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1、细胞生物物学实验验手册前 言言这本实验验教材是是为高等等医学院院校细胞胞生物学学教学编编写的，适适用于五五年制本本科、七七年制临床专业业和研究究生班。细胞生物物学实验验课的教教学目的的，主要要是通过过基本技技能训练练以及观观察分析析实验结结果，使使学生了解解并掌握握有关的的实验技技术原理理和操作作方法，进进而培养养学生动动手实践践、观察察分析和和解决问题的的能力。为为达到此此目的，实实验内容容自成体体系，着着眼于加加强学生生的基末末技能训训练，以以及观察分析析问题和和科学思思维能力力的培养养。大多多数实验验采用生生活细胞胞材料，由由学生自自己动手手取材和实验验，使学学生能对对细胞获获得生动动的
2、认识识。选编编了一些些生物医医学常用用的细胞胞生物学学基本实验，如如细胞的的显微测测量、细细胞活力力测定、细细胞计数数、细胞胞组分的的分级分分离、细细胞组分分的化学反应、细细胞生理理活动、细细胞染色色体技术术、细胞胞培养、细细胞融合合、免疫疫荧光技技术、电电镜技术术等，为后后续的课课程及医医学研究究打下一一定基础础。全书内容容共233个实验验，五年年制本科科、七年年制医学学专业和和研究生生班教学学根据具具体情况况选择基本本实验，由由学生自自己动手手操作，少少数应用用大型精精密仪器器的实验验进行参参观示教教，另附附实验报告告一册。本教材由由王芸庆庆主编、谢谢荣林副副主编，参参加编写写的有陈陈兴、
3、谢谢荣林、宁宁刚、刘刘冬杰、黄黄东阳、纪纪晓辉、时时伟红、朱朱亚勤、黄黄集前、王王明武、毕毕卫真、张张婕、三三维琴和和王世藩藩。荆永永显、李李虹、王王序绘制制插图，毕毕卫真负负责印刷刷出版事事宜。教材初稿稿曾于119899年全全国医学学细胞生生物学实实验课培培训班试试用，参参加该班班的教师师提出许多宝宝贵的经经验及修修改意见见，谨此此致谢。现现在第四四版在119933年第三三版基础础上对部部分实验进行了了补充和和修改，并并增加了了“酸性磷磷酸酶的的显示”实验。由由于经验验不足，水水平有限限，本教教材一定定还有很很多缺点点和错误误，敬请请使用者者批评指指正。目录前言实验室规规则 (1)常用实验验
4、动物了了解和解解剖器械械的使用用 (2)细胞生物物学实验验绘图方方法与要要求（4）实验一动动物细胞胞的基本本形态观观察和显显微测量量（5）实验二线线粒体的的活体染染色及电电镜照片片观察（8）实验三液液泡系的的活体染染色及电电镜照片片观察（10）实验四细细胞中微微丝的染染色及微微丝与细细胞形态态的实验验观察 (11)实验五细细胞器的的光镜切切片和电电镜照片片观察（13）实验六细细胞生理理活动的的观察（16）实验七细细胞组分分的化学学反应（20）实验八细细胞核与与线粒体体的分级级分离（23）实验九细细胞分裂裂的形态态观察（26）实验十正正常细胞胞与肿瘤瘤细胞常常规核型型的标本本制备 (31)实验十
5、一一细胞融融合（36）实验十二二应用细细胞融合合技术制制备染色色体提前前凝集标标本（38）实验十三三培养细细胞的形形态观察察和计数数（40）实验十四四细胞的的原代和和传代培培养（43）实验十五五酸性磷磷酸酶的的显示（46）实验十六六肿瘤细细胞的软软琼脂集集落培养养和测定定（48）实验十七七电镜生生物标本本的制备备及镜下下观察（50）实验十八八整装培培养细胞胞生物膜膜系统的的光镜和和透射电电镜标本本制备与与观察（54）实验十九九免疫荧荧光抗体体法检查查细胞表表面抗原原（56）实验二十十姊妹染染色单体体互换标标本制备备与分析析（58）实验二十十一银染染核仁形形成区的的光镜和和电镜标标本制备备及观察
