微生物的培养与应用-课件.ppt

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1、一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养1培养基培养基(1)培养基即人们按照培养基即人们按照 ，配制出供其生长繁殖的基质。配制出供其生长繁殖的基质。(2)按物理状态，可将培养基划分为按物理状态，可将培养基划分为 培养基和培养基和 培培养基养基(如琼脂培养基如琼脂培养基)。（3）按功能，可将培养基划分为按功能，可将培养基划分为 培养基培养基和和 培养基培养基(如琼脂培养基如琼脂培养基)。(4)培养基一般都含有的成分是：培养基一般都含有的成分是：，在此基础上还需满足微生物生长对在此基础上还需满足微生物生长对 的需求。的需求。微生物对营养物质的不同需求微生物对营养物质的不同需求液体液体固体固体水

2、、碳源、氮源和无机盐水、碳源、氮源和无机盐pH、特殊营养物质、特殊营养物质及氧气及氧气选择选择鉴别鉴别2消毒和灭菌消毒和灭菌项项目目消毒消毒灭灭菌菌条件条件使用使用 的理的理化方法化方法使用使用 的理化因素的理化因素结结果果杀杀死物体表面或内部死物体表面或内部杀杀死物体内外死物体内外较为较为温和温和强强烈烈一部分一部分对对人体有害的人体有害的微生物微生物(不包括芽不包括芽孢孢和和孢孢子子)所有的所有的微生物，包括芽微生物，包括芽孢孢和和孢孢子子项项目目消毒消毒灭灭菌菌适用适用实验操作的空间、操作者实验操作的空间、操作者的衣着和手的衣着和手培养器皿、接种用具培养器皿、接种用具和培养基等和培养基等

3、常用常用方法方法 消毒法，消毒法，消消毒法，酒精、毒法，酒精、氯氯气、石炭气、石炭酸等化学酸等化学试剂试剂消毒法消毒法 灭灭菌、菌、灭灭菌、菌、灭灭菌菌煮沸煮沸巴氏巴氏灼灼烧烧干干热热高高压压蒸汽蒸汽3大肠杆菌纯化及菌种保藏大肠杆菌纯化及菌种保藏(1)制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤为：制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤为：称量称量溶化溶化 (2)微生物纯化的原理及方法：微生物纯化的原理及方法：原理：在原理：在 培养基上将细菌稀释或分散成培养基上将细菌稀释或分散成 ，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。方法：方法：，要求无菌操作。，要求

4、无菌操作。计算计算灭菌灭菌固体固体单个细胞单个细胞倒平板倒平板平板划线法、稀释涂布平板法平板划线法、稀释涂布平板法(3)菌种保藏：菌种保藏：短期保存：短期保存：上上4保藏，缺点是菌种保藏，缺点是菌种易被污染或产生变异。易被污染或产生变异。长期保存：采用长期保存：采用 20冷冻箱中保藏。冷冻箱中保藏。固体斜面培养基固体斜面培养基甘油管藏法甘油管藏法二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中，这种物质在把尿素分解成无

5、机物的过程中起起 作用。作用。使用以使用以 为唯一氮源的培养基能促进为唯一氮源的培养基能促进 的的细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生长，细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生长，从而分离出目的菌。从而分离出目的菌。脲酶脲酶催化催化尿素尿素分解尿素分解尿素(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用 。(3)实验流程：土壤取样实验流程：土壤取样 微生物的培微生物的培养与观察养与观察细菌的计数。细菌的计数。稀释涂布稀释涂布平板法平板法制备培养基制备培养基三、分解纤维素的微生物的分离三、分解纤维素的微生物的分离1纤维素酶的组成及作用纤维素酶的组成及作

6、用(1)组成：一种组成：一种 酶，它至少包括三种组分，即酶，它至少包括三种组分，即 。(2)作用：作用：复合复合C1酶、酶、Cx酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶纤维二糖纤维二糖 葡萄糖葡萄糖2筛选方法筛选方法(1)方法：方法：法，即通过是否产生法，即通过是否产生 来筛来筛选选纤维素分解菌。纤维素分解菌。(2)培养基：是以培养基：是以 为唯一碳源的选择培养基。为唯一碳源的选择培养基。3筛选流程筛选流程土壤取样土壤取样 将样品涂布到将样品涂布到 的培养基上的培养基上挑选挑选 的的菌落。菌落。刚果红染色刚果红染色透明圈透明圈纤维素粉纤维素粉选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释鉴别纤维素分解菌鉴别纤维素分解菌

