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1、江苏农林职业技术学院讲稿 第 8 页 共 8 页第十一讲讲20008220099学年第第二学期期授课内容容第五节酶酶类药物物的生产产第六节糖糖类药物物的生产产授课时数数2教学目标标掌握掌握握药用酶酶的分类类、来源源和生产产方法；糖类药药物的分分类、制制备方法法，以及及透明质质酸生产产工艺。教学重点点药用酶的的分类和和生产方方法；糖糖类药物物的分类类、制备备方法。教学难点点药用酶的的分类教材教具具教学内容容（含教教学步骤骤、时间间分配、教教法学法法、作业业布置等等）导入新课课：生物体内内的各种种生化反反应几乎乎都是在在酶的催催化作用用下进行行的，所所以酶在在生物体体的新陈陈代谢中中起着至至关重要
2、要的作用用。酶的的化学本本质主要要是蛋白白质，有有少量的的核酸具具有酶的的活性，但酶具有特殊的催化功能。Francis1893年第一次发现了木瓜蛋白酶的药用效果。第五节酶酶类药物物一、药用用酶的分分类及应应用（按按用途分分六大类类）1、消化化酶类作用：水水解和消消化食物物中的成成分，如如蛋白质质、糖类类和脂类类等。作作为消化化剂能补补充内源源性消化化酶的不不足，用用于治疗疗消化紊紊乱或促促进消化化。胃蛋白酶酶、多酶酶片（蛋蛋白酶、淀淀粉酶、脂脂肪酶、纤纤维素酶酶）等用用于治疗疗消化不不良、食食欲不振振。2、消炎炎酶类作用：用用于外伤伤、手术术后、关关节炎、副副鼻窦炎炎等伴有有水肿的的炎症，能能
3、抑灭细细菌，促促进渗出出液再吸吸收，达达到消炎炎的目的的。如：溶菌菌酶、某某些蛋白白酶和多多糖水解解酶等。3、与治治疗心脑脑血管疾疾病有关关的酶类类作用：血血液中存存在着相相互拮抗抗的凝血血系统和和抗凝血血系统（纤纤维蛋白白溶解系系统）。在在生理状状态下，血血液中的的凝血酶酶会形成成微量纤纤维蛋白白，沉着着于血管管内壁，但但这些微微量的纤纤维蛋白白又不断断地被激激活了的的纤维蛋蛋白溶解解系统所所溶解，两两者保持持动态平平衡，保保证了血血流畅通通。一旦旦这种平平衡被打打破，血血管腔内内血液就就会发生生凝固或或血液中中的某些些有形成成分相互互黏集形形成固体体块血栓。血血栓的形形成会引引起心、脑脑、
4、肺等等重要器器官缺血血坏死，需需要及时时采取措措施消除除栓塞。如：尿激激酶和纤纤溶酶（临临床上用用于治疗疗血栓）。4、抗肿肿瘤的酶酶类作用：119611年Brroomme发现现L-天冬冬酰胺酶酶具有抗抗肿瘤的的作用。它它能分解解患者血血液中的的L-天冬冬酰胺，抑抑制需要要L-天冬冬酰胺的的肿瘤细细胞的增增殖，正正常细胞胞由于自自身能合合成天冬冬酰胺而而不受影影响，从从而选择择性地抑抑制肿瘤瘤，达到到抗肿瘤瘤的目的的。如：天冬冬酰胺酶酶（抗恶恶性肿瘤瘤、抗白白血病）、神经氨酸苷酶（肿瘤免疫治疗剂）。5、其他他药用酶酶解毒：有有机磷解解毒酶（用用于治疗疗有机磷磷农药中中毒，缓缓解中毒毒症状）青霉素
