种初筛方法 原理：相同原理：相同 目的：相同目的：相同 临床意义：相同临床意义：相同 不同：方法学上改良不同：方法学上改良四种初筛方法四种初筛方法原理：原理：当当人人体体感感染染梅梅毒毒螺螺旋旋体体4 4周周1010周周左左右右后后，血血清清中中可可产产生生一一定定数数量量的的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体(主要是主要是IgMIgM和和IgG)IgG)目的：目的：检测检测 抗抗-脂质抗体脂质抗体四种初筛方法四种初筛方法方法：方法：定性法定
30、性法-意义局限意义局限定量定量抗体的效价抗体的效价滴度滴度（倍比稀释）（倍比稀释）通过看化验单可判别定量或定性通过看化验单可判别定量或定性阳性阳性原倍、原倍、1 1：2/12/1：4/14/1：8/1:648/1:64梅毒初筛试验定性定量梅毒初筛试验定性定量 阴阴性性 原原倍倍 1 1：2 12 1：4 41 1：8 81 1：16161 1：32321 1：6464-+梅毒血清学初筛实验临床意义梅毒血清学初筛实验临床意义1.1.辅助诊断梅毒辅助诊断梅毒 初筛实验有较高的敏感性和特异性初筛实验有较高的敏感性和特异性2.2.观察滴度变化可用于疗效观察观察滴度变化可用于疗效观察3.3.鉴别早期或晚
31、期梅毒鉴别早期或晚期梅毒（前滴度（前滴度快后慢快后慢）4.4.鉴别先天性梅毒鉴别先天性梅毒（被动出生（被动出生3-43-4月转阴，不降反升）月转阴，不降反升）5.5.发发现现复复发发或或再再感感染染病病人人复复发发或或再再感感染染时时 血血清清阳阳转转或或滴滴度度上上升升，定定量量试试验验2 2次次结结果果，滴滴度度上上升升2 2个个稀稀释释度度以以上上（1:21:21:81:8以以上上 ）才才可可判判断断为为上上升升，要要排排除除技技术术性性因因素素，相相同同的的实实验验方方法才能进行滴度比较法才能进行滴度比较6.6.梅毒的筛查试验梅毒的筛查试验注意事项注意事项假阳性假阳性 ：1 1生理性生
32、理性 孕妇孕妇0.4%0.4%2 2胶原性或自身免疫性病胶原性或自身免疫性病 麻风、系统红斑狼疮麻风、系统红斑狼疮3 3某些急性发热病某些急性发热病 后后 风疹、疟疾、水痘、肺炎风疹、疟疾、水痘、肺炎4 4免疫接种免疫接种鉴别方法：鉴别方法：抗体效价抗体效价 特异性试验证实特异性试验证实 特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验目的目的:检测特异性抗梅毒螺旋体抗体检测特异性抗梅毒螺旋体抗体-特异性强特异性强原理：原理：(FTA-ABS)(FTA-ABS)完整的梅毒螺旋体作抗原完整的梅毒螺旋体作抗原TPHA/TPPATPHA/TPPA 超超声声裂裂解解梅梅毒毒螺螺旋旋体体提提
33、取取抗抗原原族族致致敏敏载载体体致敏的载体致敏的载体抗梅毒抗体抗梅毒抗体/免疫血清免疫血清适宜条件适宜条件下下肉眼可见凝集肉眼可见凝集特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验方法：方法：1.1.梅毒螺旋体血球凝集试验（梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHATPHA）2.2.梅毒螺旋体明胶凝集试验（梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPATPPA）快速、简便、准确而青睐快速、简便、准确而青睐3.3.荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)(FTA-ABS)WHO WHO推荐金标准推荐金标准特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验4.4.梅毒