6、察 (600)实验二十十二染色色体扫描描电镜标标本制备备及观察察（63）实验二十十三细胞胞显微摄摄影（65）附录一离离心机转转数与离离心力的的换算表表（67）附录二溶溶液的配配制（68）主要参考考资料（77）实验室规规则一、遵守守实验纪纪律，按按时到达达实验室室，不得得迟到或或早退。实实验中途途因故需需外出时时应向任任课教师请请假。二、进入入实验室室之前要要换好白白大衣及及拖鞋。三、保持持实验室室安静，不不许在实实验室内内大声喧喧哗及随随意走动动。四、必须须严肃认认真地进进行实验验。实验验期间不不得进行行任何与与实验无无关的活活动。五、实验验室内各各组仪器器及器材材由各组组自已使使用，不不得互
7、相相调换。要要爱护仪仪器、标标本和设设备。如遇遇仪器损损坏或不不灵，应应及时报报告任课课教师，以以便修理理或更换换，不要要自行乱乱修。损坏器材材或设备备者应按按有关规规定进行行赔偿。六、注意意节约实实验材料料、药品品和水、电电等。七、保持持实验室室内清洁洁整齐。实实验结束束后，各各组必须须认真清清理各自自的实验验台面，将将器材清洗后点点清数目目，然后后摆放整整齐。班班级值日日生负责责清扫室室内卫生生，关好好水、电电开关和门、窗窗等，经经教师允允许后方方可离开开实验室室。八、动物物尸体、纸纸片及实实验废物物应放到到指定地地点，不不得随意意乱丢。九、有不不遵守上上述要求求者，任任课老师师将终止止其
8、实验验，并取取消其当当堂实验验成绩。常用实验验动物的的了解和和解剖器器械的使使用一、常用用实验动动物常用的实实验动物物有蟾蜍蜍、小白白鼠、大大白鼠、豚豚鼠、猫猫、兔和和狗等。在在医学实实验中，常常常根据据不同的的实验目目的而选选用不同同的动物物进行实实验研究究。例如如，蟾蜍蜍可以用用于观察察离体心心脏搏动动情况的的实验，小小白鼠常常用于样样本很大大的实验验(如药物物的半数数致死量量的测定定等)，猫常常用于测测定脑内内电位的的实验，而而狗是局局解手术术中常用用的实验验动物。在我们细细胞生物物学实验验中，除除应用培培养细胞胞外，最最常用的的动物是是蟾蜍和和小白鼠鼠，下面面对其特特点及基基本处置置做
9、一简简单的介介绍。蟾蜍 蟾蜍蜍是两栖栖类动物物，由于于其取材材方便，常常用于各各种实验验。其细细胞较哺哺乳类动动物的细细胞大得得多，因因此常用用于观察察细胞形形态的实实验。1雌雄雄鉴别通常雄性性蟾蜍较较雌性的的为小，且且在其前前肢的ll3趾基部部有被称称为婚垫垫的黑疣疣。2捉拿拿及处死死方法：常用捣髓髓法处死死蟾蜍，即即用解剖剖针捣毁毁其脑组组织和脊脊髓。具具体方法法是，左左手握住住蟾蜍的的身体和和四肢，使使其腹部部贴着掌掌心，食食指压住住蟾蜍头头部前端端使其尽尽量腹屈屈。在头头与躯干干之间可可触及一一凹陷(即枕骨骨大孔所所在处)，右手手持解剖剖针直插插入此凹凹陷约ll2mmm，随即即将针尖尖
10、转向头头侧插入入颅腔捣捣毁脑组组织。然然后将解解剖针抽抽回并转转向尾侧侧刺入脊脊椎管内内捣毁其其脊髓。如如此直至至其四肢肢松软，呼呼吸消失失为止。小白鼠 小白白鼠是哺哺乳动物物，是最最为常用用的实验验动物。1捉拿拿方法：将小白鼠鼠放在鼠鼠笼盖铁铁网上，用用右手持持其尾巴巴向后拉拉，小鼠鼠则会尽尽力向前前蹬。用用左手的的拇指和和食指抓抓住其头头顶部皮皮肤，然然后用左左手小指指与手掌掌之间夹夹住其尾尾巴。2处死死方法： 处死死应以安安乐死为为原则，即即使之无无痛苦而而迅速死死亡。常常用的方方法有颈颈椎脱位位法，断断头法和和二氧化化碳吸入入法等。断断头法需需用特殊殊的断头头器，二二氧化碳碳吸入法法则
11、将小小鼠放入入盛有二二氧化碳碳的容器器内即可可。颈椎椎脱位法法的具体体方法是是：左手手拇指和和食指按按住小白白鼠的头头部，左左手捉住住其尾巴巴迅速向向后猛拉拉，使其其颈椎脱脱位而立立即死亡亡。 3给给药方法法： 小自自鼠的给给药途径径有经口口给药、腹腹腔内注注射、尾尾静脉注注射、皮皮下注射射、皮内内注射和和肌肉注注射等。我我们常用用的是腹腹腔注射射。具体体方法是是：左手手捉住小小鼠(如前所所述)，在其其腹正中中线稍外外侧(避开膀膀胱和血血管)用酒精精消毒后后，首先先将注射射针头向向头部方方向刺入入皮下，进进针12mmm后，再再以455角刺穿穿腹部肌肌肉而进进入腹腔腔(刺穿腹腹肌时有有一落空空感
