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1、ICS 07.060 A 45 DB35 福建省地方标准 DB35/T 17932018 海水中缩二脲的测定 分光光度法和液相色谱-串联质谱法 Determination of biuret in sea water Spectrophotometric method and LC-MS/MS method 2018-11-22 发布 2019-02-22 实施福建省市场监督管理局 发 布 福建省地方标准 海水中缩二脲的测定 分光光度法和液相色谱串联质谱法 DB35/T 17932018*2018 年 11 月第一版 2018 年 11 月第一次印刷 DB35/T 17932018 I 目 次
2、 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 试验方法.1 附录 A（资料性附录）缩二脲的多反应监测（MRM）色谱图和质谱图.6 DB35/T 17932018 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由福建省海洋与渔业局提出并归口。本标准起草单位：莆田市海洋与渔业环境监测站、福建省海洋环境与渔业资源监测中心。本标准主要起草人：张丽、张天闻、周丽、陈金飞、黄东仁、林秋生、林振华、颜志山、李青俞。DB35/T 17932018 1 海水中缩二脲的测定 分光光度法和液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了海水中缩二脲的测定方法：分光光度法和液相色谱-串联
3、质谱法。本标准适用于河口及近岸海水中缩二脲的测定。分光光度法适用于缩二脲含量较高的海水；液相色谱-串联质谱法适用于缩二脲含量较低的海水。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 17378.32007 海洋监测规范 第3部分：样品采集、贮存与运输 3 试验方法 3.1 一般规定 除非另有说明，在分析中使用的化学试剂为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。3.2 分光光度法 3.2.1 方法原理 缩
4、二脲在硫酸铜、酒石酸钾钠的碱性溶液中生成紫红色络合物，在波长为550 nm处测定其吸光值，计算样品中缩二脲的浓度。3.2.2 试剂和溶液 3.2.2.1 氢氧化钠（NaOH）。3.2.2.2 四水合酒石酸钾钠（NaKC4H4O64H2O）。3.2.2.3 五水合硫酸铜（CuSO45H2O）。3.2.2.4 无水碳酸钠（Na2CO3）。3.2.2.5 酒石酸钾钠碱性溶液（100 g/L）：称取 80.0 g 氢氧化钠（3.2.2.1）溶解于 500 mL 水中，冷却后，加入 100 g 酒石酸钾钠（3.2.2.2），待完全溶解后，用水稀释至 1 L，混匀，静置过夜，使用前用定性滤纸过滤。3.2.
5、2.6 硫酸铜溶液（30 g/L）：称取 30 g 硫酸铜（3.2.2.3）溶解于水中，用定性滤纸过滤，用水稀释至 1 L。3.2.2.7 缩二脲（C2H5N3O2）标准物质（CAS：108-19-0）：纯度98.0%。3.2.2.8 缩二脲标准溶液（2 000 mg/L）：准确称取 2.000 g 缩二脲（3.2.2.7）溶解于水，转移至 DB35/T 17932018 2 1 L 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。该标准溶液临用前配制。3.2.3 仪器设备 3.2.3.1 恒温水浴锅：可控温度 30 5。3.2.3.2 分光光度计：可见光分光光度计（具 3 cm 吸收池）。3.2.3.3 分
