《扫描电镜样品制.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《扫描电镜样品制.ppt（12页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、扫描显微镜（扫描显微镜（SEM）样品的制备）样品的制备一、对样品处理的要求一、对样品处理的要求1.研究样品表面要处理干净2.研究样品必须彻底干燥3.非导体样品的导电处理4.保护样品研究面5.要求标记物要有形态二、样品制备关键步骤二、样品制备关键步骤1.取样、清洗、固定2.脱水3.干燥4.粘样5.样品导电处理一、对样品处理的要求一、对样品处理的要求1.研究样品表面要处理干净研究样品表面要处理干净2.扫描电镜主要是观察样品表3.面形貌和结构，而研究材料表面附4.有附着物，它们将掩盖表面微细结5.构，最终会影响扫描电镜图像的质6.量和分析、解释并且影响图像美观。2.研究样品必须彻底干燥研究样品必须彻
2、底干燥 扫描电镜需在真空条件下正常工作，含水量高的样品会在真空的镜筒中造成影响。因此样品必须经过干燥处理，而且要彻底干燥。在干燥处理的操作中要尽量减少样品表面形貌的变形，但虽然干燥方法从原始的自然干燥、烘干干燥、冷冻干燥、真空干燥到今天的临界点干燥不断进化。但仍存在变形。临界点干燥被视为最理想的干燥方法，但仍存在约5%的变形。附着物蜜蜂触角蚜小蜂并胸腹节3.非导体样品的导电处理非导体样品的导电处理 由于电子束在样品表面作光栅状扫描，如果样品导电性能不好，会在样品上聚集电荷放电，有时会损伤样品，直至烧毁。一般生物样品不导电，因此必须对样品做导电处理，即喷镀一层金属膜，一般膜厚为1020nm。并根
3、据样品表面凹凸粗糙状况及样品性质而变化。有的样品需先喷碳再喷金。4.保护样品研究面保护样品研究面 扫描电镜的主要功能是做表面形貌观察或断面结构观察，所以保护样品表面或断面的细微结构是一个十分重要的问题。在清洗、固定、脱水、干燥、粘台等各个处理环节都不能触及或挤压乃至损伤其观察面。5.要求标记物要有形态要求标记物要有形态 用扫描电镜进行细胞化学研究时，要求标记物应具有一定的形态，以便让扫描电镜可以识别。取样取样切片漂白乙醇离心清洗冰醋酸浸泡水浴熏蒸固定冷冻割断扫描电镜观察清洗清洗镀膜镀膜脱水脱水清洗后固定前固定固定粘样粘样干燥干燥脱蜡导电处理切片包埋粘台晾干或烘干线路10线路1线路2线路3线路6
4、线路7线路8线路9线路5线路4二、样品制备程序图二、样品制备程序图1.取样、清洗、固定取样、清洗、固定取样 因研究目的不同，对取样很难做一般的叙述和统一的要求，但应注意：注意研究目的对样品具有针对性，避免盲目取样；注意研究目的的典型性，即所取样品应该要有研究的具体对象。粗样清洗 清洗时针对研究目的和样品性质以及污染物的性质选用不同的清洗液和清洗方法。清洗液：常用的有蒸馏水、生理盐水、各种缓冲液等。特殊的有蛋白分解酶、氯仿、二甲苯、加酶缓冲液等。样品固定（1）固定的目的及要求采用化学或物理方法，快速快速而准确准确地（不失真）把研究样品的结构（包括内部结构）或表面形貌依原样（如生活时的状态)保存下
5、来，这就是固定。（2）固定剂醛类：戊二醛戊二醛、甲醛四氧化锇（3）固定方法单固定：戊二醛单固定 、锇酸熏蒸固定戊二醛锇酸双固定戊二醛锇酸微波固定甲醛固定注意注意：固定温度04，若样品较大可为510。固定时间不尽相同，一般戊二醛固定时间稍长些，锇酸固定时间不宜过长。固定液浸没样品。戊二醛单固定（绞股蓝上下表皮）1%锇酸熏蒸固定（真菌菌丝）2、脱水、脱水（1）目的：用脱水剂取代样品中的游离水，以便进行干燥处理。（2）脱水剂：乙醇、丙酮、叔丁醇、乙腈、六甲基二硅烷胺、正丁醇等。（3）脱水原理：用一种低表面张力的有机溶剂代换组织细胞中的游离水，使样品在干燥时表面张力减少。（4）对脱水的要求：不能引起结
6、构变形；脱水要彻底。（5）脱水方法：酒精脱水：将固定好的样品用0.1mol/l磷酸缓冲溶液或蒸馏水清洗三次，每次510min。将样品依次置于系列浓度30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%的酒精中脱水置换，时间一般为每级1015min。叔丁醇脱水:将固定好的样品用0.1mol/l磷酸缓冲溶液或蒸馏水清洗三次，每次510min。用系列浓度50%、70%、80%、90%、95%、100%的叔丁醇中脱水，再一次100%置换，每级大约1015min。3、干燥、干燥（1）干燥要求：首先无变形干燥，以保证样品干燥后体积和结构都不变形，其次是必须干燥彻底。（2）干燥方法：临界点干燥法、自然干
7、燥法、冷冻干燥法、叔丁醇干燥法、六甲基二硅胺烷干燥法、乙腈干燥法、烘干干燥法、氮气干燥法、微波干燥法。不同干燥法扫描电镜图像（蚜虫前胸背板）分别为临界点干燥法、自然干燥法、微波干燥法、氮气干燥法叔丁醇干燥法、乙腈干燥法烘干干燥法（淀粉粒）4、粘样粘样（1）目的：保证样品在样品台上不移动，不掉落，尤其是作倾斜、旋转观察使不掉落。用导电胶粘样，能增加样品和样品台之间的导电性，使样品上聚集的二次电子能通过导电胶传输到样品台上，而不发生电荷积累。（2）粘贴样品的材料：粘贴动植物组织块样品最好使用导电胶，常用的有银河粉、石墨粉等导电胶，对于要镀金观察的样品，通常用双面胶粘样；果壳、种子等较大的样品可采用
8、普通胶水粘样，注意等胶水自然干燥后装样。（3）注意事项：粘贴样品需注意观察面朝上，并尽可能在水平面的同一高度上，操作时要注意防尘、防潮和防止易飞散样品的相互混杂。5、样品的导电处理、样品的导电处理（1）金属镀膜法：真空蒸汽喷镀、离子溅射喷镀：原理：产生离子束的独立装置被称为离子枪，它提供一定的束流强度、一定能量的Ar离子流。离子束以一定的入射角度轰击靶材并溅射出其表层的原子，后者沉积到衬底表面即形成薄膜。在靶材不导电的情况下，需要在离子枪外或是在靶材的表面附近，用直接对离子束提供电子的方法，中和离子束所携带的电荷。（2）导电染色法 离子溅射喷镀仪参考文献：参考文献：1.郭素枝郭素枝.扫描电镜技术及其应用扫描电镜技术及其应用.厦门大学出版社厦门大学出版社,2006（2）：）：74962.付洪兰付洪兰.实用电子显微镜技术实用电子显微镜技术.高等教育社出版，高等教育社出版，2004（7）：）：1761873.百度百科百度百科