12、)。针头头刺入腹腹腔后切切勿左右右摆动，以以免损伤伤肠管或或肝脏。注注意每次次注入的的液体量量应为00.10.22ml10克体体重。二、常用用手术器器械及操操作方法法：1解剖剖针：用用于挑、刺刺等。常常用来捣捣髓处死死蟾蜍，持持法如执执笔法。2解剖剖刀(即外科科手术刀刀)：用于于各种皮皮肤切口口和组织织切除等等。持法法有执弓弓法与执执笔法两两种。前前者用于于较大力力量切开开较长距距离的坚坚韧的组组织，如如大动物物的皮肤肤切口等等；后者者则用于于小力量量的短距距离切开开，或分分离皮肤肤和肌肉肉等。 3大大剪刀：用于剪剪毛、皮皮肤、皮皮下组织织和肌肉肉等。持持法如图图。4眼科科剪刀：用于剪剪断神经
13、经、血管管、筋膜膜等细软软组织。5眼科科镊子：用于提提取神经经、血管管和筋膜膜等细软软组织。 6钝钝头镊子子：用于于提取脏脏器、组组织等。7有钩钩镊子：用于提提取皮肤肤切口等等。常用手术术器械执手术刀刀的姿势势执手术剪剪的姿势势执手术镊镊的姿势势执手术刀刀、手术术剪、手手术镊的的姿势(张之曾曾编)细胞生物物学实验验绘图方方法与要要求一、在仔仔细观察察的基础础上，选选择典型型结构进进行描绘绘，要求求真实、准准确(注意各各部结构构的比例例关系)。二、用铅铅笔绘图图，线条条要明确确清晰，图图的深浅浅明暗一一律以点点的疏密密来表示示，点要要圆而一一致，不不得涂暗暗影或进进行其它它美术加加工。三、各部部
14、结构名名称要在在一侧引引直线注注明。各各引线要要平行不不得交叉叉。四、每幅幅图的大大小、位位置在纸纸面上必必须安排排得当并并注意纸纸面的整整洁。实验一动动物细胞胞的基本本形态观观察和显显微测量量【实验目目的】制备不同同细胞的的临时制制片，观观察、了了解细胞胞的基本本形态，学学会使用用测微尺尺，通过过测量对对红细胞胞的进化化进行分分析。【实验用用品】一、材料料和标本本蟾蜍一一只，人人血液一一滴。二、器材材和仪器器配有目目镜测微微尺的显显微镜一一台、载载片十张张、盖片片三张、吸吸水纸、手手术器材材一套、解解剖盘一一个、镜镜台测微微尺一个个、小平平皿一个个、牙签签。 三、试试剂 1甲甲苯胺兰兰、1甲
15、基基兰、RRingger氏氏液(两栖类类用)。【实验内内容】一、细胞胞的基本本形态观观察(一)原原理细胞的形形态结构构与功能能相关是是很多细细胞的共共同特点点，在分分化程度度较高的的细胞更更为明显显，这种种合理性性是生物物漫长进进化过程程所形成成的。例例如：具具有收缩缩机能的的肌细胞胞伸展为为细长形形；具有有感受刺刺激和传传导冲动动机能的的神经细细胞有长长短不一一的树枝枝状突起起；游离离的血细细胞为圆圆形、椭椭圆形或或圆饼形形。 不论论细胞的的形状如如何，细细胞的结结构一般般分为三三大部分分：细胞胞膜、细细胞质和和细胞核核。但也也有例外外。例如如：哺乳乳类红细细胞成熟熟时细胞胞核消失失。 (二
16、)观察方方法与结结果1制备备蟾蜍脊脊髓压片片观察脊脊髓前角角运动神神经细胞胞。 取蟾蟾蜍一只只，破坏坏脑和脊脊髓，在在口裂处处剪去头头部，除除去延脑脑，剪开开椎管，可可见乳白白色脊髓髓，取下下脊髓放放在平皿皿内，用用Rinngerr氏液洗洗去血液液后放在在载片上上，剪碎碎。将另另一载片片压在脊脊髓碎块块上，用用力挤压压。将上上面的载载片取下下即可得得到压片片。在压压片上滴滴一滴甲甲苯胺兰兰染液，染染色100分钟，盖盖上盖片片，吸去去多余染染液。在在显微镜镜下观察察，染色色较深的的小细胞胞是神经经胶质细细胞。染染成兰紫紫色的、大大的、有有多个突突起的细细胞是脊脊髓前角角运动神神经细胞胞，胞体体呈
