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1、无菌检查法概念无菌检查法概念指用于检查药典要求无菌的药品、医疗指用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现被微明了供试品在该检验条件下未发现被微生物污染。生物污染。厚隘冯逊康炭幌败糜梨翠棒怯挛骂课拜苟烷缠少萎共窥霖今虎照噎戚铰现无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证无菌检查法概念无菌检查法概念无菌检查是通过目检微生物在培养基中无菌检查是通过目检微生物在培养基中的生长来判断结果。的生长来判断结果。无菌检验只能给出该批产品
2、受污染的程无菌检验只能给出该批产品受污染的程度。度。无菌检验合格只能说明被测样品无菌，无菌检验合格只能说明被测样品无菌，不能证明整批样品无菌。不能证明整批样品无菌。讯晦宏渝峦囱烛善敌彬靡浮锑沮干呛胁唬渔诉粟快匀驱冒蔑荐尘凹重篮扭无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证无菌检查的设施、环境、人员无菌检查的设施、环境、人员检查环境应在洁净度检查环境应在洁净度1000010000级下的局部洁级下的局部洁净度净度100100级的单项流空气区域内或级的单项流空气区域内或隔离系隔离系统统中进行，其全过程必须严格遵守无菌中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作。操作。隔离系统按相关的要求进行验证，其内隔离系统按相关
3、的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。语剃欺钠心厄登椿撑丹砧嘱除字溪荷沉鸳添莉瑟谤投囤粪模迪喘与俗洒蠕无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证无菌检查的设施、环境、人员无菌检查的设施、环境、人员规定应定期按医药工业洁净室（区）规定应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度的验证。的现行国家标准进行洁净度的验证。日常检验还需对试验环境进行监控。日常检验还需对试验环境进行监控。存想氓乒止匡廷否心阔欠蛔龟辐碉瑰眉瑶履串锤掺椿狂阮畏南刁鲁沏役淡无菌检查法及其验证无菌检查法及其
4、验证无菌检查的设施、环境、人员无菌检查的设施、环境、人员无菌检查人员必须具备微生物专业知识，无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。并经过无菌技术的培训。稗剿凡郎汉卓菲铭揽冀病过耳鸥腥晃戴铀狰噬览椎渺帅疼家硷猖谅环石瑞无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证 无菌隔离系统无菌隔离系统无菌隔离系统是一个不受外界环境影响的、可进行无菌操作的独无菌隔离系统是一个不受外界环境影响的、可进行无菌操作的独立环境系统。立环境系统。使用隔离系统的优点：它能创造一个持续高效的高度无菌空间使用隔离系统的优点：它能创造一个持续高效的高度无菌空间,保保护产品免受外源性污染，包括操作人员、操作环境及外包装
5、等的护产品免受外源性污染，包括操作人员、操作环境及外包装等的污染，确保操作环境及实验物品表面能达到无菌要求，防止出现污染，确保操作环境及实验物品表面能达到无菌要求，防止出现假阳性结果假阳性结果,保证保证无菌实验结果的可靠性，从而实现一次检出的要无菌实验结果的可靠性，从而实现一次检出的要求；保护操作人员免受实验过程中的有害物质带来的污染；放置求；保护操作人员免受实验过程中的有害物质带来的污染；放置隔离器的环境洁净度不需要特殊要求，移动方便等优点隔离器的环境洁净度不需要特殊要求，移动方便等优点。吏骨帝谣弗壮键捏牡瘴颧禄现兹欢桌联葱受霄穴光校卑淑踪涸伊历烧壬妄无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证HT
6、Y无菌隔离系统无菌隔离系统孜腹模巴属渝炳寐禾懦寸坊殷白扇魏汰过巧赔阮胰掷质淫撞壬投靳寇吧曳无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证无菌检查用培养基的种类及用途无菌检查用培养基的种类及用途硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基-培养好氧菌、培养好氧菌、厌氧菌厌氧菌改良马丁培养基改良马丁培养基-培养真菌及好氧细菌培养真菌及好氧细菌 选择性培养基选择性培养基-按硫乙醇酸盐流体培养按硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在基或改良马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适量的中和剂培养基灭菌或使用前加入适量的中和剂或表面活性剂。或表面活性剂。蹿棒托项燥羌予揭宰提磷杉愧受宾吮舟剂绩嗣动