34、螺旋体抗体酶联免疫吸附试验梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验 TP-ELISA TP-ELISA：TP-AbTP-Ab是是一一种种通通过过基基因因工工程程经经利利用用梅梅毒毒螺螺旋旋体体多多肽肽抗抗原原（KD47KD47、KD42/KD15KD42/KD15）包包被被于于反反应应板板的的试试验验。它它用用双双抗抗原原夹夹心心法法，同同时时检检测测IgM/IgGIgM/IgG抗抗体体，故故可可用用于于早早期期诊诊断断，并并避避免免了了单单片片段段抗抗原原混混合合干干扰扰 5.PCR5.PCR方法（略）方法（略）用于诊断梅毒试验方法选择用于诊断梅毒试验方法选择要求要求准确率（特异性）准确率（特异性）T
35、PHATPHA在在各各期期梅梅毒毒的的特特异异性性为为98%98%99%99%，敏敏感感性性 治治疗疗前前一一期期：69%69%90%90%；二二期期100%100%；潜潜伏期伏期97%97%100%100%；晚期；晚期94%94%1.1.梅梅 毒毒 螺螺 旋旋 体体 血血 球球 凝凝 集集 试试 验验（TPHATPHA）2.2.梅梅 毒毒 螺螺 旋旋 体体 明明 胶胶 凝凝 集集 试试 验验（TPPATPPA）敏感性强，特异度高，现为梅毒诊断的金标准敏感性强，特异度高，现为梅毒诊断的金标准 梅毒特异性试验的临床意义梅毒特异性试验的临床意义1.1.诊断梅毒诊断梅毒 敏感性高、特异性强，是梅毒较
36、好的确证实验敏感性高、特异性强，是梅毒较好的确证实验2.2.早期诊断梅毒（早期诊断梅毒（19S 19S IgMIgM ）一一期期梅梅毒毒特特异异性性试试验验比比非非特特异异性性试试验验早早一一周周出出现现，梅梅毒毒感感染染后后第第二二周周就就可可从从血血清清中中测测出出抗抗体体IgMIgM，而而IgGIgG要要在在感感染染后后4 4周方可测出周方可测出梅毒特异性试验的注意事项梅毒特异性试验的注意事项1.1.定性试验定性试验 一般定性试验阳性即可确诊，定性抗体效价一般定性试验阳性即可确诊，定性抗体效价1 1：80802.2.不能作疗效观察指标不能作疗效观察指标 由于记忆细胞抗体复制能力强，特异性
37、敏感性高，即使经由于记忆细胞抗体复制能力强，特异性敏感性高，即使经 抗梅治疗也终生阳性（阳性现症或既往）抗梅治疗也终生阳性（阳性现症或既往）3.1%3.1%生物学假阳性存在生物学假阳性存在 麻风、传单（嗜异性抗体）麻风、传单（嗜异性抗体）TPPATPPA假阳性，红斑狼疮假阳性，红斑狼疮 FA-ABS FA-ABS呈假阳性呈假阳性不主张叫确证试验不主张叫确证试验梅毒血清学试验选择梅毒血清学试验选择一、用于筛查：一、用于筛查：首选首选-TP-ELISA-TP-ELISA其次其次-初筛试验初筛试验二、由于诊断梅毒（首次）：必须二、由于诊断梅毒（首次）：必须1.1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋
38、体抗原血清学试验/梅毒初筛试验梅毒初筛试验 有效价有效价2.2.梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验/TPPA/TPHA/TPPA/TPHA梅毒血清学试验选择梅毒血清学试验选择三、用于疗效观察、治疗后随访：三、用于疗效观察、治疗后随访：非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验/梅毒初筛试验梅毒初筛试验 有效价有效价一张完善的检验单报告部分：一张完善的检验单报告部分：结果：结果：梅梅毒毒血血清清学学初初筛筛试试验验TRUST TRUST 1:161:16阳阳性性（梅毒螺旋体抗原血清学试验）（梅毒螺旋体抗原血清学试验）TPPA TPPA 阳性阳性 签签名名 XXX XXX
39、日期日期XXXXXXXXXX 其他实验其他实验免疫印迹法：免疫印迹法：是一种诊断梅毒感染的特异性实验，是一种诊断梅毒感染的特异性实验，胶体金免疫结合技术（胶体金免疫结合技术（TPTPAbAb）：）：是是在在酶酶免免结结合合技技术术基基础础上上发发展展起起来来的的,具具有有简简单单、快快速速、不不需需任任何何仪仪器的特点。器的特点。PCRPCR试验：试验：多聚酶链反应检测梅毒螺旋体多聚酶链反应检测梅毒螺旋体DNA DNA 三、淋病三、淋病(gonorrhea)(gonorrhea)的实验室诊断的实验室诊断淋病：是我国目前检测八种主要性病中发病人数最淋病：是我国目前检测八种主要性病中发病人数最 多