6、析天平：分度值为 0.000 1 g。3.2.3.4 天平：分度值为 0.01 g。3.2.3.5 定性滤纸。3.2.3.6 玻璃器皿：100 mL 具塞比色管，100 mL 量筒，100 mL 烧杯。3.2.4 样品采集和保存 按照GB 17378.32007执行，采集250 mL海水于棕色具塞玻璃瓶中，于4 下密闭冷藏。3.2.5 分析步骤 3.2.5.1 标准曲线 具体步骤如下：a)分别移取 0 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.50 mL、5.00 mL、10.0 mL、20.0 mL、30.0 mL 缩二脲标准溶液（3.2.2.8），置于 100 mL 比色管中，用适量水稀释
7、。依次加入 10.0 mL 酒石酸钾钠碱性溶液（3.2.2.5）和 10.0 mL 硫酸铜溶液（3.2.2.6），稀释至刻度，摇匀。各比色管中缩二脲浓度依次为 0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L、600 mg/L。b)将上述比色管于 30 5 水浴 20 min，期间多次摇动混匀。水浴后 30 min 内，选 550 nm波长，3 cm 吸收池，以水作参比，测定上述溶液的吸光值Ai，其中零浓度为标准空白吸光值A0。c)以吸光值（AiA0）为纵坐标，相应的缩二脲浓度（mg/L）为横坐标，得线性回归方程。3
8、.2.5.2 样品的测定 具体步骤如下：a)量取 80.0 mL（V1）水样于 100 mL 烧杯中，依次加入 0.15 g 碳酸钠（3.2.2.4）和 0.60 g 氢氧化钠（3.2.2.1），混匀，静置 2 h 后，用定性滤纸过滤；b)将过滤后的水样移入 100 mL 比色管中，依次加入 10.0 mL 酒石酸钾钠碱性溶液（3.2.2.5）和10.0 mL 硫酸铜溶液（3.2.2.6），用水定容至刻度，摇匀。按 3.2.5.1 b）的步骤测定上述溶液的吸光值Aw。3.2.5.3 空白试验 用水，按3.2.5.2的步骤测定分析空白吸光值Ab。3.2.6 结果计算与表示 根据标准曲线线性回归方
9、程计算得测定样中缩二脲的浓度，如式（1）所示。DB35/T 17932018 3 abAACibw .（1）式中：Ci 测定样中缩二脲的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；Aw 测定样的吸光值；Ab 分析空白吸光值；a 标准曲线中的斜率；b 标准曲线中的截距。水样中缩二脲浓度计算如式（2）所示：12VVCCi.（2）式中：Ci 测定样中缩二脲的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；C 水样中缩二脲的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V1 量取水样的体积，单位为毫升（mL）；V2 定容体积，单位为毫升（mL）。3.2.7 精密度和准确度 本方法测定结果的相对标准偏差小于5%，回收率90.0%110%。
10、本方法检出2.00 mg/L，定量限 6.70 mg/L。3.3 液相色谱-串联质谱法 3.3.1 方法原理 水样中的缩二脲经固相萃取柱富集净化，乙腈溶液定容，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。3.3.2 试剂和溶液 3.3.2.1 氮气（雾化气）：纯度99.999%。3.3.2.2 氮气（辅助气）：纯度99%。3.3.2.3 缩二脲（C2H5N3O2）标准物质（CAS：108-19-0）：纯度98.0%。3.3.2.4 乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.3.2.5 冰乙酸（CH3COOH）：优级纯。3.3.2.6 无水乙酸铵（CH3COONH4）优级纯。3.3.2.7 乙酸铵缓冲溶液（0.