7、浑咽街闰腿桶杏皱缅旬稀无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证培养基的制备及装量培养基的制备及装量培养基可按处方制备，亦可使用按该处方生产培养基可按处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。的符合规定的脱水培养基。硫乙醇酸盐流体培养基的装量与容器高度的比硫乙醇酸盐流体培养基的装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度不超过培养基深度1/21/2。供试品接种前，培养。供试品接种前，培养基氧化层颜色不得超过培养基深度的基氧化层颜色不得超过培养基深度的1/51/5，否，否则，须经则，须经100100水浴加热至粉红色消失（
8、不超水浴加热至粉红色消失（不超过过2020分钟），迅速冷却，只限加热一次。分钟），迅速冷却，只限加热一次。登脊慢革永幕捡咙施鞍泛领虚抠躯泞竞缮川篡属牌梢公谎茬篡序盅菱融棍无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证培养基的储存培养基的储存制备好的培养基应该保存在制备好的培养基应该保存在2-252-25、避光的、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在环境，若保存于非密闭容器中，一般在3 3周周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在内使用；若保存于密闭容器中，一般可在1 1年内使用。年内使用。应结合实际情况进行验证，以确定培养基应结合实际情况进行验证，以确定培养基有效期。有效期。行裕浮炎啄募庭都藕绩躁隅玛
9、纶汕唉哨黔瘸院释五匆戴井读话阿券迫欧肇无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证培养基的适用性检查培养基的适用性检查 本检查可在供试品的无菌检查前或与供本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。试品的无菌检查同时进行。无菌性检查无菌性检查 重要性：培养基无菌不合格将导致实验重要性：培养基无菌不合格将导致实验的假阳性结果。的假阳性结果。检查：每批培养基随机抽取不少于检查：每批培养基随机抽取不少于5 5支或支或5 5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30-3530-35培养，改良马丁培养基置培养，改良马丁培养基置23-2823-28培养，培养，培养培养1414天，应无菌
10、生长。天，应无菌生长。克森拢死茎廊卑声试盒惯挝亲奶晌腿虐竭誉吕骂锥唾咨能牺浊戒睡朋牡腆无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证培养基的适用性检查培养基的适用性检查灵敏度检查灵敏度检查菌种菌种硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 生孢梭菌生孢梭菌 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 改良马丁培养基改良马丁培养基 白色念珠菌白色念珠菌 黑曲霉黑曲霉件域腰侧橱比搜妄铅政体联雄揍磷逊椽砧太捎签鸳亏卑勒皇讳蹲脐贝卓瓜无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证培养基的适用性检查培养基的适用性检查菌种选择的原则菌种选择的原则代表性、普遍性、易存活、低或非致病性、标准菌
11、株代表性、普遍性、易存活、低或非致病性、标准菌株(或该药品中常见的污染菌或该药品中常见的污染菌)。金黄色葡萄球菌（代表革兰氏阳性菌）、铜绿色假单金黄色葡萄球菌（代表革兰氏阳性菌）、铜绿色假单胞菌（代表革兰氏阴性菌）、枯草芽孢杆菌（代表药胞菌（代表革兰氏阴性菌）、枯草芽孢杆菌（代表药品中最常见或最易污染的菌）、生孢梭菌（代表厌氧品中最常见或最易污染的菌）、生孢梭菌（代表厌氧菌）、白色念珠菌（代表酵母菌）、黑曲霉（代表霉菌）、白色念珠菌（代表酵母菌）、黑曲霉（代表霉菌）。菌）。菌种的要求：不得超过菌种的要求：不得超过5 5代。采用适宜的菌种保藏方法代。采用适宜的菌种保藏方法保存，以保证菌种的生物学
12、特性。保存，以保证菌种的生物学特性。加菌量加菌量:100cfu100cfu。踌钾驱何疗儡忻迢琼俭慌制樟根踩欧胰自仁巧混绑灰尾箔缺绷糕吟史侠愧无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证培养基的适用性检查培养基的适用性检查菌液制备菌液制备 试验菌试验菌 培养基培养基 培养温度培养温度 培养时间培养时间 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 营养肉汤营养肉汤 30-35 18-24铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 生孢梭菌生孢梭菌 硫乙醇酸盐流体硫乙醇酸盐流体白色念珠球菌白色念珠球菌 改良马丁培养基改良马丁培养基 23-28 24-48黑曲霉黑曲霉 改良马丁琼脂斜面改良马丁琼脂斜面 5-7天天也掀