7、产生透明圈产生透明圈考点一考点一微生物的营养与纯化微生物的营养与纯化考情考情解解读读微生物的微生物的营营养、培养基的养、培养基的类类型与功能、培养基型与功能、培养基对对微生物的微生物的选择选择作用及培养基的制作用及培养基的制备备和微生物的和微生物的纯纯化与化与培养是近年高考中生物技培养是近年高考中生物技术实术实践内容的主要践内容的主要题题源，考源，考查频查频率高，率高，题题目灵活，内容丰富。目灵活，内容丰富。做一题做一题例例1如下所示为培养某种微生物的培养基的配方，请回答：如下所示为培养某种微生物的培养基的配方，请回答：成分成分含量含量NaNO3K2HPO4KClMgSO47H2OFeSO4(

8、CH2O)H2O青霉素青霉素3 g1 g05 g05 g001 g30 g1 000 mL01万万单单位位(1)依物理状态，该培依物理状态，该培养基属于养基属于_培培养基；依用途划分，养基；依用途划分，则属于则属于_培养培养基。基。(2)根据培养基的配方根据培养基的配方可判断出，该培养基可判断出，该培养基所培养微生物的同化所培养微生物的同化作用的类型是作用的类型是_，培养的微，培养的微生物可能是生物可能是_ 。液体液体选择选择异养型异养型酵母菌或霉菌酵母菌或霉菌(3)该培养基中的碳源是该培养基中的碳源是_。不论何种培养基，。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要在各成分都溶化后分装前，要进

9、行的是进行的是_ 和和_；倒平板时，一般需；倒平板时，一般需冷却至冷却至_左右，并且要左右，并且要在在_ 附近操作。附近操作。成分成分含量含量NaNO3K2HPO4KClMgSO47H2OFeSO4(CH2O)H2O青霉素青霉素3 g1 g05 g05 g001 g30 g1 000 mL01万万单单位位(CH2O)调整调整pH灭菌灭菌50酒精灯火焰酒精灯火焰(4)若用该培养液培养纤维素若用该培养液培养纤维素分解菌，应除去的物质是分解菌，应除去的物质是_ 至少应加入至少应加入的物质是的物质是_，为检为检测纤维素分解菌的存在与否还测纤维素分解菌的存在与否还应加入应加入_，形，形_色复合物，若产生

10、色复合物，若产生_，则证明有纤维素分解菌存在。则证明有纤维素分解菌存在。成分成分含量含量NaNO3K2HPO4KClMgSO47H2OFeSO4(CH2O)H2O青霉素青霉素3 g1 g05 g05 g001 g30 g1 000 mL01万万单单位位青霉素和青霉素和(CH2O)琼脂和纤维素粉琼脂和纤维素粉刚果红刚果红红红透明圈透明圈归纳小结：归纳小结：1微生物的营养微生物的营养营营养养要素要素含含义义作用作用主要来源主要来源碳源碳源凡能提供所凡能提供所需碳元素的需碳元素的物物质质构成生物体构成生物体细细胞的物胞的物质质和一和一些代些代谢产谢产物，物，有些是异养生有些是异养生物的能源物物的能源

11、物质质无机化合物：无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖有机化合物：糖类类、脂肪酸、花生脂肪酸、花生饼饼粉、粉、石油等石油等营营养养要素要素含含义义作用作用主要来源主要来源氮源氮源凡能提供凡能提供所需氮元所需氮元素的物素的物质质合成蛋白合成蛋白质质、核酸以及含氮核酸以及含氮的代的代谢产谢产物物无机化合物：无机化合物：N2、NH3、铵盐铵盐、硝酸、硝酸盐盐；有机物化合物：尿素、有机物化合物：尿素、牛肉膏、蛋白牛肉膏、蛋白胨胨等等营营养养要素要素含含义义作用作用主要来源主要来源生生长长因子因子生生长长必不可少必不可少的微量有机物的微量有机物酶酶和核酸的和核酸的组组成成分成成分维维生素、氨

12、基生素、氨基酸、碱基等酸、碱基等水和无水和无机机盐盐水不水不仅仅是是优优良溶良溶剂剂，而且可，而且可维维持生物大分子的持生物大分子的稳稳定；无机定；无机盐盐是是细细胞内成分和胞内成分和调节调节物物质质外界外界摄摄入入2 2培养基的种类培养基的种类(1)(1)按物理状态分类：按物理状态分类：培养基种培养基种类类特点特点用途用途液体培养基液体培养基不加凝固不加凝固剂剂工工业业生生产产固体培养基固体培养基加凝固加凝固剂剂(如如琼琼脂脂)微生物分离、微生物分离、鉴鉴定，定，活菌活菌计计数，菌种保藏数，菌种保藏种种类类制制备备方法方法原理原理用途用途举举例例选择选择培培养基养基培养基中加入培养基中加入某

