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1、分子生物物学检验验技术教教学大纲纲第一章 原原核生物物基因组组和病毒毒基因组组目的要要求 掌握 基因因的分子子生物学学定义;限制性性片段长长度多态态性的概概念；质质粒的定定义和用用途；操操纵子的的结构熟悉 病毒基基因组和和细菌基基因组的的特点。原原核细胞胞内核酸酸含量、种种类、功功能和组组织结构构的差异异; 了解 转座因因子 大大肠杆菌菌、HIIV和HHBV基基因组特特点 教学时时数 3学学时讲授内内容 基因因的概念念 基基因的生生物学定定义、基基因的分分子生物物学定义义、细胞胞基因组组。 原核核生物和和真核生生物 生物种种类、原原核细胞胞和真核核细胞内内核酸含含量、种种类、功能能的差异异，操
2、纵纵子结构构。 病毒毒基因组组：重叠叠基因 HBBV和HHIV等等病毒的的结构特特点 细菌菌基因纽纽 细细菌染色色体基因因组的结结构特点点;大肠肠杆菌、质质粒。复习思思考题 名词词解释基因、质质粒、断断裂基因因、假基基因、限限制性片片段长度度多态性性、操纵纵子问答题1简述述原核细细胞基因因组特点点。第二章 真核核生物基基因组目的要要求 掌握 真核核生物基基因组的的特点;单拷贝贝序列、中中度重复复序列和和高度重重复序列列的概念念。熟悉：染染色质的的结构和和主要成成分、核核小体是是染色质质的基本本结构单单位。了解 染色体体形态、功功能研究究中所用用术语与与新技术术简介、朊朊病毒。教学时时数 3学学
3、时讲授内内容 真真核生物物学特点点 一一般特点点、C值值矛盾、真真核生物物 DNNA序列列的类型型(单拷拷贝序列列、中度度重复序序列、高高度重复复序列、人人多基因因家族、DDNA指指纹技术术(限制制性片段段长度多多态性)。染色色体的主主要成分分、染色色体的分分型、染染色体疾疾病复习思思考题名词解释释单顺反子子、外显显子、内内含子、CC值矛盾盾、单拷拷贝序列列、中度度重复序序列、高高度重复复序列问答题真核生物物基因组组的特点点。第三章 癌基基因和抑抑瘤基因因目的要要求 掌握 癌基基因和抑抑癌基因因的概念念；癌基基因激活活的机制制熟悉 siss家族、ssrc家家族、mmyc和和mybb家族、PP5
4、3、RRB家族族及其表表达产物物；癌基基因和抑抑癌基因因的检测测了解 肿瘤发发生的步步骤；结结肠癌的的发病步步骤教学时时数 3学学时讲授内内容 肿瘤瘤细胞的的特征 肿瘤瘤病毒和和癌基因因 DDNA肿肿瘤病毒毒和癌基基因;反反转录病病毒和癌癌基因。 肿瘤瘤抑制基基因 肿瘤抑抑制基因因存在的的证据;RB基基因，pp53基基因。 肿瘤瘤形成的的多步骤骤学说 多步步骤学说说的实验验证据;人类直直肠癌和和多步骤骤致癌论论。复习思思考题 名词词解释 癌基基因、肿肿瘤抑制制基因、反反转录病病毒 问答答题 l 简述RRB基因因和p553的功功能。 2.原癌基基因的激激活的机机制第四章 蛋蛋白质组组和蛋白白质组
5、学学目的要要求 掌握 蛋白白质组概概念；二二维电泳泳熟悉 蛋白质质组的研研究范畴畴；研究究蛋白质质组的基基本方法法（如酵酵母双杂杂交、凝凝胶滞后后电泳等等）了解 蛋白质质的数据据库；蛋蛋白质的的医学应应用教学时时数 3学学时讲授内内容 蛋白质组组的概念念和特点点蛋白质组组的研究究范畴蛋白质和和蛋白质质的相互互作用的的研究方方法（酵酵母双杂杂交、噬噬菌体展展示、生生物传感感芯片质质谱、蛋蛋白质定定点诱变变）蛋白质和和核酸相相互作用用的研究究方法（凝凝胶滞后后试验、滤滤膜结合合法、甲甲基化干干扰实验验、DnnaseeI足纹纹分析等等）蛋白质质质点的分分离和鉴鉴定（二二维电泳泳、质谱谱技术等等）蛋白