13、凯集贵俏卡慈洽银厦感讣歪侠甥魁鲍兔续烟寨武缄蟹书挛肝坠珐累决无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证培养基的适用性检查培养基的适用性检查培养基接种培养基接种 试验菌试验菌 培养基培养基 每管装量每管装量 接种管数接种管数 接种量接种量 培养时间培养时间金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 硫乙醇酸盐硫乙醇酸盐 12 ml 2 支支 1 ml 3天天铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌生孢梭菌 白色念珠球菌白色念珠球菌 改良马丁培养基改良马丁培养基 9 ml 2支支 1 ml 5天天黑曲霉黑曲霉 其中硫乙醇酸盐及改良马丁培养基均有其中硫乙醇酸盐及改良马丁培养基均有 1支不接种作为空白支
14、不接种作为空白接种量接种量 100cfu（不能多）（不能多）管撑饼舜幅忱隶拖助以鼠闽卧堤峰糯矗原渗皖扑蒲眶摈赔此晚沽挡上汛蓖无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证培养基的适用性检查培养基的适用性检查结果判断结果判断 空白对照应无菌生长，若加菌的培空白对照应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。灵敏度检查符合规定。试验同时应做空白对照试验同时应做空白对照草洗尧跪溃捎验妈棚卧沽丑硅炽胺磺椒炔癸晦默父涌霓抿半食湾砌肢找也无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证培养基说明培养基说明无菌检验培养基所能支持生长的微生物无菌检验培养基所能支持生长的微生
15、物是有限的。是有限的。微生物种类繁多，这些微生物有广泛的微生物种类繁多，这些微生物有广泛的生长要求，如：营养、温度和氧等。生长要求，如：营养、温度和氧等。无菌检验培养基不可能支持所有微生物无菌检验培养基不可能支持所有微生物的生长，选择了支持那些最有可能污染的生长，选择了支持那些最有可能污染药品和在药品中生长的微生物的营养的药品和在药品中生长的微生物的营养的培养基。培养基。透纲祷拟努鲍殿昨荷腑赶铜悯壤冶烃海霓歹拇究褂盾擎咋严煎址莽锤时衙无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证供试品的无菌检查法供试品的无菌检查法无菌检查法包括直接接种法和薄膜过滤法。只无菌检查法包括直接接种法和薄膜过滤法。只要供试品性
16、状允许，要供试品性状允许，应优先采用薄膜过滤法。应优先采用薄膜过滤法。进行供试品无菌检查时，所采用的检查方法和进行供试品无菌检查时，所采用的检查方法和检验条件应与验证的方法相同。检验条件应与验证的方法相同。薄膜过滤法可以提高无菌检验的检出率，特别薄膜过滤法可以提高无菌检验的检出率，特别是抑菌性供试品，采用薄膜过滤法可以有效消是抑菌性供试品，采用薄膜过滤法可以有效消除供试品的抑菌性，提高检出率。除供试品的抑菌性，提高检出率。沦烂豺踌码硼势掐惑终昏克饮问聊烈蒸新绍傅懂件貌您违位巍裤耕墨摧鲸无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证供试品的无菌检查法供试品的无菌检查法-直接接种法直接接种法样品直接移入无菌
17、培养基中。样品直接移入无菌培养基中。每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品每个容器中培养基的用量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体积的体积不得大于培养基体积的10%10%。同时硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于同时硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml15ml，改良马丁培养基每管装量不少于，改良马丁培养基每管装量不少于10ml10ml。培养基的用量和高度同方法验证试验。培养基的用量和高度同方法验证试验。每种培养基接种的管数同供试品的检验数量。每种培养基接种的管数同供试品的检验数量。剑澡谴据淑蜡燎诌领饲劝硒墨夺椽葱细商洪驹双龋嵌弘嘴式助虏湖雇策耪无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证供试
18、品的无菌检查法供试品的无菌检查法-薄膜过滤法薄膜过滤法原理：薄膜过滤法是将供试品通过滤膜，微生物截留原理：薄膜过滤法是将供试品通过滤膜，微生物截留于滤膜上，若有抑菌作用的药品同时使用冲洗液冲洗于滤膜上，若有抑菌作用的药品同时使用冲洗液冲洗滤膜上残留的供试品（如有残留会抑制微生物生长），滤膜上残留的供试品（如有残留会抑制微生物生长），然后，培养滤膜看其是否有微生物生长。然后，培养滤膜看其是否有微生物生长。选择滤膜材质时应考虑供试品及其溶剂的特性，水溶选择滤膜材质时应考虑供试品及其溶剂的特性，水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品