5、酶酶（能分分解青霉霉素，用用于治疗疗青霉素素引起的的过敏反反应）抗衰老、抗抗辐射：超氧化化物歧化化酶（清清除体内内氧自由由基）细胞色素素C（是参参与呼吸吸链的一一种非常常有效的的电子传传递体，是是组织缺缺氧治疗疗的急救救和辅助助用药）降血压、降降血脂：弹性蛋蛋白酶防踽齿：葡聚糖糖酶二、药用用酶制备备方法1、直接接提取法法工艺包括括：选材材预处理理提取分离纯化。关键：选选择含量量丰富的的动植物物原材料料重点：工工艺简便便、稳定定、成本本低、无无污染、收收率和酶酶比活力力、适于于大规模模生产的的提取纯纯化方法法。2、微生生物发酵酵法工艺包括括：菌种种培养种子培培养发酵发酵液液处理关键：选选育高产产
6、菌株高产菌株株的选育育途径：自然界界筛选，诱变育种，基因工程和细胞工程。3、动植植物细胞胞培养法法如：大蒜蒜细胞进进行培养养来生产产超氧化化物歧化化酶（SSOD），利利用木瓜瓜细胞生生产木瓜瓜凝乳蛋蛋白酶。三、药用用酶的常常用提取取纯化方方法提取方法法1、水溶溶液法盐浓度度：稀盐盐溶液或或缓冲液液；一般般使用等等渗盐溶溶液，如如0.00020.0005mmol/L磷酸酸盐缓冲冲溶液或或0.115mool/LL氯化钠钠溶液。温度：低温下下操作；pH：选择偏偏离等电电点的适适当pHH值。2、有机机溶剂法法【针对对与脂类类结合的的酶，注注意不可可引起变变性】常用的有有机溶剂剂：丁醇醇方法：均相法法；
7、二相法法。3、表面面活性剂剂法【一一种解构构蛋白质质结合力力的方法法】纯化方法法参见蛋蛋白质的的纯化。 4、其其他【蛋蛋白质分分离纯化化中已介介绍】利用溶解解度、分子结结构和大大小、电离性性质、生物功功能专一一性（亲亲合性）不同的纯化方法盐析、凝胶层析、亲和层析、超速离心等。第六节糖糖类药物物的生产产糖除了作作为能量量物质以以外，还还是重要要的信号号分子，细细胞识别别标志。一、糖类类药物的的类型（按按其聚合合的程度度）1、单糖糖及其衍衍生物单糖是糖糖的最小小单位，如如葡萄糖糖、果糖糖、氨基基葡萄糖糖和维生生素C等。衍生物：6-磷酸酸葡萄糖糖，1,6-二二磷酸果果糖，磷磷酸肌醇醇等。2、寡糖糖又
8、称低聚聚糖，由由220个单单糖聚合合而成。如如蔗糖、麦麦芽糖、乳糖、乳乳果糖。3、多糖糖又称多聚聚糖，由由20个以以上单糖糖聚合而而成。如如香菇多多糖、右右旋糖酐酐、甘露露聚糖、茯茯苓多糖糖等。多糖在细细胞内的的存在方方式有游游离型与与结合型型两种。结结合型多多糖有糖糖蛋白、脂脂多糖。在在组织中中，粘多多糖几乎乎没有例例外地与与蛋白质质以共价价结合。二、多糖糖的来源源1、动物物多糖来源于动动物结缔缔组织、细细胞间质质。如：肝素素（抗凝凝血的作作用）、硫硫酸软骨骨素（防防治脉硬硬化和骨骨质增生生）2、植物物多糖主要是一一些中草草药多糖糖。如：黄芪芪多糖、牛牛膝多糖糖、猪苓多多糖、枸枸杞子糖糖缀（
9、zhuu）合物作用：免免疫调节节、抗肿肿瘤、降降血压、抗抗辐射、抗抗突变、抗抗凝血、抗抗血栓等等等。3、微生生物多糖糖来源分为为：细菌菌多糖、真真菌多糖糖和藻类类多糖（本本草纲目目中列列出很多多的食用用菌、食食用藻）分泌类型型分为：胞内多多糖和胞胞外多糖糖三、多糖糖的提取取、分离离纯化与与鉴定1、提取取分离水或盐盐溶液直直接提取取（大部部分）但因大部部粘多糖糖与蛋白白质结合合于细胞胞中，因因此需用用酶解法法或碱解解法使糖糖-蛋白质质间的结结合键断断裂，促促使多糖糖释放。碱解法法多糖与蛋蛋白质结结合的糖糖肽键对对碱不稳稳定，故故可用碱碱解法使使糖与蛋蛋白质分分开。酶解法法理想的工工具酶是是专一性