6、质的的结构分分析蛋白质的的数据库库 复习思思考题概念蛋白质组组、凝胶胶滞后实实验简答题1. 蛋白质和和核酸相相互作用用的研究究方法有有哪些？2. 二维电泳泳的基本本原理是是什么？3. 酵母双杂杂交系统统的原理理第五章 核酸酸的分离离和纯化化目的要要求 掌握 基因因组DNNA的分分离方法法和原理理；质粒粒DNAA分离方方法和原原理；核核酸的浓浓度和纯纯度鉴定定熟悉 核酸酸分离的的基本原原则；RRNA抽抽提；mmRNAA的分离离和纯化化了解 CsCCl-EEB法的的原理 核酸酸的回收收和保存存教学时时数 3学学时讲授内内容 核酸抽提提的原则则核酸的分分离、纯纯化、浓浓缩、洗洗涤核酸的保保存、浓浓度
7、和纯纯度鉴定定（紫外外分光光光度法、荧荧光光度度法）基因组DDNA分分离的原原理，各各试剂的的主要用用途DNA的的回收（DDEAEE纤维素素膜插片片电泳法法；电泳泳洗脱法法；低熔熔点琼脂脂糖凝胶胶回收法法）质粒DNNA的提提取和纯纯化（碱碱裂解法法、煮沸沸法）质粒DNNA的纯纯化和回回收RNA的的抽提和和mRNNA的分分离复习思思考题问答题1. 酚-氯仿仿法抽提提基因组组DNAA的原理理2. 质粒制备备的主要要方法是是什么？并阐明明其基本本原理3. 如何鉴定定核酸的的浓度和和纯度第六章 DNNA重组组概述目的要要求 掌握 基因因重组的的主要工工具酶和和它们的的作用；DNAA重组的的主要载载体和
8、它它们各自自的优点点熟悉 克隆和和DNAA重组的的概念、基基因重组组的基本本步骤了解 基因重重组的发发展历史史；重组组DNAA技术意意义教学时时敷 3学学时讲授内内容 分子生物物学简史史、DNNA重组组技术构构建和大大肠杆菌菌转化体体系的建建立;重组DNNA技术术的定义义及步骤骤 重组DDNA技技术定义义重组DNNA技术术基本步步骤 重要的的工具酶酶 限限制性核核酸内切切酶(命命名、分分类、111型限限制酶的的功能、应应用及注注意事项项况）；DNAA聚合酶酶(大肠肠杆菌DDN人聚聚合酶II及其大大片段、TTagDDNA聚聚合酶、反反转录酶酶)。DDNA连连接酶;T4多多核苷酸酸激酶;碱性磷磷酸
9、酶。 主要的的载体：质粒载载体（ppBR3322、ppUC等等）、噬噬菌体载载体、SSV400载体、穿穿梭载体体、反转转录病毒毒载体、人人工染色色体 复习习思考题题名词解释释克隆、基基因重组组、限制制性内切切酶、星星号活力力、异源源同工酶酶、DNNA连接接酶、切切口、缺缺口问答题1. 基因重组组中主要要的工具具酶有哪哪些？它它们的基基本作用用是什么么？2. 什么是限限制性内内切酶？有几种种限制性性内切酶酶？基因因工程中中常使用用的是哪哪一种？为什么么？3. 基因工程程主要的的技术路路线第七章 目的的基因的的获得目的要要求 掌掌握 目的基基因的概概念及用用途;构构建cDDNA文文库的原原理与基基
10、本操作作流程。 熟熟悉 获得目目的基因因的4种种基本方方法。 了了解 基因序序列分析析的双脱脱氧链终终止法的的测序原原理。教学时时数 3学时时讲授内内容 获得目目的基因因的原理理方法 构建建 cDDNA文文库、筛筛选目的的基因(真核 mRNNA的分分离纯化化、反转转录合成成 cDDNA、构构建 ccDNAA文库、筛筛选目的的基因);构建建真核细细胞基因因组文库库筛选目目的基因因(分离离纯化基基因组DDNA、DDNA片片段与载载体的连连接包装装、导入入细胞、筛筛选目的的基因);人工工合成目目的基因因DNAA片段、聚聚合酶链链反应合合成DNNA;其其他方法法。 获得目目的基因因方法的的选择序序列目