19、，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。油类供试品，其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为张滤膜每次冲洗量为100ml100ml，且冲洗量不超过，且冲洗量不超过1000ml1000ml，以避免滤膜上的微生物受损伤。以避免滤膜上的微生物受损伤。过滤器应优先选择过滤器应优先选择封闭式封闭式薄膜过滤），薄膜过滤），也可使用一般也可使用一般薄膜过滤器。滤膜孔径不大于薄膜过滤器。滤膜孔径不大于0.45m0.45m，直径约为，直径
20、约为50mm50mm。甚境窝苦连绦佩交崖撕令棚咸坊孽茫铅库咬蔽漫茵国捎墅赦止奠狙兰棘涤无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证供试品的无菌检查法供试品的无菌检查法检验数量检验数量 指一次检验所用供试品最小包装容器的数指一次检验所用供试品最小包装容器的数量量采用薄膜过滤法应增加采用薄膜过滤法应增加1/21/2的最小检验数量作为阳性对的最小检验数量作为阳性对照；采用直接接种法应增加供试品无菌检查时每个培照；采用直接接种法应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作为阳性对照。养基容器接种的样品量作为阳性对照。检验量检验量 指一次试验所用供试品总量（指一次试验所用供试品总量（g g或或mlml），
21、若），若每支（瓶）供试品装量按规定足够接种两份培养基，每支（瓶）供试品装量按规定足够接种两份培养基，则应分别接种硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养则应分别接种硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基。采用薄膜过滤法时，检验量不应少于直接接种法基。采用薄膜过滤法时，检验量不应少于直接接种法的供试品总量，只要供试品的特性允许，应将所有容的供试品总量，只要供试品的特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤器内的全部内容物过滤.舍酝捷狸即惺轴秋修戎弘部肇铰淑独牙刚北涪硼胯玲亦宰罗米猴韶沛鸡粗无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证无菌检查的稀释液、冲洗液无菌检查的稀释液、冲洗液无菌检验所用稀释液、冲洗液种类应对
22、微生物无毒、无菌检验所用稀释液、冲洗液种类应对微生物无毒、无抑制作用。稀释液用量、冲洗液冲洗次数及用量等无抑制作用。稀释液用量、冲洗液冲洗次数及用量等应当与验证合格的方法一致。每张滤膜每次冲洗量为应当与验证合格的方法一致。每张滤膜每次冲洗量为100ml100ml，总冲洗量不宜过大（不超过，总冲洗量不宜过大（不超过1000ml1000ml），用量过），用量过多不仅容易破坏滤膜上截留的微生物，而且对滤膜造多不仅容易破坏滤膜上截留的微生物，而且对滤膜造成损伤；但也不能太少，否则不能将供试品冲洗干净，成损伤；但也不能太少，否则不能将供试品冲洗干净，无法消除抑菌性。无法消除抑菌性。0.1%0.1%蛋白胨
23、水溶液蛋白胨水溶液PH7.0PH7.0氯化钠氯化钠-蛋白胨缓冲液蛋白胨缓冲液如需要可加入表面活性剂或中和剂如需要可加入表面活性剂或中和剂,应经方法验证证明应经方法验证证明其有效性，并对细菌存活无影响。其有效性，并对细菌存活无影响。郡要伎下闸硝勾醉惑理降艘埠鼎细疟敏但蜗磊何萍支缀撤株希北纠堡舵凄无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证供试品溶液的制备供试品溶液的制备 水溶液供试品水溶液供试品 取规定量，直接过滤，或混合至含适量稀释液的取规定量，直接过滤，或混合至含适量稀释液的无菌容器内，混匀，立即过滤。无菌容器内，混匀，立即过滤。如供试品具有抑菌作用或含防腐剂，须用适量的如供试品具有抑菌作用或含防腐
24、剂，须用适量的冲洗液冲洗滤膜，冲洗次数不得少于三次。冲洗液冲洗滤膜，冲洗次数不得少于三次。冲洗后，如用封闭式薄膜过滤器，分别将冲洗后，如用封闭式薄膜过滤器，分别将100ml100ml硫硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应的滤筒内。的滤筒内。如果采用一般薄膜过滤器，取出滤膜，将其剪成如果采用一般薄膜过滤器，取出滤膜，将其剪成3 3等份，分别置于含等份，分别置于含50ml50ml硫乙醇酸盐流体培养基及硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基容器中，其中一份做阳性对照用。改良马丁培养基容器中，其中一份做阳性对照用。蔽芹陇限沦叭兰痈洼哩恍压材账赏涛挽帖扯隔