40、的一种多的一种病因：淋病奈瑟菌病因：淋病奈瑟菌亲和性：人类是唯一宿主，嗜人类泌尿生殖道的柱亲和性：人类是唯一宿主，嗜人类泌尿生殖道的柱 状上皮细胞状上皮细胞特点：局部化脓性感染特点：局部化脓性感染 细菌和毒素细菌和毒素粘膜坏死、脱落、神粘膜坏死、脱落、神 经末梢暴露、炎性浸润、组织液渗出经末梢暴露、炎性浸润、组织液渗出所致疾病所致疾病 主要是泌尿生殖道局部化脓性感染主要是泌尿生殖道局部化脓性感染-淋病淋病 不及时治疗可入侵泌尿生殖道其他部位不及时治疗可入侵泌尿生殖道其他部位附睾、附睾、前列腺炎、前列腺炎、输卵管炎及盆腔炎输卵管炎及盆腔炎 甚至经血液传播全身其他部位淋菌性关节炎、心甚至经血液传播
41、全身其他部位淋菌性关节炎、心内膜炎及脑膜炎等内膜炎及脑膜炎等淋菌性尿道炎淋菌性尿道炎诊断淋病的实验室检查诊断淋病的实验室检查男性患者：男性患者：急性期典型病例急性期典型病例-尿频、尿急、尿痛，局部流脓尿频、尿急、尿痛，局部流脓首选：首选：试验方法试验方法-分泌物涂片革兰染色分泌物涂片革兰染色 试验目的试验目的-找革兰阴性双球菌找革兰阴性双球菌女性女性可拒绝用此法可拒绝用此法分泌物涂片革兰染色分泌物涂片革兰染色原理：原理：1 1急性患者尿道有大量脓性分泌物急性患者尿道有大量脓性分泌物 2 2淋球菌呈革兰阴性反应，具特殊形态淋球菌呈革兰阴性反应，具特殊形态 3 3有些脓细胞内可有许多淋球菌有些脓细
42、胞内可有许多淋球菌临床意义：临床意义：1.1.镜检结果阳性可初步诊断淋病镜检结果阳性可初步诊断淋病2.2.用于新生儿、婴儿脓漏眼诊断用于新生儿、婴儿脓漏眼诊断 镜检白细胞中吞噬有阴性双球菌者为阳性新生儿淋菌性结膜炎新生儿淋菌性结膜炎 常常常常在在出出生生2 23 3天天后后双双眼眼出出现现脓脓性性分分泌泌物物，剧剧烈烈肿肿胀胀发发红红，不不能能睁睁眼眼，如如不不及及时时治治疗疗还还可可侵侵犯犯到到角角膜膜，如如角角膜膜发发生生穿穿孔孔会会导导致致失失明明 诊断淋病的实验室检查诊断淋病的实验室检查女性患者及症状不典型的男性患者：女性患者及症状不典型的男性患者：经典方法：经典方法：淋球菌分离培养淋
43、球菌分离培养原理：原理：1 1标本中有淋球菌标本中有淋球菌 2 2合适的培养基（合适的培养基（T-MT-M选择性培养基）选择性培养基）3 3生长呈特征性菌落（生长呈特征性菌落（24H24H36H36H）4 4菌苔氧化酶呈阳性，糖发酵试验符合菌苔氧化酶呈阳性，糖发酵试验符合 5 5菌苔涂片革兰染色呈阴性，菌体形态菌苔涂片革兰染色呈阴性，菌体形态 具特殊性具特殊性淋球菌培养淋球菌培养临床意义临床意义1.1.诊断淋病（金标准）诊断淋病（金标准）2.2.适适用用于于男男性性女女性性标标本本，WHOWHO推推荐荐的的筛筛查查淋淋病病的的唯唯一一方法方法3.3.判断病人治愈判断病人治愈依据只可选择依据只可
44、选择此方法此方法4.4.-内酰胺酶内酰胺酶阳性：表明该菌阳性：表明该菌对对PG PG，氨苄西，氨苄西林和阿莫西林林和阿莫西林耐药耐药 淋病病人实验室诊断步骤淋病病人实验室诊断步骤淋菌感染淋菌感染 男性患者男性患者 女性患者女性患者尿频、尿急、尿道分泌物尿频、尿急、尿道分泌物 脓性宫颈分泌物脓性宫颈分泌物/无症状无症状 脓性分泌物涂片脓性分泌物涂片G G-染色染色 拒绝做拒绝做 G G-双球菌细胞内双球菌细胞内 取宫颈分泌物取宫颈分泌物 初步诊断初步诊断 MTM MTM培养基培养培养基培养 治疗治疗 典型菌落形态典型菌落形态 G G-双球菌、双球菌、OX(+)OX(+)、糖发酵试验、糖发酵试验