11、的的、特点点、设备备条件 目的基基因序列列测定 测定定的意义义、目的的基因测测序方法法(双脱脱氧链终终止法、化化学裂解解法、自自动测序序仪法);长链链 DNNA测序序的策略略(随机机法、嵌嵌套缺夫夫法、引引物延伸伸法）复习思思考题 名词解解释基因组文文库、ccDNAA文库、差差示文库库问答题1.简述述获得目目的基因因的4申申基本方方法及特特点。2.简述述构建真真核细胞胞基因纽纽文库筛筛选目的的基因的的方法。3.试对对各种获获得目的的基因的的方法及及其应用用比较。第八章 重组组体的构构成、导导入和筛筛选目的要要求 掌握 载体体的概念念及特征征;载体体的筛选选标志和和筛选方方法;转转化、转转染、转
12、转导的概概念、感感受态菌菌的概念念、重组组子的鉴鉴定方法法。 熟悉 常用用的质粒粒载体;连接反反应的建建立;CCaCll2法进行行重组子子的转化化。 了解解 噬菌体体的分子子生物学学。教学时时数 3学学时讲授内内容 基因因克隆的的载体 质粒粒载体 (概念念、要求求和种类类);常常用的质质粒载体体及应用用;噬菌菌体载体体 目的的基因与与载体的的连接 连接接的策略略、连接接反应的的建立 重组组子导入入受体、氯氯化钙、电电穿孔法法 重组组子的筛筛选与鉴鉴定 插入片片段长度度鉴定、插插入片段段方法鉴鉴定。复习思思考题 名词词解释 载体体、定向向克隆、多多克隆位位点、TT-A克克隆、转转化、转转染、转转
13、导、感感受态 问答答题 1 如何何对重组组子进行行筛选与与鉴定? 2 简述述目的基基因如何何与载体体进行连连接?第九章 重组体体在宿主主细胞申申的表达达与调控控目的要要求 掌握 启动动子、SSD序列列、增强强子、终终止子、pp因子的的概念和和作用;融合蛋蛋白的概概念以及及表达融融合蛋白白的优点点，真核核细胞表表达元件件，哺乳乳动物基基因转移移的遗传传选择性性标记。 熟悉 Laac、TTac等等元件的的概念与与作用;常见表表达载体体的特点点，Weesteern印印迹杂交交原理。 了解 原核核和真核核生物表表达的区区别;表表达产物物的分离离与纯化化。教学时时数 6学学时讲授内内容 基因表表达概述述
14、、基因因表达的的概念、基基本条件件。 重组休休在原核核细胞中中的表达达 原原核生物物基因表表达的特特点，外外源基因因在原核核细胞中中表达的的重要调调控元件件。 原核细细胞表达达载体简简介；对对外源目目的基因因的要求求。重组体在在真核细细胞中表表达的策策略 哺乳动动物细胞胞表达的的优点及及载体种种类、真真核细胞胞表达元元件，哺哺乳动物物基因转转移的遗遗传选择择性标记记、表位位标记、wwestternn印迹杂杂交原理理。DNA序序列测定定鉴定复习思思考题名词解释释非融合型型表达蛋蛋白、融融合表达达蛋白、包包涵体、SSD序列列问答题1. 真核表达达体系和和原核表表达体系系的主要要区别2. 双脱氧末末
15、端终止止法测序序的原理理第十章 聚合合酶链式式反应及及其在基基因诊断断中的应应用目的要要求 掌握 PCCR反应应的概念念和原理理；PCCR反应应体系的的组成成成分；逆逆转录PPCR原原理和方方法；限限制性片片段长度度多态性性；单链链构象多多态性熟悉 PPCR相相关技术术、荧光光定量PPCR、变变性梯度度凝胶电电泳了解 PPCR技技术在临临床医学学中的应应用教学时时数 6学学时讲授内内容 PCR的的概念 PCRR的原理理（变性性、退火火、延伸伸） PCR反反应体系系的组成成成分（模模板、缓缓冲液、ddNTPP、TaaqE、引引物等）和和主要作作用PCR技技术的实实验室质质量控制制PCR技技术的相