10、性低的、具具有广泛泛水解作作用的蛋蛋白酶。如：鹿茸茸中酸性性多糖采采用木瓜瓜蛋白酶酶消化法法提取，收收率很高高。2、除杂杂蛋白（游游离蛋白白质）方法：Sevvag法法（氯仿仿）；三氯乙乙酸法；三氟三三氯乙烷烷法。2、多糖糖的纯化化（1）乙乙醇沉淀淀法制备粘多多糖的最最常用手手段，分分级沉淀淀法。（乙乙醇分部部）（2）季季胺盐络络合法粘多糖与与一些阳阳离子表表面活性性剂（如如：十六烷烷基三甲甲基溴化化铵CTTAB和和十六烷烷基氯化化砒啶CCPC等等）能形形成季胺胺盐络合合物。原理：在在低离子子强度的的水溶液液中，这这些季胺胺盐络合合物不溶溶解；在离子子强度大大时，这这种络合合物可以以解离，溶溶解
11、，释释放。（3）离离子交换换层析法法粘多糖由由于具有有酸性基基团（如如糖醛酸酸和各种种硫酸基基），在在溶液中中以聚阴阴离子形形式存在在，因而而可用阴阴离子交交换剂进进行交换换吸附。吸吸附时可可以使用用低盐浓浓度样液液，洗脱脱时可以以逐步提提高盐浓浓度如梯梯度洗脱脱或分步步阶梯洗洗脱。（4）其其他方法法此外，超超滤法、凝凝胶过滤滤层析法法、区带带电泳法法、及金金属络合合法等在在多糖的的分离纯纯化中也也常采用用。3、纯度度鉴定测定所得得组分是是否均一一。方法：功功能团分分析、比比旋光度度、纸色色谱、HHPLCC、高压压电泳等等。四、糖类类药物的的生理活活性多糖是研研究最多多的糖类类药物。（1）增增
12、强机体体免疫力主要表表现为影影响补体体活性，促促进淋巴巴细胞增增殖，激激活或提提高吞噬噬细胞的的功能。增增强机体体的抗炎炎、抗氧氧化和抗抗衰老作作用。（2）抗抗肿瘤通通过增强强机体的的免疫功功能而达达到抗癌癌作用，毒副作用小。（3）抗抗辐射抗抗射线的的损伤，有有抗氧化化、防辐辐射作用用。（4）抗抗凝血肝肝素是天天然抗凝凝剂。（5）抗抗病毒多多糖可以以提高机机体组织织细胞对对细菌，原原虫，病病毒和真真菌感染染的抵抗抗力。（6）其其他作用用类肝素素、硫酸酸软骨素素、小分分子量肝肝素等具具有降血血脂、降降血胆固固醇，抗抗动脉粥粥样硬化化作用，用用于防治治冠心病病和动脉脉硬化。促进细胞DNA，蛋白质的
13、合成，促进细胞的增殖、生长。四、典型型糖类药药物生产产实例透明质酸酸（HAA）（一）来来源和用用途1、来源源存在于动动物的组组织细胞胞间质和和某些某某些细菌菌的荚膜膜中。原料：鸡鸡冠、人人脐带、动动物眼球球。2、用途途：高效效天然保保湿因子子，临床床上作为为填充剂剂。（二）结结构与性性质是一种酸酸性粘多多糖，由由等量的的葡萄糖糖醛酸和和乙酰氨氨基葡萄萄糖组成成。（三）生生产工艺艺组织提取取法细菌发酵酵法组织提取取法：鸡冠预处理碎块提取酶解液过滤滤液沉淀冷冻、绞碎蛋白水解酶硅藻土95%乙醇粗品溶解溶解液除杂蛋白水相酶解酶解液络合0.1M NaClCHCl3链酶蛋白酶1%CPC沉淀解离解离液过滤滤液精滤滤液0.4M NaCl硅藻土0.22m微孔滤膜沉淀沉淀脱水干燥HA精品95%乙醇硅藻土：成分SSiO22，过滤滤材料，助助滤剂和和脱色剂剂。小结：本次课须须掌握药药用酶的的分类、来来源和生生产方法法；糖类类药物的的分类、制制备方法法，以及及透明质质酸生产产工艺。思考题：1、常见见的酶类类药物包包括哪些些种类？2、酶类类药物的的提取纯纯化时应应注意什什么？3、多糖糖的分离离纯化方方法？课后体会会：8