13、些化学物某些化学物质质依据某些微依据某些微生物生物对对某些某些物物质质的抗性的抗性而而设计设计从众多微生从众多微生物中分离所物中分离所需的微生物需的微生物加入青霉素加入青霉素分离得到酵分离得到酵母菌和霉菌母菌和霉菌鉴别鉴别培培养基养基培养基中加入培养基中加入某种指示某种指示剂剂或或化学化学药药品品产产生特定的生特定的颜颜色或其他色或其他变变化化鉴别鉴别不同种不同种类类的微生物的微生物用伊用伊红红美美蓝蓝培养基培养基鉴鉴别别大大肠肠杆菌杆菌(2)按功能分按功能分类类：方法方法平板划平板划线线法法注意注意事事项项(1)接种接种环环的灼的灼烧烧：第一次划第一次划线线前：接种前：接种环环上的微生物，避

14、免上的微生物，避免污污染培养物染培养物每次划每次划线线前：前：杀杀死残留菌种，保死残留菌种，保证证每次划每次划线线菌种来自菌种来自上次划上次划线线末端末端划划线结线结束后：束后：杀杀死残留菌种，避免死残留菌种，避免污污染染环环境和感染操境和感染操作者作者(2)灼灼烧烧接种接种环环之后，要冷却后再之后，要冷却后再进进行操作，以免温度太行操作，以免温度太高高杀杀死菌种死菌种(3)划划线时线时最后一区域不要与第一区域相最后一区域不要与第一区域相连连(4)划划线线用力要大小适当，防止用力用力要大小适当，防止用力过过大将培养基划破大将培养基划破3.3.微生物的纯化培养微生物的纯化培养方法方法稀稀释释涂布

15、平板法涂布平板法注意注意事事项项(1)稀稀释释操作操作时时：每支：每支试试管及其中的管及其中的9 mL水、移液管等水、移液管等均需均需灭灭菌；操作菌；操作时时，试试管口和移液管管口和移液管应应在离火焰在离火焰12处处(2)涂布平板涂布平板时时：涂布器用体涂布器用体积积分数分数为为70%酒精消毒，取出酒精消毒，取出时时，让让多多余酒精在余酒精在烧烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃酒精灯火焰上引燃不要将不要将过热过热的涂布器放在盛放酒精的的涂布器放在盛放酒精的烧烧杯中，以免杯中，以免引燃其中的酒精引燃其中的酒精酒精灯与培养皿距离要合适，移

16、液管管酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头头不要接触不要接触任何物体任何物体通一类通一类1右图是微生物平板划线示意图。右图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为划线的顺序为12345。下列操作。下列操作 方法正确的是方法正确的是()A只需操作前将接种环放在火焰旁灼烧灭菌即可只需操作前将接种环放在火焰旁灼烧灭菌即可B划线操作需在火焰上进行划线操作需在火焰上进行C在在5区域中才可以得到所需菌落区域中才可以得到所需菌落D在在12345区域中画线前后都要对接种环灭菌区域中画线前后都要对接种环灭菌D考点二考点二目标微生物的筛选与培养目标微生物的筛选与培养考情考情解解读读 目目标标微生物的微生物的筛选筛选是

17、微生物是微生物应应用的前提，用的前提，相关技相关技术术广泛广泛应应用于微生物用于微生物实验实验室培养及室培养及发发酵酵工工业业生生产实产实践中，本考点也常作践中，本考点也常作为热为热点内容呈点内容呈现现在各地高考在各地高考试试卷中，考卷中，考查查点着重于点着重于选择选择培养培养基的制基的制备备、目、目标标微生物的分离流程、微生物的分离流程、对对照照实验实验的的设设置等，置等，2014年年备备考考应应格外关注。格外关注。做一题做一题例例2从自然菌样筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集从自然菌样筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样菌样富集培养富集培养纯种分离纯种分离性能测定。性能测定。(1)不

18、同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是 从合适的环境中采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯从合适的环境中采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯 化。培养嗜盐菌的菌样应从化。培养嗜盐菌的菌样应从 _ 环境中采集。环境中采集。(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境 条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养 方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择 _ 的培养基，并在的