45、确诊确诊关于取材关于取材正确采集标本是试验结果成功的关键环节正确采集标本是试验结果成功的关键环节涂片取材：涂片取材：清洁尿道口清洁尿道口 手指由后向前挤出脓液手指由后向前挤出脓液 轻轻涂布玻片上轻轻涂布玻片上 排尿前或排尿后排尿前或排尿后2 23 3小时采集小时采集培养标本采集培养标本采集关键是深度一定要够关键是深度一定要够男性取材：拭子深入尿道男性取材：拭子深入尿道2cm-4cm2cm-4cm处并转动处并转动 蘸取少量粘膜蘸取少量粘膜女女性性取取材材：子子插插入入宫宫颈颈1 12 2厘厘米米处处稍稍转转动动并并停停留留1010秒秒3030秒秒，以以获获得得上上皮皮细胞，取出棉拭子时细胞，取出
46、棉拭子时不要碰到阴道壁避免受阴道分泌物污染不要碰到阴道壁避免受阴道分泌物污染其他相关试验其他相关试验1.1.直接免疫银光染色直接免疫银光染色2.SPA2.SPA协同实验协同实验3.3.酶反应酶反应4.4.白细胞脂酶快速法白细胞脂酶快速法5.5.固相酶免疫试验固相酶免疫试验小结小结诊断淋病诊断淋病1 1泌尿生殖道泌尿生殖道分泌物涂片革兰染色分泌物涂片革兰染色找阴性双球菌找阴性双球菌2 2泌尿生殖道分泌物泌尿生殖道分泌物淋球菌分离培养淋球菌分离培养3 3其他方法不能作为常规诊断应用其他方法不能作为常规诊断应用注意标本采集注意标本采集四、非淋菌性尿道炎四、非淋菌性尿道炎-NGU-NGU临床：尿道炎表
47、现，分泌物查不到淋球菌临床：尿道炎表现，分泌物查不到淋球菌临床合并症：临床合并症：附睾炎、输卵管炎、宫外孕、不孕症等附睾炎、输卵管炎、宫外孕、不孕症等 威胁人们健康威胁人们健康流行病学：流行病学：西方国家自西方国家自6060年代发病年代发病超过淋病跃超过淋病跃 居居STDSTD首位，国内发病不断增加已占首位，国内发病不断增加已占STDSTD的的 第三位第三位非淋菌性尿道炎非淋菌性尿道炎-NGU-NGU病因：病因：沙眼衣原体沙眼衣原体CTCT（D DK K）40%40%50%50%支原体支原体（UUUU、MHMH）20%20%30%30%阴道滴虫、白念和单疱病毒阴道滴虫、白念和单疱病毒10%10
48、%20%20%NGU-CTNGU-CT检测检测生活史特性：严格细胞内寄生生活史特性：严格细胞内寄生亲和性：亲和性：泌尿生殖道柱状上皮细胞泌尿生殖道柱状上皮细胞血清学试验对诊断衣原体感染价值有限血清学试验对诊断衣原体感染价值有限1.1.迄今止尚无哪一种试验完全适合所有种类的迄今止尚无哪一种试验完全适合所有种类的CTCT的检测的检测2.CT2.CT感染轻微，潜伏期长，影响急性期采血时间配对血清难感染轻微，潜伏期长，影响急性期采血时间配对血清难 以得到以得到3.3.血血清清抗抗体体持持续续时时间间长长，单单一一血血清清标标本本只只能能显显示示曾曾经经感感以以前前染过染过CTCT4.4.双份血清效价比
49、有双份血清效价比有4 4倍增高才有临床意义倍增高才有临床意义 临床标本直接检查临床标本直接检查-目前最合适的方法目前最合适的方法NGU-CTNGU-CT检测方法检测方法1.1.细细胞胞涂涂片片的的吉吉姆姆萨萨染染色色-发发现现一一定定数数量量的的包包涵涵体体（原原体体呈呈紫紫色色，包包涵体呈金黄色涵体呈金黄色）不适用于不适用于NGUNGUNGU-CTNGU-CT检测方法检测方法2.2.涂片碘染色法：涂片碘染色法：包涵体中有糖原遇碘呈棕色敏感性包涵体中有糖原遇碘呈棕色敏感性 差，不适用于差，不适用于NGUNGU3.3.直接免疫荧光法染色：直接免疫荧光法染色：敏感性敏感性93%93%，特异性，特异
50、性9696与与 培培养养并并列列为为金金标标准准对对试试剂剂，显显微微镜镜质质量量要要求求很高，很高，操作人员技术要求高，价格昂贵操作人员技术要求高，价格昂贵4.4.衣原体酶免疫测定衣原体酶免疫测定EIAEIA：抗：抗CTCT单抗包被固相载体单抗包被固相载体+标标本本再再+多多克克隆隆抗抗体体+IgG+IgG酶酶标标抗抗体体酶酶标标仪仪检测检测 适用于批量筛查适用于批量筛查NGUNGU衣原体感染衣原体感染5.5.衣原体分离培养：衣原体分离培养：McCoyMcCoy、HelaHela、BHK-21 BHK-21细胞培养细胞培养NGU-CTNGU-CT检测方法检测方法6.PCR6.PCR7.“7.