16、相关技术术（逆转转录PCCR、原原位PCCR、定定量PCCR、多多重PCCR、免免疫PCCR、差差异显示示PCRR、PCCR定点点突变等等） PCR产产物的检检测（RRFLPP、ASSO、SSSCPP、DGGGE等等）PCR在在分子诊诊断中的的应用（病病原体检检测、单单基因遗遗传病、多多基因遗遗传病、肿肿瘤、法法医学等等） 复习思思考题名词解释释PCR、RRT-PPCR、RRFLPP、SSSCP问答题1. PCR的的基本原原理是什什么？PPCR反反应体系系中基本本的反应应成分有有哪些？2. PCR产产物的检检测方法法有哪些些？第十一章章 核酸分分子杂交交技术与与应用目的要要求 掌握 杂交交的原
17、理理和基本本过程；原位杂杂交、探探针、融融解温度度的概念念熟悉 影响杂杂交速率率和杂交交稳定性性的因素素；探针针的标记记方法了解 预杂交交和杂交交介质；杂交的的临床应应用教学时时数 3学学时讲授内内容 杂交概念念、杂交交的原理理、融解解温度、分分子杂交交核酸探针针的分类类、探针针标记的的方法（全全程标记记和末端端标记）影响杂交交反应的的因素、杂杂交速率率和杂交交稳定性性的要素素杂交各种种介质的的优缺点点、预杂杂交的作作用和成成分、杂杂交的主主要过程程 杂交信号号检测的的方法固相杂交交（Soouthhernn杂交、NNorttherrn杂交交、原位位杂交、菌菌落杂交交等） 复习思思考题名词解释释
18、分子杂交交、探针针、原位位杂交、融融解温度度、Soouthhernn杂交问答题1. 分子杂交交的探针针的种类类和特点点2. 影响杂交交速率和和杂交稳稳定性的的因素有有哪些？第十二章章 生物芯芯片技术术与应用用目的要要求 掌握 生物物芯片的的概念、生生物芯片片的分类类；熟悉 生物芯芯片的应应用价值值；生物物芯片检检测的基基本过程程了解 芯片和和探针的的制备方方法教学时时数 3学学时讲授内内容 生物芯片片、生物物芯片的的分类生物芯片片的制备备和检测测生物芯片片的医学学应用 复习思思考题名词解释释生物芯片片问答题1. 简述生物物芯片的的医学应应用价值值2. 简述如何何利用生生物芯片片检测单单核苷酸酸
19、多态性性（SNNP）第十三章章 细细胞凋亡亡和检测测技术 目的的要求 掌握握 细细胞周期期、细胞胞增殖和和细胞凋凋亡的基基本概念念及其与与医学研研究、医医学检验的关关系。 熟悉悉 细细胞周期期和细胞胞凋亡的的形态学学和生化化特点;控制点点的概念念。 了解解 细细胞周期期和细胞胞凋亡调调控;细细胞周期期和细胞胞凋亡的的主要研研究手段段。教学肘肘数 3学学时讲授内内容 细胞胞周期 细胞胞周期基基本概念念;周期期申各期期的主要要生化、形形态变化化;控制制点;细胞胞增殖异异常与疾疾病;细细胞周期期调控因因素。 细胞胞凋亡 细胞胞凋亡与与坏死的的比较;凋亡的的形态学学和生化化特征;细胞调调亡异常与疾疾病
20、;凋凋亡的调调控。复习思思考题 名词词解释 细胞胞周期、细细胞周期期控制点点、细胞胞凋亡、细细胞坏死死 问答答题 1. 细胞胞坏死和和凋亡的的区别是是什么? 2. 如何何检测细细胞凋亡亡的情况况。第十四章章 基基因诊断断和基因因治疗目的要要求 掌掌握 基因诊诊断的原原理和诊诊断途径径;基因因治疗的的基本概概念、策策略和三三个基本条件件。 熟悉悉 基基因诊断断的方法法及其应应用;目目的基因因获得的的方法、靶靶细胞选选择 了解解 基基因诊断断在无感感染性疾疾病、遗遗传病和和恶性肿肿瘤中的的应用。 反转转录病毒毒载体的的特点。教学时时数 3学时时讲授内内容 基因因诊断的的定义原原理 基因因诊断的的途径 基因因突变的的检测方方法(限限制性内内切酶谱谱分析、等等位基因因特异性性寡核芋芋酸探针针杂交法法);基基因连锁锁分析的的概念;mRNNA的检检测。基因诊断断的技术术与方法法 核酸分分子杂交交和PCCR技术术 复习思思考题名词解释释基因诊断断、基因因治疗问答题1. 基因诊断断的原理理和诊断断途径2. 如何获得得目的基基因3. 如何选择择载体和和靶细胞胞