19、培养基，并在 _条件下培养。条件下培养。海滩等高盐海滩等高盐以淀粉为唯一碳源以淀粉为唯一碳源高温高温(3)下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。培养的效果图解，请分析接种的具体方法。获得图获得图A效果的接种方法是效果的接种方法是 _ ，获得，获得图图B效果的接种方法是效果的接种方法是 _ 。(4)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 _，接种前要进行，接种前要进行_ ，在整个微生物，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在的分离和培养中，一定要注意在

20、_ 条件下进行。条件下进行。稀释涂布平板法稀释涂布平板法平板划线法平板划线法pH调整调整高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌无菌无菌1归纳几种典型微生物的筛选方法归纳几种典型微生物的筛选方法(1)培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。(2)培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。(3)培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。固氮微生物不能在此培养基上生存。(4)当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有当培养基的某种营养成

21、分为特定化学成分时，也具有分离效果。如当石油是唯一碳源时，可以抑制不能利分离效果。如当石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。(5)改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。的微生物。2微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用对对照

22、照组组作用作用现现象象结论结论未接种未接种培养基培养基有无有无杂杂菌菌污污染的判断染的判断未接种的培养皿中未接种的培养皿中无菌落生无菌落生长长未被未被杂杂菌菌污污染染接种的接种的牛肉膏牛肉膏蛋白蛋白胨胨培养基培养基选择选择培养基培养基筛选筛选作用的作用的确确认认牛肉膏培养基上的牛肉膏培养基上的菌落数大于菌落数大于选择选择培培养基上的数目养基上的数目选择选择培培养基具养基具有有筛选筛选作用作用关键一点关键一点即使使用了选择培养基，所得到的微生物也即使使用了选择培养基，所得到的微生物也未必全为未必全为“目标微生物目标微生物”，因此，常需对选择培养基中菌落，因此，常需对选择培养基中菌落作进一步鉴定。

23、作进一步鉴定。2下表为培养某种微生物的培养基配方，下列相关叙述下表为培养某种微生物的培养基配方，下列相关叙述错误的是错误的是()成分成分NaNO3K2HPO4KClMgSO47H2OFeSO4(CH2O)H2O青霉青霉素素含量含量3 g1 g0.5 g0.5 g0.01 g30 g1 000 mL0.1万万单单位位A依物理性质划分，该培养基属于液体培养基依物理性质划分，该培养基属于液体培养基B依用途划分，该培养基属于选择培养基依用途划分，该培养基属于选择培养基C培养基中的唯一碳源是培养基中的唯一碳源是(CH2O)，唯，唯 一氮源是一氮源是NaNO3D若用该培养基培养纤维素分解菌，则应除去若用该

24、培养基培养纤维素分解菌，则应除去(CH2O)，再添加纤维素再添加纤维素D3苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着能降着能降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，为土壤样品。下为土壤样品。下列相关叙述错误的是列相关叙述错误的是 ()A图中图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源培养目

25、的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B如果要测定如果要测定中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C若图中若图中为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源D使用平板划线法可以在使用平板划线法可以在上获得单菌落上获得单菌落C考点三考点三微生物的数量测定微生物的数量测定考情考情解解读读本考点内容在生物技本考点内容在生物技术实术实践中占有比践中占有比较较重重要的地位，有关特定微生物的数量要的地位，有关特定微生物的数量测测定广泛定广泛应应用于食品及水用于食品及水质检测质检测等等实实践中，具重要的践中，具重要的应应用用价价值值，近年高考

26、常将微生物，近年高考常将微生物计计数与微生物培养数与微生物培养及及筛选综筛选综合命合命题题，故，故2014年年备备考仍需重点关注。考仍需重点关注。(1)(1)显微镜直接计数法：显微镜直接计数法：原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。方法：用计数板计数。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。缺点：不能区分死菌与活菌。(2)(2)间接计数法间接计数法(活菌计数法活菌计数法)：原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长

27、的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株数(C CV V)M M，其中，其中，C C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V V代表涂布代表涂布平板时所用的稀释液的体积平板时所用的稀释液的体积(mLmL)，M M代表稀释倍数。代表稀释倍数。操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果

28、准确，一般选择菌落数在同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在3030300 300 的平的平板进行计数。板进行计数。血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。物的计数就在计数室中进行。一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格,每一个大方格

29、中的小方格数，即1625=400小方格。每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为01mm，所以计数室的容积为01mm3。右右下下、左上左上右上右上中央格左左下下 在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上得每个中方格的平均值，再乘上2525，就得出一个大方，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成格中的总菌数，然后再换算成1ml1ml菌液中的总菌数。菌液中的总菌数。设五个中方格中总菌数为设五个中方格中总菌数为A A，菌液稀释倍数，菌液稀释倍数为为B B，那么，那么，1