17、三角角形或星星形，中中央有一一个圆形形细胞核核，内有有一个核核仁(参照照照片)。 2蟾蜍骨骨骼肌细细胞的剥剥离与观观察 剪开开蟾蜍腿腿部皮肤肤，剪下下一小块块肌肉，放放在载片片上，用用镊子和和解剖针针剥离肌肌肉块成成为肌束束，继续续剥离，可可得到很很细的肌肌纤维(肌细胞胞)。尽可可能拉直直肌纤维维。在显显微镜下下观察，肌肌细胞为为细长形形，可见见折光不不同的横横纹，每每个肌细细胞有多多个核，分分布于细细胞的周周边(参照照照片)。 3蟾蟾蜍肝脏脏压片的的制备与与观察剪开蟾蜍蜍腹腔，取取一小块块(约23mmm 3)肝放在在平皿内内，用RRingger氏氏液洗净净，用镊镊子轻压压将肝中中的血挤挤出。
18、然然后放在在载片上上，制片片方法同同脊髓压压片。染染色用甲甲基兰。显显微镜下下观察可可见肝细细胞核染染成兰色色，肝细细胞紧密密排列，挤挤成多角角形(参照照照片)。4蟾蜍蜍血涂片片的制备备与观察察 取一一滴蟾蜍蜍血液，靠靠近一端端滴在载载片上将另一一载片的的一端呈呈45角紧贴贴在血滴滴的前缘缘，均匀匀用力向向前推，使使血液在在载片上上形成均均匀的薄薄层。(图l一1)。晾晾干。显显微镜观观察可见见蟾蜍红红细胞为为椭球形形，有核核。白细细胞数目目少，为为圆形。图111血涂片片的制备备 5人血涂涂片的制制备与观观察 取人人血一滴滴，制片片方法同同上。显显微镜观观察可见见人红细细胞为凹凹圆盘形形，无核核
19、。自细细胞数目目少，为为圆形。6人口口腔上皮皮细胞标标本的制制备与观观察用牙签刮刮取口腔腔上皮细细胞均匀匀地涂在在载片上上(不可反反复涂沫沫)，滴一一滴甲苯苯胺兰染染液，染染色5分钟，盖盖上盖片片，吸去去多余染染液。显显微镜下下观察可可见复盖盖口腔表表面的上上皮细胞胞为扁平平椭圆形形，中央央有椭圆圆形核，染染成兰色色。二、测微微尺的使使用(一)原原理测微尺分分目镜测测微尺和和镜台测测微尺，两两尺配合合使用。目目镜测微微尺是一一个放在在目镜像像平面上上的玻璃璃圆片。圆圆片中央央刻有一一条直线线，此线线被分为为若干格格，每格格代表的的长度随随不同物物镜的放放大倍数数而异。因因此，用用前必须须测定。
20、镜镜台测微微尺是在在一个载载片中央央封固的的尺，长长1毫米(110000m)，被被分为1100格格，每格格长度是是10微米米。(二)方方法1将镜镜台测微微尺放在在显微镜镜的载物物台上夹夹好，小小心转动动目镜测测微尺和和移动镜镜台测微微尺使两两尺平行行，记录录镜台测测微尺若若干格所所对应的的目镜测测微尺的的格数(图122)。2按下下式求出出目镜测测微尺每每格代表表的长度度目镜测微微尺每格格代表的的长度(m)=X100三、测量量人口腔腔上皮细细胞 从显显微镜载载物台上上取下镜镜台测微微尺，换换上人口口腔上皮皮细胞标标本，测测量细胞胞、细胞胞核的长长短径。【作业】一、分别别求出使使用低倍倍镜(110
21、X)，高倍倍镜(440X)时目镜镜测微尺尺每格代代表的长长度： 低倍倍镜：目目镜测微微尺每格格代表的的长度= XXlO(m)= m高倍镜：目镜测测微尺每每格代表表的长度度= XlOO(m)= m二、分别别绘制所所观察的的6种细胞胞并注明明基本结结构。 三、计计算蟾蜍蜍红细胞胞的核质质比例。 计算算细胞、细细胞核体体积的公公式： 圆形形 V=4/33r 3(rr为半径径) 椭圆圆形 VV=4/3ab2(a、b为长、短短半径) 核质质比 NND=VVn(VccVnn)(VVn为核核的体积积，Vcc是细胞胞质的体体积)实验二线线粒体(Mittochhonddrioon)的的活体染染色及电电镜照片片观
22、察【实验目目的】掌握一种种活体染染色方法法,了解光光学显微微镜和电电子显微微镜下线线粒体基基本形态态结构。【实验用用品】 一、材材料和标标本兔子子一只、线线粒体的的电镜照照片。 二、器器材和仪仪器显微微镜、手手术器材材一套、解解剖盘、小小平皿、载载片、盖盖片、吸吸水纸、10ml注射器、吸管。三、试剂剂 ll3000詹纳斯斯绿B染液、RRingger氏氏液(哺乳类类用)。【实验内内容】一、兔肝肝细胞线线粒体的的活体染染色 （一）原原理 线粒粒体是细细胞内一一种重要要细胞器器，是细细胞进行行呼吸作作用的场场所。细细胞的各各项活动动所需要要的能量量，主要要是通过过线粒体体呼吸作作用来提提供的。活活体