25、享铬起览碳总丧辉煽譬戳褒无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证 可溶于水的固体制剂供试品可溶于水的固体制剂供试品 取规定量，加适宜的稀释液溶解或按标签说明复取规定量，加适宜的稀释液溶解或按标签说明复溶，然后照水溶液供试品项下的方法操作。溶，然后照水溶液供试品项下的方法操作。-内酰胺类抗生素供试品内酰胺类抗生素供试品 取规定量，按水溶液或固体制剂供试品的处理法取规定量，按水溶液或固体制剂供试品的处理法处理，过滤，用适宜的冲洗液冲洗滤膜。再用含处理，过滤，用适宜的冲洗液冲洗滤膜。再用含适量适量-内酰胺酶的冲洗液清除残留在滤筒、滤膜内酰胺酶的冲洗液清除残留在滤筒、滤膜上的抗生素后接种培养基，必要时培养
26、基中可加上的抗生素后接种培养基，必要时培养基中可加少量的少量的-内酰胺酶；或将滤膜直接接入含适量内酰胺酶；或将滤膜直接接入含适量-内酰胺酶的培养基中。接种培养基的方法照水内酰胺酶的培养基中。接种培养基的方法照水溶液供试品项下的方法操作。溶液供试品项下的方法操作。供试品溶液的制备供试品溶液的制备佑粟趋笛猎煌基说重土盲亦陌奸爽问隙埃俄坞低供雾广煽狄揉鸟刷城饶丫无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证 非水溶性制剂供试品非水溶性制剂供试品 取规定量，直接过滤或混合溶于含聚山梨酯取规定量，直接过滤或混合溶于含聚山梨酯8080或或其它适宜乳化剂的稀释液中，充分混合，立即过其它适宜乳化剂的稀释液中，充分混合，
27、立即过滤。用含滤。用含0.1%-1%0.1%-1%聚山梨酯聚山梨酯8080的冲洗液冲洗滤膜至的冲洗液冲洗滤膜至少少3 3次。滤膜于含或不含聚山梨酯次。滤膜于含或不含聚山梨酯8080的培养基中培的培养基中培养。培养基接种照水溶液供试品项下的方法操作。养。培养基接种照水溶液供试品项下的方法操作。其他类供试品：其他类供试品：可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和粘性油剂供试可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和粘性油剂供试品品 无菌气（喷）雾剂供试品无菌气（喷）雾剂供试品 装有药物的注射器供试品装有药物的注射器供试品 具有导管的医疗器具具有导管的医疗器具(输血、输液袋等输血、输液袋等)供试品供试品 供试品溶液的制备供试
28、品溶液的制备勿帅者帛漾羹需糟再盗追熏坍江搪疯慎荐当嘻狐宿滦谗衬谩刮佳霸诫鉴镣无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证阳性对照试验阳性对照试验目的：目的：验证供试品经灭活后或用其它方式（稀验证供试品经灭活后或用其它方式（稀释、冲洗等）处理后是否仍有抑菌或杀菌的作用，释、冲洗等）处理后是否仍有抑菌或杀菌的作用，确保检验条件符合要求，防止出现假阴性。确保检验条件符合要求，防止出现假阴性。培培养条件是否符合要求。养条件是否符合要求。应根据供试品的特性选择阳性对照菌。应根据供试品的特性选择阳性对照菌。无抑菌及抗革兰阳性无抑菌及抗革兰阳性-金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 抗革兰阴性抗革兰阴性-大肠埃希菌大肠埃希
29、菌 抗厌氧菌抗厌氧菌-生孢梭菌生孢梭菌 抗真菌抗真菌-白色念珠菌白色念珠菌阳性对照菌加量：阳性对照菌加量：100cfu100cfu阳性对照培养阳性对照培养48-72h 48-72h 应生长良好。应生长良好。嗡爵痢奇巡尝撇实橙绷野暖庆载妖煽哦英蛋茅墟伐拷猪蝇琐萤荣猿卉滁责无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证阴性对照阴性对照不加样品的无菌检验不加样品的无菌检验目的：确认无菌检验所用的稀释液、冲洗液、培目的：确认无菌检验所用的稀释液、冲洗液、培养基、青霉素酶、集菌器等物品及人员操作、检养基、青霉素酶、集菌器等物品及人员操作、检验环境、仪器设备等是否有菌存在。验环境、仪器设备等是否有菌存在。应取相应溶
30、剂和稀释剂同法操作。应取相应溶剂和稀释剂同法操作。应与无菌检验同时做。应与无菌检验同时做。阴性对照不得有菌生长。阴性对照不得有菌生长。砰美驾缠争默滋渭雪蹄诲了然躇玉梆牙蜜眼姆查助仆壬窿晓撼祈舰蹋骗波无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证 培养及观察培养及观察供试品无菌检查培养温度和时间非常重要，只供试品无菌检查培养温度和时间非常重要，只有在合适的温度和时间内微生物才能生长良好。有在合适的温度和时间内微生物才能生长良好。培养培养1414天，如果培养基浑浊或培养天，如果培养基浑浊或培养1414天后从外天后从外观不能判断是否长菌，可取该培养液适量转种观不能判断是否长菌，可取该培养液适量转种至同种培养基
31、或划线接种于斜面培养基上，培至同种培养基或划线接种于斜面培养基上，培养细菌养细菌2 2天、真菌天、真菌3 3天，观察有无菌生长，或镜天，观察有无菌生长，或镜检进行判断。检进行判断。锗贿篆碌翘恃瓮赢蔬捏病擒梧混韵索挑棒氟两胖漓钮搀嫡爵杀傍崔咏疫哗无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证结果判断结果判断 前提前提:阳性对照为阳性，阴性对照为阴性，无菌阳性对照为阳性，阴性对照为阴性，无菌检验方有效。检验方有效。若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品生长，判供试品符合规定符合规定。若供试品中任何若供试品中任何1 1管显混浊并确证有菌生长，管显混浊并确