30、1ml样液样液的总菌数的总菌数因1ml=1cm3=1000mm3 =50000AB（个）例例3急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌和病毒通过消化急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌和病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题：有关的问题：(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀 释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固释，然后将不同稀释度的水

31、样用涂布器分别涂布到琼脂固 体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为 _。在下面所示的四种菌。在下面所示的四种菌 落分布图中，不可能是用该方法得到的是落分布图中，不可能是用该方法得到的是_。稀释涂布平板法稀释涂布平板法(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？_。为什么？。为什么？_。(3)如分别取如分别取0.1 mL已稀释已稀释103倍的水样分别涂布到三个琼脂倍的水样分别涂布到三个琼脂 固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌

32、的菌落数分别为落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为，则每升原水样中大肠杆菌数为 _。需要需要 因为需要判断培养基是否被杂菌污染因为需要判断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格培养基灭菌是否合格)5.6108(4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？待检水样中是否含有大肠杆菌？通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，

33、塞上塞子，入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于混匀后置于37恒温箱培养恒温箱培养24 h。若试管内有气泡生成，。若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌则说明水样中有大肠杆菌 课堂练习课堂练习(1)(1)根据物理状态的不同，培养基只有液体培养基和固根据物理状态的不同，培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型。体培养基两种类型。()(2)(2)培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分。成分。()(3)(3)在配制培养基时，除满足营养需求外，还应考虑在配制培养基时，除满足营养需求外，还应考虑pHpH、O O2 2及特殊营养

34、物质的需求。及特殊营养物质的需求。()(4)(4)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。()(5)(5)筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源。筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源。()(6)(6)统计样品中的活菌一般用平板划线法。统计样品中的活菌一般用平板划线法。()(7)(7)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌。示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌。()(8)(8)刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。刚果红能与培养基中的纤维素形成红

35、色复合物。()(9)(9)纤维素酶只包括三种组分：纤维素酶只包括三种组分：C C1 1酶、酶、C Cx x酶和葡萄糖苷酶。酶和葡萄糖苷酶。()(10)(10)筛选分解纤维素的微生物的培养基中是以纤维素为唯筛选分解纤维素的微生物的培养基中是以纤维素为唯一碳源的选择培养基。一碳源的选择培养基。()二、在回顾教材图表中强化学科能力二、在回顾教材图表中强化学科能力下表为筛选分解尿素细菌的培养基，据此回答问题：下表为筛选分解尿素细菌的培养基，据此回答问题：(1)(1)在该培养基中尿素的作用是什么？琼脂的作用是什么在该培养基中尿素的作用是什么？琼脂的作用是什么？答案：尿素作唯一氮源，起选择作用；琼脂作为凝

36、固剂，答案：尿素作唯一氮源，起选择作用；琼脂作为凝固剂，用于制备固体培养基。用于制备固体培养基。(2)(2)对筛选出的细菌要进行进一步的鉴定，如何鉴定？对筛选出的细菌要进行进一步的鉴定，如何鉴定？答案：在培养基中再加入酚红指示剂，培养细菌后，答案：在培养基中再加入酚红指示剂，培养细菌后，pHpH升升高，指示剂将变红。高，指示剂将变红。例例11用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时时 ()可以用相同的培养基可以用相同的培养基都需要使用接种针进行接种都需要使用接种针进行接种都需要在火焰旁进行接种都需要在火焰旁进行接种都可以用来计数活菌都可以用来计数活菌A

37、 A B BC C D DC 例例22(2012(2012海淀期中海淀期中)从土壤中分离以尿素为氮源从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，下列实验操作不正确的的细菌，下列实验操作不正确的 ()A A将土壤用无菌水稀释，制备将土壤用无菌水稀释，制备10103 310105 5土壤稀释液土壤稀释液 B B将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上将不同浓度的土壤稀释液涂布于不同平板上 C C用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的用加入刚果红指示剂的选择培养基筛选分解尿素的细菌细菌 D D从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的从周围出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株菌株C1 1除了高温加热以外，其他灭菌方法还有除了高温加热以外，其他灭菌方法还有 ()A A紫外线照射紫外线照射B B真空包装真空包装C C用保鲜膜密闭用保鲜膜密闭 D D添加防腐剂添加防腐剂A A2 2细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌杂菌 ()A A接种环、手、培养基接种环、手、培养基 B B高压锅、手、接种环高压锅、手、接种环C C培养基、手、接种环培养基、手、接种环 D D接种环、手、高压锅接种环、手、高压锅C