23、染色色是应用用无毒或或毒性较较小的染染色剂真真实地显显示活细细胞内某某些结构构而又很很少影响响细胞生生命活动动的一种种染色方方法。詹詹纳斯绿绿 B是线线垃体的的专一性性活体染染色剂。线线粒体中中细胞色色素氧化化酶使染染料保持持氧化状状态呈蓝蓝绿色，而而在周围围的细胞胞质中染染料被还还原，成成为无色色状态。 （二）方方法 用空空气栓塞塞处死兔兔子，置置于解剖剖盘内，迅迅速打开开腹腔，取取兔肝边边缘较薄薄的肝组组织一小小块（223mmm3），放放入盛有有Rinngerr氏液的的平皿内内洗去血血液(用镊子子轻压)，用吸吸管吸去去Rinngerr氏液，在在平皿内内加13000詹纳斯斯绿B染液，让让组织
24、块块上表面面露在染染液外面面，使细细胞内线线粒体的的酶系可可进行充充分的氧氧化，这这样才有有利于保保持染料料的氧化化状态，使使线粒体体着色。当当组织块块边缘染染成篮色色时即可可，一般般需要染染30分钟钟。 染色色后，将将组织块块移到载载片上，用用镊子将将组织块块拉碎，就就会有一一些细胞胞或细胞胞群从组组织块脱脱离。 将稍稍大的组组织块去去掉，使使游离的的细胞或或细胞群群留在载载片上，加加一滴RRingger氏氏液，盖盖上盖片片，吸去去多余水水分。(三)结结果显微镜观观察，肝肝细胞质质中许多多线粒体体被染成成蓝绿色色，呈颗颗粒状。二、线粒粒体的光光镜切片片观察用詹纳斯斯绿B染色的的兔肝细细胞光镜
25、镜切片，肝肝细胞中中的线粒粒体呈蓝蓝绿色的的颗粒。三线粒粒体的电电镜照片片观察不同细胞胞中线粒粒体的形形态和数数目不同同。线粒粒体的外外形多样样，如圆圆形、椭椭圆形、哑哑铃形和和杆状。线线粒体的的数目与与细胞类类型和细细胞的生生理状态态有关，线线粒体多多聚集在在细胞生生理功能能旺盛的的区域。 线粒粒体脊的的数目与与分布方方式是多多种多样样的。一一般与线线粒体长长轴垂直直排列，但但也可见见到与线线粒体长长轴平行行排列的的脊。脊脊的横切切面呈囊囊状或管管状。脊脊的数量量与细胞胞呼吸机机能的强强度有很很大关系系。 这有有三张线线粒体超超薄切片片的电镜镜照片：第一张张是小鼠鼠肾小管管上皮细细胞中线线粒
26、体的的电镜照照片，可可见线粒粒体呈椭椭圆形和和杆状，由由双层膜膜包围，内内膜向内内突起成成平板状状脊，脊脊与线粒粒体长轴轴垂直排排列，肾肾小管上上皮细胞胞重吸收收作用需需要能量量，线粒粒体数目目多。第第二张是是恒河猴猴脊髓突突触内线线粒体。可可见线粒粒体体积积小、数数目多，脊脊与线粒粒体呈同同心圆排排列。第第三张是是小鼠睾睾丸间质质细胞线线粒体，线线粒体的的脊为分分支的管管，在照照片上呈呈单层膜膜泡状。【作业】绘制光镜镜下肝细细胞活体体染色所所见的线线粒体及及电镜下下肾小管管上皮细细胞中线线粒体的的形态结结构。(时伟红红编)实验三液液泡系(Vaccuollar sysstemm)的活活体染色色
27、及电镜照照片观察察【实验目目的】掌握一种种活体染染色方法法，了解解光学显显微镜和和电子显显微镜下下液泡系系的基本本形态结结构。【实验用用品】一、 材料和标标本蟾蜍蜍一只，软软骨细胞胞电镜照照片。二、器材材和仪器器光学显显微镜一一台、手手术器材材一套、解解剖盘一一个、载载片、盖盖片、吸吸水纸。三三、试剂剂 ll30000中性性红染液液、Riingeer氏液液(两栖类类用)。【实验内内容】一、蟾蜍蜍胸骨剑剑突软骨骨细胞液液泡系活活体染色色及观察察(一)原原理在动物细细胞内，凡凡是由膜膜所包围围的小泡泡和液泡泡除线粒粒体外都都属于液液泡系，包包括高尔尔基器、溶溶酶体、微微体、消消化泡、自自噬小体体、