11、2 mmol/L）：称取 0.015 4 g 无水乙酸铵（3.3.2.6）溶解于 1 000 mL水中，用冰乙酸（3.3.2.5）调 pH 到 4.0。3.3.2.8 乙腈溶液（4+1）：将 4 体积的乙腈（3.3.2.4）同 1 体积的水混匀。3.3.2.9 缩二脲标准储备溶液（500 mg/L）：准确称取 0.050 0 g 缩二脲（3.3.2.3）溶解于水中，转移至 100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。置 4 冰箱中保存。3.3.2.10 缩二脲标准工作溶液（20 mg/L）：移取缩二脲标准储备溶液（3.3.2.9）2.00 mL 至 50 mL容量瓶中，用乙腈溶液（3.3.2
12、.8）稀释至刻度，摇匀。该标准工作溶液临用前配制。DB35/T 17932018 4 3.3.3 仪器设备 3.3.3.1 分析天平：分度值为 0.000 1 g。3.3.3.2 滤膜：0.45 m 醋酸纤维滤膜。3.3.3.3 pH 计。3.3.3.4 固相萃取柱：Oasis HLB，6 mL，500 mg，或性能相当者。3.3.3.5 固相萃取装置。3.3.3.6 氮气吹干仪。3.3.3.7 针头过滤器：备孔径 0.45 m 有机相滤膜。3.3.3.8 液相色谱串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。3.3.4 样品采集和保存 样品采集和保存按照3.2.4。3.3.5 分析步骤 3.3.5
13、.1 仪器条件 3.3.5.1.1 色谱参考条件 色谱柱：POLARIS NH2柱（2.1 mm100 mm，3.0 m，或性能相当者）；柱温：35；进样量：10 L；流动相：A相乙酸铵缓冲溶液（3.3.2.7）；B相乙腈（3.3.2.4）；等度洗脱，流动相比例AB=4555（V/V），流速：0.2 mL/min。3.3.5.1.2 质谱参考条件 电喷雾电离ESI正离子模式；电喷雾电压：4 000 V；雾化气：氮气（3.3.2.1），30 psi；辅助气：氮气（3.3.2.2），流速10 L/min；加热毛细管温度：300，扫描模式：多反应监测（MRM），母离子 m/z 104，定量子离子m/
14、z 61，定性子离子m/z 44.1；裂解电压：60 V；碰撞能量：m/z 10461为5 eV，m/z 10444.1为38 eV。3.3.5.2 标准曲线 分别移取0.250 mL、0.500 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、5.00 mL缩二脲标准工作溶液（3.3.2.10），置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶液（3.3.2.8）稀释至刻度，摇匀。各容量瓶中缩二脲浓度依次为0.500 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、4.00 mg/L、6.00 mg/L、8.00 mg/L、10.0 mg/L，用液相色谱-串联质谱仪测定。标准溶液色谱
15、图参见附录A。3.3.5.3 样品的测定 具体步骤如下：a)水样用 0.45 m 滤膜过滤，量取 10.0 mL 过滤后的水样，过 HLB 固相萃取柱（过柱前依次用 5 mL 甲醇，5 mL 纯水活化），流速不超过 3 mL/min，弃去流出液，真空状态下将固相萃取柱抽至近干，用 6 mL 乙腈（3.3.2.4）分两次洗脱，流速不超过 2 mL/min；b)将洗脱液收集到 10 mL 具塞玻璃管中，于 60 氮气吹干，用 1.0 mL 乙腈溶液（3.3.2.8）复溶，过 0.45 m 有机相滤膜，用液相色谱-串联质谱仪测定。DB35/T 17932018 5 3.3.5.4 空白试验 用水，按
16、3.3.5.3的步骤测定分析空白。3.3.6 结果计算与表示 采用外标法定量，单位为mg/L。水样中缩二脲浓度计算如式（3）所示：10VVCC .（3）式中：C 水样中缩二脲的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；C0 标准曲线得到的色谱浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V 提取液浓缩后定容体积，单位为毫升（mL）；V1 量取水样的体积，单位为毫升（mL）。3.3.7 精密度与准确度 本方法测定结果的相对标准偏差小于5%，回收率80.0%110%。本方法检出限0.10 mg/L，定量限 0.35 mg/L。3.4 注意事项 本方法执行中应注意如下事项：接触过高浓度样品的样品瓶及器皿需用铬酸洗液浸泡
17、洗涤；缩二脲常温下微溶于水，所以配制缩二脲标准溶液时要适当加热溶解。DB35/T 17932018 6 A A 附 录 A（资料性附录）缩二脲的多反应监测（MRM）色谱图和质谱图 图A.1为缩二脲的多反应监测（MRM）色谱图，图A.2为缩二脲的质谱图。0204060801001.01.53.53.02.5 相对丰度(%)保留时间(min)1.882缩二脲2.0 图A.1 缩二脲的多反应监测（MRM）色谱图 4050607080901001100.02.0 x1034.0 x1036.0 x1038.0 x1031.0 x1041.2x1041.4x104104.061.0丰度质量数44.1 图A.2 缩二脲的质谱图 _