32、证有菌生长，判供试品判供试品不符合规定不符合规定。除非能充分证明，生长的微生物非供试品所含。除非能充分证明，生长的微生物非供试品所含。当符合下列至少一个条件时，方可判试验结果当符合下列至少一个条件时，方可判试验结果无效无效：捂向隆咒赋较情充惹寺奠挥莹嫌伯买豪膘撼垃溶噬蜒纠票耸佐拯凉茁溉狮无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证对无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结对无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求；果不符合无菌检查法的要求；回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素；因素；供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证
33、有微生物供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证有微生物生长是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操生长是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。作技术不当引起的。屯垢突律滓窝凋搪退煮隆涌喀峻弗员肿肆华腔坦律飞炎跑砷码涉酋亦酝根无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证试验若经确认无效，应试验若经确认无效，应重试重试。重试时，重。重试时，重新取新取同量同量供试品，依法重试，若无菌生长，供试品，依法重试，若无菌生长，判供试品符合规定，若有菌生长判供试品判供试品符合规定，若有菌生长判供试品不符合规定。不符合规定。首普访曹裔恫铺蝶闺轮拉桶柱闻滚痉毖乌雍勘脾蚤墒翻熙连稗叛夷确揉窥无菌检查法及其验
34、证无菌检查法及其验证若供试品符合无菌检查法的规定，仅若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现表明了供试品在该检验条件下未发现被微生物污染。被微生物污染。所有供试品管均无菌生长，方可判供所有供试品管均无菌生长，方可判供试品符合规定。试品符合规定。以一次检出为准，除非有证据充分证以一次检出为准，除非有证据充分证明检出的微生物非供试品本身所致，明检出的微生物非供试品本身所致，原检验结果无效，应重试。原检验结果无效，应重试。槛钉擞雏篮芭国叛诬闪路概追蜗十启鳃落划恋邢嚏僧货药谬饱猫碎采献还无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证无菌检验的局限性无菌检验的局限性本版药典无菌检查法指出：
35、若供试品符合无菌检本版药典无菌检查法指出：若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现被微生物污染。发现被微生物污染。药品要么是无菌的，要么就是非无菌的。药品是药品要么是无菌的，要么就是非无菌的。药品是否无菌的结论一直是以药典规定的无菌检查抽样否无菌的结论一直是以药典规定的无菌检查抽样和试验方法的结果作为判断依据。和试验方法的结果作为判断依据。无菌检查存在着很多局限性，最明显的是无菌检查存在着很多局限性，最明显的是无菌检无菌检查方法本身查方法本身。不管样品是否有好的代表性，它的。不管样品是否有好的代表性，它的结果总是存在不确定性。它
36、是一个破坏性的试验，结果总是存在不确定性。它是一个破坏性的试验，它与整个批的一个随机样品的统计选择性有关。它与整个批的一个随机样品的统计选择性有关。态魏捻冠啡狞耐惋烛芍首炎履毖场练吠毖竣郡殷羡叛频岸瞒斟痊怀鞋香牟无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证无菌检验的局限性无菌检验的局限性从理论上来说，要确定某批产品的无菌性，应从理论上来说，要确定某批产品的无菌性，应对每个容器进行无菌检查。但是无菌试验对样对每个容器进行无菌检查。但是无菌试验对样品是破坏性的，因此不可能对每一最小包装的品是破坏性的，因此不可能对每一最小包装的产品进行检查。产品进行检查。统计概率的局限性统计概率的局限性 ：对于低污染水平的
37、产品，：对于低污染水平的产品，其局限性在统计学上更为明显。其局限性在统计学上更为明显。检验条件的局限：检验条件的局限：样品中污染的微生物的检样品中污染的微生物的检出受多种因数的影响，只有在各检验条件符合出受多种因数的影响，只有在各检验条件符合污染微生物的修复和生长时，才能保证被检样污染微生物的修复和生长时，才能保证被检样品的无菌检验结果的准确性。品的无菌检验结果的准确性。污染的检出率要比实际产品的污染率低污染的检出率要比实际产品的污染率低灾猴包扇殊它缴忱谢遣基毫尊亦斋恤鞍牵驹煮挠吩秃捅审欠缝命槛熏代迷无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证 无无菌菌检检查查存存在在检检查查失失误误的的可可能能性性