28、残体体、胞饮饮液泡和和吞噬泡泡，都是是由一层层单位膜膜包围而而成。软软骨细胞胞内含有有较多的的粗面内内质网和和发达的的高尔基基复合体体，能合合成与分分泌软骨骨粘蛋白白及胶原原纤维等等，因而而液泡系系发达。中性红是是液泡系系特殊的的活体染染色剂，只只将液泡泡系染成成红色，在在细胞处处于生活活状态时时，细胞胞质及核核不被染染色，中中性红染染色可能能与液泡泡中的蛋蛋白有关关。(二)方方法 取一一只蟾蜍蜍，破坏坏脑和脊脊髓，剪剪开胸腔腔，取胸胸骨剑突突软骨最最薄部分分的一小小片，放放在载片片上，滴滴两滴1130000中性性红染液液，染色色8lO分钟钟，用吸吸水纸吸吸去染液液，加一一滴Riingeer氏
29、液液，盖上上盖片，吸吸去多余余Ringger氏氏液。(三)结结果显微镜下下观察，可可见软骨骨细胞为为椭圆形形，细胞胞核周围围有许多多染成玫玫瑰红色色大小小不一的的小泡，即即软骨细细胞液泡泡系。二、大白白鼠胫骺骺软骨细细胞电镜镜照片的的观察 动物物细胞液液泡很小小，即使使是活体体染色也也只能看看出是一一个小点点，为了了进一步步看清液液泡的结结构我们们有必要要观察软软骨细胞胞的电镜镜照片。 大白鼠鼠胫骺骨骨细胞电电镜照片片，细胞胞核与核核仁很清清楚，细细胞质中中有丰富富的粗面面内质网网，液泡泡系发达达，液泡泡由单层层膜包围围，细胞胞周边有有液泡释释放。【作业】绘制光镜镜下软骨骨细胞液液泡系。(时伟
30、红红编)实验四细细胞中的的微丝染染色及微微丝与细胞形形态的实实验观察察【实验目目的】掌握微丝丝的染色色方法，了了解光学学显微镜镜和电子子显微镜镜下微丝丝的基本本形态结结构。【实验用用品】 一、材材料和标标本盖片片培养的的成纤维维细胞三三片。二、器材材和仪器器光学显显微镜一一台、镊镊子一把把、小平平皿六个个、载片片三个、吸吸水纸、37恒温箱。三、试剂剂 PPBS(pH77.2)、2Triitonn XX1000液、M缓冲液液、3戊二二醛固定定液、00.2考马斯斯亮兰染染液、1100gml的细细胞松驰驰素B、DMEEM培养养液。【实验内内容】一、成纤纤维细胞胞微丝的的染色及及其对细细胞松驰驰素B的
31、反应应(一)原原理微丝普遍遍存在于于多种细细胞，对对细胞的的形状和和运动有有一定作作用。细细胞松驰驰素B可与微微丝的亚亚单位肌肌动蛋白白结合，从从而破坏坏微丝，改改变细胞胞的形状状。(二)细细胞松驰驰素B处理成成纤维细细胞与染染色观察察1在平平皿中有有三张成成纤维细细胞贴壁壁生长的的盖片，在在超净工工作台内内将一张张盖片移移入另一一皿中继继续培养养，用作作对照。2在有有两片的的平皿内内加1000gml的细细胞松弛弛素B 4滴继继续培养养半小时时。3. 将将用细胞胞松弛素素B处理过过的两张张盖片取取一张做做染色处处理，另另一张用用培养液液洗五次次（在平平皿内换换五次培培养液，每每次都要要摇动），
32、继继续培养养、观察察。两小小时后细细胞形状状恢复，接接近正常常。 4对对恢复的的盖片与与第一张张没用药药的盖片片一同做做染色处处理。5染色色处理将需染染色的盖盖片放入入盛有PPBS的的平皿内内用吸管管轻轻吹吹洗盖片片，换液液三次，每每次3分钟，洗洗去培养养液。将盖片片移入22Triitonn XX一1000液，置置37恒温箱箱内处理理2030分钟钟，以提提取骨架架以外的的蛋白质质，使骨骨架图像像清晰。立刻将将盖片移移入M一缓冲冲液，换换洗三次次，每次次3分钟。MM一缓冲冲液有稳稳定细胞胞骨架的的作用。 将盖盖片移入入3戊二二醛固定定15分钟钟。 将盖盖片移入入0.22考马马斯亮兰兰染液中中，染
33、色色15分钟钟。然后后小心地地用自来来水冲洗洗，空气气干燥。 (三)结果光镜观察察，微丝丝聚集成成的张力力纤维束束被染成成蓝色。在在没用药药的标本本上，成成纤维细细胞多数数有突起起，微丝丝沿突起起规则排排列；用用细胞松松驰素BB处理的的标本，由由于微丝丝被破坏坏突起缩缩回，多多数细胞胞形状变变圆；用用药处理理后又洗洗去药的的标本，由由于解除除了药的的作用，肌肌动蛋白白重新聚聚台形成成微丝，细细胞形状状恢复正正常。二、丽藻藻细胞内内胞质环环流及其其对细胞胞松弛素素B的反应应 (一)原理丽藻细胞胞大，整整个细胞胞的中央央为大液液泡占据据。靠近近液泡是是一层溶溶胶样流流动的内内质，在在内质与与质膜之
34、之间，为为静止的的外质，其其中含有有叶绿体体。内质质中含有有许多颗颗粒，可可以清楚楚地看到到胞质环环流。在在丽藻细细胞中的的微丝与与胞质环环流有密密切关系系。成束束的微丝丝出现在在外质与与内质接接口(溶胶和和凝胶接接口)并交织织一起，与与环流方方向平行行。用细细胞松弛弛素B处理后后，就可可抑制胞胞质的环环流运动动。 (二)方法 1剪剪下一小小块丽藻藻叶片(12cmm)，置置于载片片上，盖盖上盖片片。 2观观察（阳阳光充足足时效果果较好）。 33再取取一块丽丽藻叶片片，滴一一滴细胞胞松弛素素B，1015分钟钟后盖上上盖片，观观察。 4洗洗去药物物，再观观察。 (三)结果在丽藻内内质中可可以看到到
35、胞质环环流，用用细胞松松弛素BB处理后后，胞质质环流停停止，洗洗去药物物，又出出现胞质质环流。三、微丝丝的电镜镜照片观观察恒河猴脊脊髓内神神经纤维维中微丝丝电镜照照片，可可见微丝丝是实心心结构，直直径58cmm，它均均匀地分分散于细细胞基质质中，或或排列成成束和网网状。【作业】绘出三种种不同情情况下细细胞中微微丝的分分布。(时伟红红编)实验五细细胞器的的光镜切切片和电镜照照片观察察【实验目目的】观察除了了实验二二五以以外的其其它细胞胞器在光光学显微微镜和电电子显微微镜下的的基本形形态结构构。【实验内内容】一、三种种细胞器器的光镜镜切片（一）高高尔基复复合体(Gollgi Commpleex)用
36、镀银法法染色的的豚鼠脊脊神经节节光镜切切片:神经细细胞因合合成运输输大量的的蛋白质质而含有有发达的的内质网网和高尔尔基复合合体，在在低倍镜镜下观察察，神经经节的假假单极细细胞体被被神经束束分隔成成群。神神经细胞胞的胞体体呈圆形形或椭圆圆形。转转换高倍倍镜观察察，细胞胞中央不不着色的的圆形区区为细胞胞核。在在核的周周围有黑黑褐色颗颗粒状或或呈不规规则的条条索状结结构即为为高尔基基复合体体。图5一ll神经节节细胞(示高尔尔基复合合体)(二)尼尼氏小体体(Niisslls Boddy)甲苯胺兰兰染色的的牛脊髓髓涂片，尼尼氏小体体即光镜镜下的粗粗面内质质网。在在低倍镜镜卡观察察，染成成蓝色的的大三角角
37、形、星星形细胞胞就是脊脊髓前角角神经细细胞，染染色较深深的小细细胞为神神经胶质质细胞。转转换高倍倍镜观察察，可见见脊髓前前角神经经细胞的的细胞质质中许多多蓝色颗颗粒或网网状结构构即为尼尼氏小体体。图522 脊脊髓前角角神经细细胞的尼尼氏小体体(三)中中心体(Cenntroosomme)铁苏木素素染色的的马蛔虫虫子宫切切片，在在低倍镜镜下观察察可见许许多受精精卵细胞胞，细胞胞的外面面有卵壳壳，细胞胞与卵壳壳之间的的腔叫卵卵壳腔。在在某些卵卵细胞内内，于核核附近有有圆形的的小粒中心心粒，它它与周围围致密的的细胞质质中心心球，组组成中心心体。转转换高倍倍镜观察察，可见见中心体体的外围围还有星星状的放
38、放射细丝丝即星体体。染色体中中心体图533马蛔虫虫受精卵卵细胞、分分裂中期期(示中心心体)二、六种种细胞器器的电镜镜照片（一）高高尔基复复合体(Gollgi Commpleex)人体胃粘粘膜细胞胞高尔基基复合体体电镜照照片：细细胞质中中有散在在的高尔尔基复合合体，其其结构要要由三部部分组成成：扁平平囊、大大囊泡和和小囊泡泡，它们们共同构构成紧密密重叠的的囊泡结结构。扁扁平囊约约38层，它它们平行行排列，略略弯曲成成弓形。凸凸出的一一侧为形形成面，可可见许多多小囊泡泡，凹入入的一侧侧为成熟熟面，可可见扁平平囊末端端呈球形形膨大，在在分泌细细胞中膨膨大部分分不断脱脱离扁平平囊，形形成分泌泌泡。 (