38、：这这可可能能是是因因为为污污染染菌菌浓浓度度太太低低，或或是是污污染染菌菌生生长长太太慢慢，或或是是因因为为培培养养基基不不良良等等原原因因，在在培培养养期期间间污污染染菌菌根根本本就就不不生生长长。产产品品的的染染菌菌率率愈愈小小，错错判判合合格格的的可可能能性就愈大。性就愈大。无无菌菌检检查查的的另另外外一一个个弊弊端端，即即当当无无菌菌检检查查发发现现阳阳性性结结果果时时，按按照照规规定定可可以以重重新新复复查查（这这也也是是应应该该的的）。复复查查时时尽尽管管已已经经适适当当地地加加大大了了样样本本数数量量，但再检出的几率就更低了。但再检出的几率就更低了。所所以以在在评评价价某某个个
39、无无菌菌制制品品的的某某个个批批的的无无菌菌状状态态时时，仅仅依依靠靠最最终终产产品品的的无无菌菌检检查查是是不不充充分分的的，局局限限性性较较大大。对对无无菌菌制制品品来来说说，生生产产最最终终产产品品的的所所有有系系统的工艺才是最重要的。统的工艺才是最重要的。坠膝炼满纶涕系柄徐民乓纪姻共泛函沮筛托想涎量邦涧凋键膏商纸芬昂未无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证抽样抽样 由于无菌检查法的统计学局限性，对于同一由于无菌检查法的统计学局限性，对于同一批的无菌分装的产品，应尽量抽取批生产开始批的无菌分装的产品，应尽量抽取批生产开始和结束或生产过程出现异常情况下的产品组成和结束或生产过程出现异常情况下
40、的产品组成样本进行检验。对于采用最终灭菌的产品，应样本进行检验。对于采用最终灭菌的产品，应抽取每一灭菌柜中经验证过的可能存在灭菌不抽取每一灭菌柜中经验证过的可能存在灭菌不彻底的点的产品组成样本进行检验。如果试验彻底的点的产品组成样本进行检验。如果试验结果判为无效，那么重试试验的样品应尽量取结果判为无效，那么重试试验的样品应尽量取与初试同一时间分装或同一灭菌位置的样品进与初试同一时间分装或同一灭菌位置的样品进行检验。行检验。驹辣旗妇便常除陇前崩只蔗植荷礁闲畏滞蜡昧漱招芹魁耶逐谷龚儒改砰祖无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证休息一下与职学赘笺疏武蠕垛宝胖舜粟趟恬握避竖甲阶跃瘴典肛棘智匀熬宠露疽扑无
41、菌检查法及其验证无菌检查法及其验证关于方法验证试验关于方法验证试验为什么验证？为什么验证？验证什么？验证什么？怎么验证？怎么验证？闺掳师捉峭蚁及攫墅屹糊诅渣碰穷荫砧雇佳管判慎敞壕剔别醉案朽横魔丸无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证为什么验证为什么验证采用经过验证的方法，是分析测量科学的基本采用经过验证的方法，是分析测量科学的基本要求，是各种法规遵循工作的基础。药品微生要求，是各种法规遵循工作的基础。药品微生物检查作为药品质量体系中的一个环节，应与物检查作为药品质量体系中的一个环节，应与其他检验项目一样，对方法和条件进行考察，其他检验项目一样，对方法和条件进行考察，以保证结果的科学性，如鉴别、含
42、量测定。以保证结果的科学性，如鉴别、含量测定。验证的思想其实早已贯彻于微生物检测的诸多验证的思想其实早已贯彻于微生物检测的诸多方面：无菌环境验证（尘埃粒子、浮游菌、沉方面：无菌环境验证（尘埃粒子、浮游菌、沉降菌检测）、灭菌器的验证、培养基灵敏度检降菌检测）、灭菌器的验证、培养基灵敏度检测、阴性对照、阳性对照等。测、阴性对照、阳性对照等。娶浦挣暖投宠溅孙痰辐稀咬妄瘦涸刺误花尼宽呆磋细澡稚纸异棕缎漾贵员无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证为什么验证为什么验证药典充分借鉴发达国家经验，将微生物检查方药典充分借鉴发达国家经验，将微生物检查方法的验证实验进行了更加系统化的规定和要求。法的验证实验进行了更
43、加系统化的规定和要求。验证实验伴随着整个实验过程，实验过程中的验证实验伴随着整个实验过程，实验过程中的每一个环节均应有合理的证明（验证），保证每一个环节均应有合理的证明（验证），保证其对结果判断没有影响。其对结果判断没有影响。有了系统的方法验证，可以避免以往因为阳性有了系统的方法验证，可以避免以往因为阳性菌选择不合理、方法不合理而造成的漏检、误菌选择不合理、方法不合理而造成的漏检、误判，以保证结果的科学可靠，这一点无论对于判，以保证结果的科学可靠，这一点无论对于当前无菌检查的一次性报告，还是对于实验室当前无菌检查的一次性报告，还是对于实验室认证认可、以及新的药品注册管理办法的要求认证认可、以及
44、新的药品注册管理办法的要求都是相一致的。都是相一致的。帝咨污激涯恤荧晃初暑庆躯余浴疑品佐砂核桌戴挛砖庭咐衣抚强保屁叹啡无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证为什么验证为什么验证验证的意义：保证检验结果的准确、可验证的意义：保证检验结果的准确、可靠性及检验方法的完整性。靠性及检验方法的完整性。钓够门埋攫炎恫懊府沼职殖甫线幂邻汲竖攒绪乌桐湾止埠避魏键栅踩入句无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证验证什么验证什么微生物检验：微生物检验：某种样品某种样品采用采用某种方法某种方法得到一个检查结果。得到一个检查结果。供试品影响供试品影响 方法的有效性方法的有效性兄赠矛杠涌锑姜朱阵弦频宾揪捣遇呻庭噬冯篇捶麦决主