39、二)内质网网(Enndopplassmicc Reeticculuum)人胃壁细细胞、恒恒河猴脊脊髓前角角运动神神经细胞胞粗面内内质网电电镜照片片：粗面面内质网网在分泌泌蛋白质质的细胞胞中较发发达，在在细胞核核周围可可见有较较密集的的膜层结结构即为为粗面内内质网，它它们大都都呈片状状排列，粗粗面内质质网可与与细胞核核膜相通通连。在在粗面内内质网的的膜外表表面附着着许多小小颗粒，即即核糖体体。人胃粘膜膜盐酸细细胞、小小鼠睾丸丸间质细细胞滑面面内质网网电镜照照片：盐盐酸细胞胞分泌盐盐酸，细细胞中密密集的圆圆泡，无无核糖体体附着即即滑面内内质网，参参加盐酸酸的合成成。小鼠鼠睾丸间间质细胞胞中含有有丰
40、富的的分支管管状滑面面内质网网，合成成固醇类类的雄激激素。 (三)中心粒粒(Ceentrriolle)白血病细细胞的中中心粒电电镜照片片：中心心粒是相相互垂直直的两个个短筒状状小体，从从横切面面看，每每个短简简由9组三联联体微管管组成。 (四)溶酶体体(Lyysossomee)小鼠肝细细胞、人人胃癌细细胞溶酶酶体电镜镜照片：溶酶体体为一层层单位膜膜包围的的囊状结结构。溶溶酶体呈呈球形，质质地均匀匀，吞噬噬性溶酶酶体依结结合物不不同而呈呈不同形形态，溶溶酶体主主要含酸酸性水解解酶。 (五)核糖体体(Riibossomee)小鼠肾细细胞核糖糖体电镜镜照片：核糖体体是由核核糖核酸酸和蛋白白质构成成的
41、大小小亚基组组成的椭椭圆形颗颗粒，附附着于内内质网上上的称附附着核糖糖体，此此外还有有散在于于细胞质质中的游游离核糖糖体，而而多个核核糖体由由mRNNA串连连在一起起叫多聚聚核糖体体。(六)细细胞核(Celll NNuclleuss) 豚鼠鼠肝细胞胞核、人人胃癌细细胞核电电镜照片片：可见见核膜由由双层单单位膜构构成。内内外核膜膜相距一一定的距距离结合合形成核核孔。核核膜外层层也附着着核糖体体并与内内质网相相通。核中的海海绵状球球形结构构就是核核仁，它它由纤维维和颗粒粒构成。在核膜内内面和核核仁四周周，着色色较深的的为异染染色质，其其余着色色较浅的的是常染染色质。三、观察察恒河猴猴脊髓前前角运动
42、动细胞的的电镜照照片，总总结细胞胞的超微微结构照片中是是一个多多角形的的脊髓前前角运动动细胞，细细胞表面面以非常常细的线线条与周周围分界界，就是是细胞膜膜。中央央有圆形形的细胞胞核，核核膜密布布核孔，核核膜内侧侧少量着着色深而而致密的的是异染染色质，色色浅的是是常染色色质。核核中央海海绵状的的一团深深色结构构是核仁仁。细胞胞膜与核核膜之间间为细胞胞质。其其中有许许多膜性性结构形形成扁平平囊状或或管泡状状，密集集成排的的膜上附附有颗粒粒，这就就是粗面面内质网网。分散散于细胞胞质中内内质网间间的许多多圆形或或棒状膜膜结构是是线粒体体。在核核的四周周可见小小泡，扁扁平囊等等集合形形成的高高尔基复复合
43、体。在在细胞质质中还可可见一些些不规则则形的黑黑色致密密结构是是脂褐质质，细胞胞质基质质中分散散存在纤纤细的微微丝和微微管是细细胞骨架架成份。(时伟红红编)实验六细细胞生理理活动的的实验观观察【实验目目的】通过制片片与观察察加深理理解细胞胞的运动动、吞噬噬等生理理活动。【实验用用品】一、材料料和标本本雄性蟾蟾蜍、小小白鼠、l鸡血悬液、6淀粉肉汤、草履虫。二、器材材和仪器器光镜、22ml注注射器、载载玻片、盖盖玻片、解解剖器材材、滴管管、移液液管、试试管、玻玻璃片、黑黑纸。三、试剂剂 00.3台盼兰兰、1刚果果红。【实验内内容】一、细胞胞的吞噬噬活动 (一)原理白细胞是是机体防防御系统统中能游游走的单单位。它它分为粒粒细胞系系、单核核细胞系系、淋巴巴系三类类。它们们有许多多生理功功能，如如游走性性、变形形运动、趋趋化性、吞吞噬异物物等。在在白细胞胞中，以以粒细胞胞、单核核细胞的的吞噬活活动较强强，故称称此二类类细胞为为吞噬细细胞。单单核细胞胞由血液液进入组组织后逐逐渐演变变成巨噬噬细胞。吞吞噬细胞胞主要靠靠吞噬来来处理异异物。吞吞噬细胞胞