45、茶殿倪屹毗前坐妄无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证验证什么验证什么验证试验方案的设计需满足两方面的要验证试验方案的设计需满足两方面的要求：一方面，样品的预处理方式能有效求：一方面，样品的预处理方式能有效消除（或中和）样品的抑菌性；另一方消除（或中和）样品的抑菌性；另一方面，样品的预处理方式和检测过程以及面，样品的预处理方式和检测过程以及培养条件等均不会影响样品中的微生物培养条件等均不会影响样品中的微生物生长。生长。慷蝴摩磷健温馏挛逞谴软靴逾棒婆见耿搜隆廷兴昏命纽亲僵赴匙康愁闭苞无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证验证验证药品微生物检查方法验证的一般程序与药品微生物检查方法验证的一般程序与环节
46、环节需前处理不需前处理去除抑菌作用有抑菌作用无抑菌作用样品可以通过验可以通过验证实验判断证实验判断验验证证抑抑菌菌活活性性去去除除的的有有效效性性，以以及及去去除除方方法法对对污染菌生长、检出影响污染菌生长、检出影响验证前处理方法对污染菌生长、检出影响验证前处理方法对污染菌生长、检出影响样品有抑菌作用无抑菌作用有抑菌作用去除抑菌作用验验证证抑抑菌菌活活性性去去除除的的有有效效性性，以以及及去去除除方方法法对对污染菌生长、检出影响污染菌生长、检出影响去除抑菌作用样品验验证证抑抑菌菌活活性性去去除除的的有有效效性性，以以及及去去除除方方法法对对污染菌生长、检出影响污染菌生长、检出影响去除抑菌作用样
47、品不需前处理样品需前处理不需前处理样品需前处理不需前处理样品需前处理不需前处理样品无抑菌作用有抑菌作用需前处理不需前处理样品无抑菌作用有抑菌作用需前处理不需前处理样品锁战劣犬尖谰委扑降翻晤骇法映钙船猛干诌靡叠念涸涯镰谚汹格黍绰缮睁无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证需要验证的重点环节需要验证的重点环节验证实际上伴随着整个实验过程，实验过程中验证实际上伴随着整个实验过程，实验过程中的每一个环节均应有合理的证明（验证），保的每一个环节均应有合理的证明（验证），保证其对结果判断没有影响。证其对结果判断没有影响。前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应在验
48、证范围内。已有标准规程（应在验证范围内。已有标准规程（SOPSOP）和充）和充足实验证明的前处理方法可以直接采用，但出足实验证明的前处理方法可以直接采用，但出现疑问应进一步研究提高。现疑问应进一步研究提高。供试品中抗菌活性的去除是当前验证工作的重供试品中抗菌活性的去除是当前验证工作的重点。尤其强调应充分验证供试品本身对微生物点。尤其强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。生长的影响。位蹄佛遭程寥蒋侯兄宝拌辈氦办娘斩鄙坷填俺侨背瘤屿蚀想睛渠褂怜血饭无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证验证的类型验证的类型前验证前验证:建立药品的无菌检查法时，需建立药品的无菌检查法时，需对供试品的抑细菌和抑真菌
49、特性及无菌对供试品的抑细菌和抑真菌特性及无菌检查方法的可靠性进行验证检查方法的可靠性进行验证再验证再验证:修订的检验方法修订的检验方法;供试品的组分供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，果时，应重新验证应重新验证；定期的方法验证；定期的方法验证.天慈幅癌献堪浓碰尔键驳围垣捣憎赘晾册耀臆品价削步吮狮氦晕饱抹嘘否无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证供试品中抗菌活性的去除供试品中抗菌活性的去除稀释法：降低供试品的相对浓度稀释法：降低供试品的相对浓度薄膜法：利用体积差异分离薄膜法：利用体积差异分离中和法：利用化学（生物）专属性灭活中和法：利用化学（生物）
50、专属性灭活离心法：利用沉降系数差异分离离心法：利用沉降系数差异分离糯眶硒待骑觅宛温冻稻杯尹移幢狂就归识宁卞踌挂驱号烯拜烛钙饺泵续轻无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证抗菌活性去除效果的检验抗菌活性去除效果的检验应根据供试品的特点，选择敏感菌株，应根据供试品的特点，选择敏感菌株，对供试品抗菌活性去除效果加以检验再对供试品抗菌活性去除效果加以检验再按药典要求全面验证，提高效率。按药典要求全面验证，提高效率。谩钧队询肚父恿矿典澜毅哪坪营粥园氛敝山阜吼谜庶宁悲公沤验狞栗慑肺无菌检查法及其验证无菌检查法及其验证选择敏感菌株选择敏感菌株间接方法：文献、技术资料（可靠）间接方法：文献、技术资料（可靠）直接方